稀土氯化鑭增強(qiáng)卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞敏感性的蛋白表達(dá)分析及分子機(jī)制研究

辛佳凌 劉絲蓀

1.新余市人民醫(yī)院,江西 新余 338025；2.南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院,江西 南昌 336000

卵巢癌的死亡率在婦科惡性腫瘤中居于首位，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康[1]。順鉑DDP在卵巢癌的治療中具有重要作用，但長期使用會產(chǎn)生耐藥性，是腫瘤復(fù)發(fā)的原因之一[2]。有研究發(fā)現(xiàn)稀土氯化鑭對腫瘤具有較高的親和性，與順鉑共同作用，逆轉(zhuǎn)順鉑的耐藥性以增強(qiáng)順鉑對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用[3]。本文對氯化鑭增強(qiáng)卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞敏感性的相關(guān)分子機(jī)制進(jìn)行探討，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1方法

1.1.1細(xì)胞培養(yǎng) 將COC1、COC1/DDP(均購自上海奧陸生物科技有限公司)細(xì)胞復(fù)蘇后懸浮于含10%胎牛血清培養(yǎng)基中，37℃、90%濕度、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細(xì)胞，重懸并調(diào)整為1×104/mL，培養(yǎng)24h。

1.1.2MTT法檢測增殖抑制率 上述細(xì)胞，加入0、2、3、4μmol/L氯化鑭(購自美國sigma公司)培養(yǎng)48h，同時(shí)用IC50濃度的DDP聯(lián)合上述濃度氯化鑭培養(yǎng)COC1與COC1/DDP細(xì)胞48h。每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，48h后采用MTT(購自上海碧云天生物工程有限公司)試劑盒測定吸光度值，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，細(xì)胞增殖抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組OD/對照組OD值)×100%。

1.1.3蛋白凝膠電泳檢測蛋白表達(dá)情況 取對數(shù)期COC1/DDP細(xì)胞，制備成濃度為1×106/mL的單細(xì)胞懸液，將其分為空白對照組(正常培養(yǎng))、氯化鑭組(添加4μmol/L氯化鑭)、順鉑組(添加23.08μg/ml順鉑)與氯化鑭+順鉑組(添加4μmol/L氯化鑭+23.08μg/ml順鉑)，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48h，離心取沉淀，PBS洗滌，裂解30min，收集細(xì)胞于1.5mLEP管，離心取上清液，采用BCA蛋白定量法測定蛋白濃度進(jìn)行蛋白凝膠電泳，采用凝膠成像系統(tǒng)分析蛋白表達(dá)量。

2 結(jié) 果

2.1不同濃度氯化鑭對細(xì)胞增殖抑制率的影響 增加DDP前后，氯化鑭對細(xì)胞的增殖抑制率均隨濃度的增加而增強(qiáng)，增加DDP后藥物對細(xì)胞的抑制率明顯升高(均P<0.05)。見表1。

表1 不同濃度氯化鑭對細(xì)胞增殖抑制率的影響

2.2氯化鑭對COC1/DDP細(xì)胞蛋白表達(dá)情況的影響 氯化鑭與DDP均能下調(diào)ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白表達(dá)，且氯化鑭+DDP組下調(diào)程度最大，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 氯化鑭對ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白表達(dá)情況的影響

3 討 論

卵巢癌具有侵襲性強(qiáng)、進(jìn)展迅速與預(yù)后差等特點(diǎn)，在臨床上被發(fā)現(xiàn)時(shí)常常已是晚期，以鉑類為基礎(chǔ)的化療方案是其治療的標(biāo)準(zhǔn)方案。然而長久使用化療藥物，癌細(xì)胞容易出現(xiàn)耐藥性，其亦是化療對患者生命期延長作用不如人意的原因之一。近年來癌細(xì)胞耐藥性成為腫瘤學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。

本研究結(jié)果顯示，增加DDP前后，氯化鑭對細(xì)胞的增殖抑制率均隨濃度的增加而增強(qiáng)，增加DDP后藥物對細(xì)胞的抑制率明顯升高；氯化鑭與DDP均能下調(diào)ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白表達(dá)，且氯化鑭+DDP組下調(diào)程度最大。其機(jī)制可能為ERCC1是調(diào)控信號通路中的重要限速酶之一，可以通過催化DNA鏈間交聯(lián)的修復(fù)，使得DNA損傷得以修復(fù)，從而造成鉑類耐藥；Ki67是細(xì)胞增殖相關(guān)核抗原與惡性腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)均有著密切聯(lián)系；CDK6是細(xì)胞周期的重要調(diào)控因子，能促進(jìn)細(xì)胞周期正向推進(jìn)，并能促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，與腫瘤的發(fā)生進(jìn)展密切相關(guān)；c-Cbl是一種泛素連接酶，能降解多種蛋白質(zhì)。

綜上所述，稀土氯化鑭可下調(diào)ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白表達(dá)，從而提高卵巢癌細(xì)胞對順鉑的敏感性。