響應(yīng)面法優(yōu)化西蘭花種子中異硫氰酸酯的酶解制備工藝

楊 杜，弓小星，王雅杰，郝曉慶，梁軒銘，鞏 強(qiáng)，蘇 銳,

（1.中北大學(xué)化學(xué)工程與技術(shù)學(xué)院，山西太原 030051；2.山西省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，山西太原 030012）

癌癥是威脅人類生命最嚴(yán)重的惡性疾病之一，治療難度大，治療癌癥最有效的舉措是控制其發(fā)生[1]。植物及其天然產(chǎn)物具有防癌抗癌的潛能，多項(xiàng)流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，多食用十字花科蔬菜，如西蘭花、甘藍(lán)、萵苣和白蘿卜等，可以降低患癌的風(fēng)險(xiǎn)[2]。主要原因是十字花科植物中富含重要的次生代謝產(chǎn)物硫代葡萄糖苷（簡(jiǎn)稱硫苷），硫苷在內(nèi)源性黑芥子酶的催化下，先水解成D-葡萄糖和一種不穩(wěn)定的糖苷中間產(chǎn)物，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為活性物質(zhì)包括異硫氰酸酯（Isothiocyanates，ITCs）、硫氰酸鹽、腈、亞硫腈或噁唑烷-2-硫酮等[3-5]，如圖1所示。其中ITCs是一類具有R-N=C=S結(jié)構(gòu)通式的化合物，是II相解毒酶的天然誘導(dǎo)劑，可使致癌物質(zhì)分解，起到抑制癌細(xì)胞增殖的作用，是天然的抗腫瘤活性物質(zhì)[6-8]。除此以外，ITCs還具有抑菌、抗炎、抗氧化等多種生物學(xué)活性，可作為天然抑菌劑、食品添加劑、殺蟲劑以及抗腫瘤藥物等[9-10]，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

目前，制備ITCs的方法主要有化學(xué)合成法和酶法，其中化學(xué)合成法步驟繁瑣，合成率低，且對(duì)環(huán)境不友好[11]。酶法制備是利用十字花科植物中硫代葡萄糖苷-黑芥子酶這一系統(tǒng)[12-13]，從植物體中提取ITCs，具有操作簡(jiǎn)單，環(huán)保安全，產(chǎn)率相對(duì)較高的特點(diǎn)。但酶解產(chǎn)物的形成取決于硫苷的結(jié)構(gòu)以及酶解反應(yīng)條件，主要包括酶解時(shí)間、溫度、壓力、pH和Fe2+的存在。Latte等[14]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)反應(yīng)溶液pH為中性時(shí)，有利于前體GLS水解生成異硫氰酸鹽，但在環(huán)硫特性蛋白（Epithiospecifierprotein，ESP）、Fe2+存在或在酸性條件下，酶解產(chǎn)物會(huì)形成大量的腈類等[15]。Yuan等[16]和Wu等[17]利用十字花科植物內(nèi)源黑芥子酶，采用邊水解邊萃取的方法，考察了酶解時(shí)間、萃取時(shí)間以及金屬離子對(duì)ITCs提取的影響。采用內(nèi)源酶酶解制備ITCs工藝簡(jiǎn)單，但植物中內(nèi)源黑芥子酶不能完全釋放，導(dǎo)致酶解時(shí)間長(zhǎng)，效率低。Guo等[18]預(yù)先制備黑芥子酶，采用添加外源酶水解的方式制備ITCs，酶活性高、酶解時(shí)間短，且ITCs的產(chǎn)率相對(duì)較高。同時(shí)，采用響應(yīng)面的方法對(duì)pH、抗壞血酸和EDTA因素進(jìn)行分析，結(jié)果表明，這三種因素對(duì)異硫氰酸鹽的提取率有顯著影響。只有在酶解條件適宜時(shí)，酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)才會(huì)朝著有利于生成ITCs的方向進(jìn)行。因此，優(yōu)化硫苷的酶解浸提條件，是成功制備ITCs的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

ITCs的分析測(cè)定方法主要有：分光光度法和色譜法，其中色譜技術(shù)又包括高效液相色譜法[19]、氣相色譜法和氣質(zhì)聯(lián)用、液質(zhì)聯(lián)用。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用[20]法結(jié)合了氣相色譜和質(zhì)譜的優(yōu)點(diǎn)，具有靈敏度高、分析速度快等特點(diǎn)，可同時(shí)完成待測(cè)組分的分離和鑒定。

本研究以西蘭花種子為原料，采用外源酶解的方法，制備ITCs。在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，以酶解時(shí)間、酶解溫度、酶解pH為自變量，以ITCs得率為響應(yīng)值，利用Design-export10軟件設(shè)計(jì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，同時(shí)采用硫脲法和GC-MS作為ITCs的定量定性檢測(cè)方法，優(yōu)化ITCs的酶解提取工藝，為ITCs制備和綜合利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

磷酸二氫鈉 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；碳酸氫鈉 天津市北辰方正化學(xué)試劑廠；乙二胺四乙酸 天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；抗壞血酸、二硫蘇糖醇 阿達(dá)瑪斯試劑有限公司；石油醚、二氯甲烷 上海泰坦科技股份有限公司；以上試劑 均為分析純。

BGZ-240電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司；BJ-400粉碎機(jī) 上海拜杰實(shí)業(yè)有限公司；MYP11-2磁力攪拌器 常州方科儀器有限公司；TDL-5000dR冷凍離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 黑芥子酶的制備 取烘干、粉碎后的西蘭花種子，過(guò)60目篩，石油醚脫脂三次，真空抽濾，得到西蘭花種子粉末，至錐形瓶中備用。另取新鮮的芥菜籽，加入液氮粉碎，過(guò)60目篩，并脫脂處理，加入0.2 moL/L的磷酸緩沖液，超聲振蕩20 min，4000 r/min下冰浴離心30 min，并經(jīng)硫酸銨分級(jí)沉淀，透析得粗黑芥子酶液，冷凍干燥，得黑芥子酶粉末。參照Li等[21]的方法，以黑芥子硫苷酸鉀為底物，測(cè)得制備的粗酶液酶活為1.267 U/g。

圖1 硫苷酶解過(guò)程Fig.1 Hydrolysis of glucosinolates schematic

1.2.2 ITCs提取工藝 向西蘭花粉末中加入用磷酸鹽溶解的粗黑芥子酶，并加入0.2%的抗壞血酸，在一定溫度下，酶解一定的時(shí)間，酶解結(jié)束后，加入一定量的二氯甲烷浸提液，室溫浸提2 h，之后離心取下層浸提液，測(cè)ITCs提取率。

1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.3.1 酶量對(duì)ITCs提取率的影響 以脫脂西蘭花種子粉末為底物，稱取5等份，每份0.2 g，按照1.2.1的方法提取ITCs，在酶解時(shí)間為3 h，酶解溫度為30 ℃，浸提料液比為1:20 g/mL，pH為6.5的條件下，按酶與底物的質(zhì)量比（1:5、1:4、1:3、1:2、1:1）混合，考察粗酶用量對(duì)ITCs提取率的影響。

1.2.3.2 酶解時(shí)間對(duì)ITCs提取率的影響 以脫脂西蘭花種子粉末為底物，稱取5等份，每份0.2 g，按照1.2.1的方法提取ITCs，在酶與底物的質(zhì)量比為1:3，酶解溫度為30 ℃，pH為6.5，浸提料液比為1:20 g/mL的條件下，考察不同酶解時(shí)間（2、3、4、5、6 h）對(duì)ITCs提取率的影響。

1.2.3.3 酶解溫度對(duì)ITCs提取率的影響 以脫脂西蘭花種子粉末為底物，稱取5等份，每份0.2 g，按照1.2.1的方法提取ITCs，在酶與底物的質(zhì)量比為1:3，酶解時(shí)間為3 h，pH為6.5，浸提料液比為1:20 g/mL的條件下，研究在不同酶解溫度（30、35、40、45、50 ℃）對(duì)ITCs提取率的影響。

1.2.3.4 酶解pH對(duì)ITCs提取率的影響 以脫脂西蘭花種子粉末為底物，稱取5等份，每份0.2 g，按照1.2.1的方法提取ITCs，當(dāng)酶與底物的質(zhì)量比為1:3，在酶解時(shí)間為3 h，酶解溫度為30 ℃，浸提料液比為1:20 g/mL的條件下，研究在不同pH（4.5、5.5、6.5、7.5、8.5）對(duì)ITCs提取率的影響。

1.2.3.5 浸提料液比對(duì)ITCs提取率的影響 以脫脂西蘭花種子粉末為底物，稱取5等份，每份0.2 g，按照1.2.1的方法提取ITCs，在酶與底物的質(zhì)量比為1:3，酶解時(shí)間為3 h，酶解溫度為30 ℃，pH為6.5的提取條件下，研究了不同浸提料液比（1:10、1:15、1:20、1:25、1:30 g/mL）對(duì)ITCs提取率的影響。

1.2.4 響應(yīng)面試驗(yàn) 在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)[22]，采用Box-Behnken模型[23-24]，選取酶解時(shí)間（A）、溫度（B）和pH（C）影響顯著的因素為自變量，以ITCs提取率為相應(yīng)值（Y），設(shè)計(jì)三因素三水平響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，共17個(gè)處理組，各因素編碼值見表1。

1.2.5 硫脲法測(cè)ITCs提取率 參考NY1956-2008標(biāo)準(zhǔn)[25]，取0.2 g脫脂后的西蘭花粉末，加40 mg粗芥子酶和2.0 mL pH 7.0緩沖溶液，旋渦混合器充分混合，35 ℃下酶促反應(yīng)2 h。加2.5 mL二氯甲烷，用旋渦混合器混合均勻，在室溫下振蕩0.5 h，4000 r/min下離心20 min。取6 mL 80%氨乙醇于具塞試管，用微量進(jìn)樣器，取離心管下層有機(jī)相50 μL，加入到裝有80%氨乙醇的具塞試管中，蓋上塞。旋渦混合均勻，將具塞試管放入水浴鍋，50 ℃下加熱0.5 h，取出具塞試管，冷卻至室溫。用紫外分光光度計(jì)，10 mm石英比色皿測(cè)定光密度值，測(cè)定波長(zhǎng)分別為235、245、255 nm，同時(shí)測(cè)定試樣空白溶液。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)Table 1 Factor level design of response surface test

試樣中異硫氰酸酯的提取率（X）以每克干樣中異硫氰酸酯的毫克數(shù)（mg/g）表示，按以下公式計(jì)算：

式中：OD235、OD245、OD255分別代表試樣在245、235、255 nm處的光密度值。

1.2.6 GC-MS對(duì)酶解產(chǎn)物的分析 將含有ITCs的酶解提取產(chǎn)物，用有機(jī)濾膜過(guò)濾，注入GC進(jìn)樣口進(jìn)行分析。GC/MS使用7890A氣相色譜儀結(jié)合5975C Plus質(zhì)譜儀分析。色譜條件如下[23]：氣相色譜柱（30 m×250 μm×0.25 μm，HP-5MS）采用氦氣為運(yùn)載氣體，恒定流速為1.5 mL/min；進(jìn)樣口溫度為300 ℃，進(jìn)樣量為10 μL，分流比20:1。色譜柱升溫程序?yàn)椋?0 ℃保持2 min，然后以10 ℃/min升至230 ℃，保持5 min；再以30 ℃/min升至300 ℃，保持15 min；質(zhì)譜條件：EI離子源溫度：230 ℃；接口溫度：250 ℃；四極桿溫度：150 ℃；EI能量：70 eV；掃描范圍m/z：50～240。

定性定量方法：樣品采用GC-MS進(jìn)行分析，通過(guò)MSDCHEM化學(xué)工作站對(duì)采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，并根據(jù)各個(gè)化合物的分子離子峰、特征碎片離子以及色譜保留時(shí)間等與NIST11譜庫(kù)數(shù)據(jù)進(jìn)行匹配，最終確定酶解產(chǎn)物的化學(xué)成分。并使用峰面積歸一化法計(jì)算硫代糖苷酶解產(chǎn)物中各組分的相對(duì)含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表示為三次重復(fù)（n=3）的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（SD），使用origin8對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 酶量對(duì)ITCs提取率的影響 酶與底物的質(zhì)量比對(duì)ITCs提取率的結(jié)果如圖2所示，當(dāng)酶與底物的質(zhì)量比為1:3時(shí)，ITCs的提取率達(dá)到最大。當(dāng)?shù)孜锪窟h(yuǎn)大于酶的用量時(shí)，酶解反應(yīng)速度與酶的用量呈正比關(guān)系，此時(shí)由于酶的用量不足，西蘭花粉末中的糖苷底物不能完全得到水解，從而導(dǎo)致產(chǎn)物ITCs得率較低；增加酶的用量，底物能夠得到充分的釋放，但繼續(xù)增加酶的用量，底物與酶的反應(yīng)已達(dá)到飽和，產(chǎn)物的量也不再增加，而且還會(huì)增加后續(xù)浸提溶液的體積，綜合考慮其最佳的酶與底物的質(zhì)量比為1:3。

圖2 酶與底物的質(zhì)量比對(duì)ITCs提取率的影響Fig.2 Effect of the mass ratio of enzyme and substrate on the extraction rate of ITCs

2.1.2 酶解時(shí)間對(duì)ITCs提取率的影響 酶解時(shí)間對(duì)ITCs提取率的結(jié)果如圖3所示，ITCs的提取率隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)顯著增加（P＜0.05），在酶解時(shí)間為4 h時(shí)達(dá)到最高。但酶解時(shí)間超過(guò)4 h之后，ITCs提取率有所下降。酶解時(shí)間較短時(shí)，底物硫代葡萄糖苷沒有得到充分酶解，產(chǎn)物ITCs得率較低；而在4 h之后，由于ITCs在水溶液中穩(wěn)定性較差，發(fā)生加成反應(yīng)而生成其他副產(chǎn)物。因此，隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，反而會(huì)使產(chǎn)物得率有所下降。綜上，確定酶解最佳時(shí)間為4 h左右。

圖3 酶解時(shí)間對(duì)ITCs提取率的影響Fig.3 Effect of enzymolysis time on extraction rate of ITCs

2.1.3 酶解溫度對(duì)ITCs提取率的影響 不同酶解溫度對(duì)ITCs提取率的影響如圖4所示。當(dāng)酶解溫度低于40 ℃時(shí)，ITCs的提取率隨溫度的升高而逐漸增加。當(dāng)酶解溫度升高到40 ℃時(shí)，酶解產(chǎn)物ITCs提取率最高。之后，隨著酶解溫度的進(jìn)一步升高，酶解產(chǎn)物急劇減少。因此，40 ℃為黑芥子酶的最適酶解溫度。黑芥子酶是較為耐熱的酶，適當(dāng)提高酶解溫度，有利于酶活力的提高；但酶解溫度過(guò)高時(shí)，也會(huì)使酶鈍化，降低酶的催化效率，同時(shí)還會(huì)影響酶解產(chǎn)物的穩(wěn)定性。

圖4 酶解溫度對(duì)ITCs提取率的影響Fig.4 Effect of enzymolysis temperature on extraction rate of ITCs

圖5 不同pH對(duì)ITCs提取率的影響Fig.5 Effect of different pH value on extraction rate of ITCs

2.1.4 不同pH對(duì)ITCs提取率的影響 不同pH對(duì)ITCs提取率的影響如圖5所示，pH是影響酶解效率的主要因素之一，不同的pH條件會(huì)影響酶解產(chǎn)物的類型。根據(jù)楊瑛潔等[5]研究，在中性條件下其前體硫代葡萄糖苷的酶解產(chǎn)物主要為ITCs，在有Fe2+或pH＜5.0存在下，降解產(chǎn)物則以腈類為主。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，酶解反應(yīng)pH在4.5時(shí)，ITCs的提取率最低。而隨著反應(yīng)pH的增加，ITCs的提取率表現(xiàn)為先增后降的趨勢(shì)，當(dāng)pH為6.5時(shí)，ITCs的提取率最高，為最佳酶解反應(yīng)pH。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，ITCs受pH的影響較大，酶解反應(yīng)中溶液pH過(guò)酸或過(guò)堿都會(huì)影響酶的活力、催化效率以及酶解反應(yīng)進(jìn)程，因此，選擇pH5.5、6.5、7.5進(jìn)行后續(xù)響應(yīng)面試驗(yàn)。

2.1.5 浸提料液比對(duì)ITCs提取率的影響 不同的提取料液比對(duì)ITCs提取率的影響，如圖6所示。當(dāng)浸提料液比為1:20 g/mL時(shí)，ITCs的提取率最高，當(dāng)浸提料液比為1:10～1:20 g/mL的范圍內(nèi)時(shí)，浸提液的量不足以萃取出全部的ITCs，提取率較低；浸提料液比過(guò)高時(shí)1:30 g/mL，不僅增加了緩沖液的用量，也沒有有效提高ITCs的提取得率。因此，確定最佳浸提料液比在1:20 g/mL左右。

圖6 浸提料液比對(duì)ITCs提取率的影響Fig.6 Effect of solid-liquid ratio on extraction rate of ITCs

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果分析

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)分析 從單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，酶解時(shí)間、溫度、pH對(duì)ITCs的提取率影響更為顯著，因此選取這三個(gè)酶解因素作為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素進(jìn)行優(yōu)化。根據(jù)Box-Bohnken中心組合設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)三因素三水平的響應(yīng)面分析試驗(yàn)，17個(gè)實(shí)驗(yàn)組結(jié)果如表2所示。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)數(shù)據(jù)Table 2 Response surface experimental data

2.2.2 二次回歸方程模擬及方差分析 用DesignExpert 9.0軟件對(duì)表2中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析后得到二階響應(yīng)表面模型方程：

對(duì)回歸方程進(jìn)行方差分析，結(jié)果如表3所示，顯著性結(jié)果以P值表示，模型顯著性檢驗(yàn)P＜0.05，表明該模型具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。失擬項(xiàng)用來(lái)表示所用模型與實(shí)驗(yàn)擬合的程度，即二者差異的程度，失擬項(xiàng)P=0.0703＞0.05，表明失擬不顯著。模型決定系R2=0.9835，說(shuō)明該模型擬和程度良好，實(shí)驗(yàn)誤差小，該模型能夠較好地描述各因素與響應(yīng)值之間的真實(shí)關(guān)系。模型的校正決定系數(shù)R2adj=0.9624，說(shuō)明該模型能解釋約96%響應(yīng)值的變化；

t檢驗(yàn)和P值用于確定每個(gè)因素對(duì)ITCs提取率產(chǎn)生的影響。P值用作檢查每個(gè)系數(shù)顯著性的工具，數(shù)值越小，相應(yīng)系數(shù)的顯著性就越強(qiáng)。從表3中可知，二次項(xiàng)A2、B2、C2和交互項(xiàng)BC對(duì)ITCs的提取率均呈極顯著性影響（P＜0.01），交互項(xiàng)AB、BC呈顯著性影響（P＜0.05），三個(gè)因素對(duì)指標(biāo)影響大小順序?yàn)锽＞A＞C。

利用上述回歸方程確定最佳提取工藝條件：酶解時(shí)間3.95 h，酶解溫度44.6 ℃，pH 6.52，在此條件下，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，重復(fù)三次，ITCs提取率為8.36 mg/g，回歸模型預(yù)測(cè)理論ITCs提取率為8.51 mg/g，驗(yàn)證值略低于預(yù)測(cè)值，其相對(duì)誤差為1.80%，因此回歸方程是可用的。

表3 模型的方差分析Table 3 Anova analysis for the response variables

2.2.3 各因素交互作用分析 回歸方程顯示，各因素之間存在著一定的交互作用，圖7～圖9的響應(yīng)面圖反映了各因素在酶解過(guò)程中對(duì)響應(yīng)值的影響，其投影為等高線圖。響應(yīng)面圖坡度的陡峭程度直觀地反映了各因素對(duì)響應(yīng)值的影響，結(jié)果與表3中交互項(xiàng)的顯著性一致。

圖7 Y=f（A，B）的響應(yīng)面Fig.7 Responsive surface plot Y=f（A，B）

圖8 Y=f（A，C）的響應(yīng)面Fig.8 Responsive surface plot Y=f（A，C）

圖9 Y=f（B，C）的響應(yīng)面Fig.9 Responsive surface plot Y=f（B，C）

2.3 酶解產(chǎn)物的GC-MS分析結(jié)果

通過(guò)GC-MS分析了最佳酶解條件下制備的ITCs樣品。選擇峰面積作為總ITCs提取相對(duì)含量的分析信號(hào)，并將MS譜圖與NIST標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，譜庫(kù)檢索結(jié)果匹配度達(dá)95%以上的物質(zhì)中，鑒定出5種酶解相關(guān)化合物，分別是4-（甲硫基）丁腈、1-異硫代氰酸丁酯、蘿卜硫腈、噁唑烷硫酮、蘿卜硫素，整理見表4。其中，異硫氰酸酯類主要活性物質(zhì)蘿卜硫素在7.42 min被檢測(cè)到，其得率也最高。從圖10和圖11可以看出，該活性產(chǎn)物的質(zhì)譜圖與NIST譜庫(kù)中蘿卜硫素的譜圖（圖12）吻合，其特征峰72、160與譜庫(kù)中蘿卜硫素的匹配度達(dá)98%以上，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果也與Gu等[15]的研究結(jié)果是一致的。

表4 GC-MS測(cè)定結(jié)果Table 4 GC-MS measurement results

圖10 GC-MS總離子流圖Fig.10 GC-MS total ion current diagram

圖11 保留時(shí)間7.42 min的質(zhì)譜圖Fig.11 Mass spectrum at retention time 7.42 min

3 結(jié)論

通過(guò)單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)研究了各因素對(duì)ITCs提取率的影響，綜合考慮各方面的因素，最終確定西蘭花種子中ITCs的最佳酶解提取條件：最適pH為6.52，酶解溫度為44.6 ℃，酶解時(shí)間為3.95 h，ITCs的理論提取率為8.51 mg/g，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ITCs的提取率為8.36 mg/g，其相對(duì)誤差為1.8%。在此基礎(chǔ)上，對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行了GC-MS分析，鑒定出異硫氰酸酯類相關(guān)化合物共五種，分別為有4-（甲硫基）丁腈、1-異硫代氰酸丁酯、蘿卜硫腈、噁唑烷硫酮、蘿卜硫素，其中目標(biāo)產(chǎn)物蘿卜硫素的相對(duì)含量最高，表明該工藝條件用于西蘭花種子中異硫氰酸酯的提取是可行的，對(duì)于進(jìn)一步研究、應(yīng)用、開發(fā)ITCs相關(guān)產(chǎn)品具有現(xiàn)實(shí)意義。

圖12 NIST譜庫(kù)中的蘿卜硫素譜圖Fig.12 Mass spectrogram of sulforaphane in the NIST library