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    冷凍蝦尾中菌落總數(shù)的不確定度評(píng)定

    2021-06-18 07:47:40河南省開封市疾病預(yù)防控制中心475000任泓燕馮輝
    首都食品與醫(yī)藥 2021年11期
    關(guān)鍵詞:培養(yǎng)皿總數(shù)無(wú)菌

    河南省開封市疾病預(yù)防控制中心(475000)任泓燕 馮輝

    2020年,中國(guó)進(jìn)入了全民小康的時(shí)代,全中國(guó)832個(gè)貧困縣全部脫貧摘帽,這標(biāo)志著中國(guó)人民已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了從溫飽到小康的全面過渡。隨著人民物質(zhì)生活的極大滿足,人民對(duì)食品安全的關(guān)注度也極大的提升,特別是今年以來(lái),新冠疫情肆虐全球,人民對(duì)微生物污染食品,尤其是冷凍食品特別關(guān)注。而菌落總數(shù)的多少一貫是人們用來(lái)判定食品被細(xì)菌污染的程度,它能反應(yīng)出食品在生產(chǎn)、流通,儲(chǔ)存過程中受污染的程度。菌落總數(shù)的多少在一定程度上標(biāo)志著食品質(zhì)量的好壞。冷凍蝦尾做為一種較易儲(chǔ)存的水產(chǎn)品近年來(lái)尤其受到人民群眾的歡迎,但做為一種冷凍水制品,從最初的生產(chǎn)加工到最后供應(yīng)到人們的餐桌,其流程長(zhǎng),且對(duì)溫度要求高,因此,更容易受到微生物的污染。

    在日常的微生物檢驗(yàn)中,因?yàn)闃悠肥芪廴镜牟课缓统潭炔煌?,受制于取樣等環(huán)節(jié)的影響,所做的結(jié)果常差別較大,因此,檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確與否甚至?xí)绊懫髽I(yè)的效益甚至生存,尤其是微生物測(cè)定不合格,企業(yè)不能提出復(fù)檢。本文通過對(duì)10份市售冷凍蝦尾的菌落總數(shù)進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)GB/T 27418-2017《測(cè)量不確定度評(píng)定和表示》的規(guī)定,來(lái)對(duì)結(jié)果中不確定度的來(lái)源進(jìn)行分析,并為此建立合適的數(shù)學(xué)模型進(jìn)行分析,來(lái)評(píng)定冷凍蝦尾中菌落總數(shù)的不確定度。

    1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器和方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料 樣品:隨機(jī)購(gòu)買10個(gè)超市內(nèi)的冷凍蝦尾各一份,500g/份,用無(wú)菌袋包裝,立即放入-18℃的冰箱內(nèi)保存。

    耗材:一次性無(wú)菌培養(yǎng)皿(江蘇華夏瑞泰塑業(yè)有限公司),平板計(jì)數(shù)瓊脂(北京陸橋計(jì)數(shù)股份有限公司)。

    1.2 儀器 壓力蒸汽滅菌器(BKQ-B50Ⅱ)(山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司生產(chǎn));電熱鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9075AE)(無(wú)錫瑪瑞科科技有限公司生產(chǎn));微生物恒溫培養(yǎng)箱(BJPX-Z1)(山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司生產(chǎn));蘇凈安泰生物安全柜(BSC-1804ⅡB2)(江蘇蘇凈集團(tuán)有限公司生產(chǎn))。

    1.3 方法 按照GB4789.2-2016中規(guī)定的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),具體步驟如下:①在無(wú)菌的條件下,稱取樣品25.0g,加入到含有225ml 0.9%的無(wú)菌生理鹽水的勻漿器,均質(zhì),搖勻。②取新的無(wú)菌吸管做系列10倍濃度稀釋。③取1∶10,1∶100,1∶1000,1∶10000四個(gè)濃度梯度的樣品稀釋液,在每個(gè)樣品稀釋液中取1ml2次,分別加入到無(wú)菌培養(yǎng)皿中,另取1ml無(wú)菌生理鹽水加入另一無(wú)菌培養(yǎng)皿中,作為空白對(duì)照。④將冷卻至46℃左右的瓊脂培養(yǎng)基分別倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿中約15ml~20ml,混勻,待瓊脂凝固后倒置。⑤將所有的培養(yǎng)皿放置于(36±1)℃的恒溫培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)(48±2)h。⑥選擇無(wú)菌培養(yǎng)皿中菌落數(shù)在30~300的培養(yǎng)皿,計(jì)數(shù)后乘以稀釋倍數(shù),得到最終的計(jì)數(shù)結(jié)果。

    2 結(jié)果

    2.1 不確定度評(píng)價(jià) 對(duì)10個(gè)冷凍蝦尾樣品的菌落總數(shù)的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì),具體數(shù)值見附表。

    附表 冷凍蝦尾中菌落總數(shù)的檢測(cè)結(jié)果及相關(guān)計(jì)算

    從附表中的具體數(shù)據(jù)可以看出,該10份樣品中所測(cè)得菌落總數(shù)差異較大,因此,必須對(duì)檢測(cè)結(jié)果所得數(shù)值取對(duì)數(shù)后,再進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果對(duì)數(shù)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算。按照統(tǒng)計(jì)學(xué)中A類評(píng)定,根據(jù)貝塞爾公式,計(jì)算最后結(jié)果:

    在日常菌落總數(shù)的測(cè)定中,按照GB4789.2-2016的規(guī)定,每個(gè)稀釋濃度均會(huì)做2個(gè)平行樣,因此,在標(biāo)準(zhǔn)不確定度公式中,n=2,代入計(jì)算可得:。

    在置信水平P=95%,V=10,通過查閱t分布表可得t95(10)=2.228。

    根據(jù)擴(kuò)展不確定度的公式U=KUC,代入計(jì)算可得,U=2.228×0.0253=0.0564。

    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 根據(jù)2.1中計(jì)算的結(jié)果,筆者以1號(hào)樣品為例,其,其取值區(qū)間應(yīng)為(5.8026±0.0564),計(jì)算可得5.7462~5.8590,取反對(duì)數(shù)后的區(qū)間為(557442~722770)CFU/g,因此,最后的檢測(cè)結(jié)果可估算為(5.6~7.2)×105CFU/g,其他樣品的取值范圍也可以依此類推。

    3 討論

    在食品微生物檢驗(yàn)中,不確定度來(lái)源很多,比如樣品被污染程度是否均一,取樣是否均一,每一步稀釋的體積誤差有多大,培養(yǎng)箱內(nèi)部的溫度差異有多大,培養(yǎng)的時(shí)間允差,最后計(jì)數(shù)的平行性等因素都是不確定度的來(lái)源。根據(jù)文獻(xiàn)可知,B類不確定度對(duì)食品微生物檢驗(yàn)中的不確定度影響較小[1]。影響食品微生物檢驗(yàn)的不確定主要因素還是人員的重復(fù)性,因此,采用統(tǒng)計(jì)學(xué)A類不確定度計(jì)算方法貝塞爾公式來(lái)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差。根據(jù)貝塞爾公式的相關(guān)要求,一般要求對(duì)單一樣品測(cè)定10次以上,但是在日常實(shí)際工作中,幾乎沒有實(shí)驗(yàn)室會(huì)這樣做[2]。因?yàn)樵诰淇倲?shù)的測(cè)定中,樣品檢驗(yàn)都為破壞性檢驗(yàn),樣品檢驗(yàn)一次后不能再重復(fù)檢驗(yàn),因此,對(duì)同一樣品做重復(fù)10次以上得到的結(jié)果意義不大。因此,本文通過對(duì)10批次冷凍蝦尾中的菌落總數(shù)進(jìn)行測(cè)定,取對(duì)數(shù)后進(jìn)行相關(guān)計(jì)算。

    為了方便建立數(shù)學(xué)模型,要求所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)盡量符合正態(tài)分布,而從培養(yǎng)皿中直接計(jì)數(shù)后乘以稀釋濃度所得到的菌落總數(shù)為偏態(tài)分布[3]。因此,筆者對(duì)這些結(jié)果取對(duì)數(shù)后進(jìn)行分析。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),要想使最后的結(jié)果比較完美,就應(yīng)該嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)的每一個(gè)步驟,力求重復(fù)性一致。這就要求試驗(yàn)人員要盡量避免實(shí)驗(yàn)中的不確定度,并且盡可能的一個(gè)人完成所有操作,實(shí)驗(yàn)中所使用的實(shí)驗(yàn)容器和相關(guān)儀器一定要經(jīng)過相關(guān)部門的檢定并嚴(yán)格按照其操作規(guī)范的要求進(jìn)行操作和使用。以最大限度地減少測(cè)定中的不確定度,保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

    對(duì)于一些檢驗(yàn)結(jié)果在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定附近的結(jié)果,要根據(jù)CNAS-CL08《評(píng)價(jià)和報(bào)告測(cè)試結(jié)果與規(guī)定限量的符合性的要求》中的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行判定。例如,當(dāng)檢驗(yàn)的結(jié)果低于(高于)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的值小于所測(cè)得的不確定度時(shí),在95%的置信水平下,就不能做出不符合規(guī)定的處理[4]。

    通過測(cè)定冷凍蝦尾中菌落總數(shù)的不確定度評(píng)價(jià),可以更清楚地反應(yīng)冷凍蝦尾的受污染情況,減少了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和真實(shí)值之間的誤差,更好地為人民群眾的飲食安全保駕護(hù)航。

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