生長激素在無優(yōu)質(zhì)囊胚形成患者中的應(yīng)用研究△

陳慧慧 盧曉聲 楊茹清 陳豪英 習(xí)海濤 趙軍招

(溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院生殖中心婦產(chǎn)科 溫州 325000)

不孕癥是指夫妻正常性生活未采取任何避孕措施，滿一年仍未懷孕，其發(fā)病率約占已婚育齡夫婦的10%左右[1]。輔助生殖技術(shù)為這些患者帶來了希望。優(yōu)質(zhì)的胚胎對(duì)成功妊娠至關(guān)重要，然而臨床上存在許多患者無優(yōu)質(zhì)囊胚形成。因此，許多輔助治療已被用于提高臨床妊娠率，如添加生長激素(Growth hormone, GH)等[2]。

GH是由191個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，與生長激素受體結(jié)合，在卵巢中通過刺激產(chǎn)生第二因子，例如胰島素生長因子(Insulin-like growth factor, IGF)而發(fā)揮作用[3]。在卵母細(xì)胞的成長和發(fā)育過程中，卵泡液(follicular fluid, FF)攜帶營養(yǎng)物質(zhì)到卵母細(xì)胞，在配子之間的交流到受精及胚胎的發(fā)育中都發(fā)揮著關(guān)鍵作用[4]。

因此，本研究納入無優(yōu)質(zhì)囊胚形成患者，在促排卵周期的前一月經(jīng)期開始給予GH預(yù)治療，探究GH預(yù)處理以及FF中IGF濃度對(duì)胚胎質(zhì)量以及妊娠結(jié)局的影響。

1 材料與方法

1.1 病例收集

納入標(biāo)準(zhǔn)：≥1個(gè)促排周期無優(yōu)質(zhì)囊胚形成。排除標(biāo)準(zhǔn)：女方內(nèi)分泌或是代謝性疾病；男方患有重度少弱精癥者；夫妻雙方任意一方染色體異常。

1.2 研究方法

本研究納入2019年1月前在溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院生殖中心IVF的促排經(jīng)歷≥1個(gè)周期無優(yōu)質(zhì)囊胚形成，月經(jīng)規(guī)律周期(28～35d)的患者，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(GH組)。實(shí)驗(yàn)組在促性腺激素(Gonadotropin, Gn)日的前一月經(jīng)期第3～5d開始給予GH(6.0IU/d)持續(xù)到取卵前注射hCG日。

1.3 促排卵方案

均采用卵泡期超長方案，于月經(jīng)期第3～5d皮下注射3.75mg長效醋酸曲普瑞林(德國輝凌制藥有限公司)降調(diào)節(jié)，32～38d后測(cè)定患者血清性激素水平，監(jiān)測(cè)子宮內(nèi)膜、卵泡狀況。

1.4 卵泡液樣本采集

取卵日穿刺位置最低的1枚大卵泡，收集卵泡液，離心后收集上清-80℃冷凍保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)卵泡液中IGF水平。

1.5 胚胎評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

受精第3d參考伊斯坦布爾共識(shí)對(duì)卵裂期胚胎評(píng)估，其中1、2級(jí)為優(yōu)質(zhì)胚胎(≥6cell)；受精后第5～6d參考Gardner評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)囊胚質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估，其中囊胚擴(kuò)張期≥4分且內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞評(píng)分均為B級(jí)以上的為優(yōu)質(zhì)囊胚。

1.6 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果

本研究共納入了339例患者，其中未使用GH輔助治療的對(duì)照組為204例，使用GH輔助治療的實(shí)驗(yàn)組為135例。

2.1 不孕患者的基本情況

兩組之間的年齡、>40歲比例、BMI、既往無優(yōu)質(zhì)囊胚周期數(shù)、AFC、基礎(chǔ)內(nèi)分泌、不孕年限、各類不孕因素比例均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表1。

表1 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組不孕患者的基本情況

2.2 不孕患者的促排情況

兩組患者的Gn天數(shù)、HCG日LH、E2、P水平以及內(nèi)膜厚度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)組的Gn劑量明顯小于對(duì)照組(P<0.001)，見表2。

表2 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組不孕患者的促排情況

2.3 不孕患者的胚胎質(zhì)量以及妊娠結(jié)局

兩組之間獲卵數(shù)、受精數(shù)、D3胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)D3胚胎數(shù)、移植胚胎數(shù)/植入胚胎數(shù)、移植周期數(shù)/妊娠周期數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)組的囊胚數(shù)以及優(yōu)質(zhì)囊胚數(shù)大于對(duì)照組(P<0.05)，見表3。

表3 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組胚胎質(zhì)量以及妊娠結(jié)局

2.4 不孕患者的IGF濃度和Gn、囊胚數(shù)、優(yōu)質(zhì)囊胚數(shù)之間的關(guān)系

實(shí)驗(yàn)組卵泡液的IGF1和IGF2濃度與對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見圖1?；颊呗雅菀褐械腎GF1和IGF2濃度和Gn劑量、囊胚數(shù)、優(yōu)質(zhì)囊胚數(shù)之間未見明顯的線性關(guān)系(P>0.05)，見圖2～3。

圖1 A～B：對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組卵泡液IGF1、IGF2濃度

圖2 A～B：對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組卵泡液IGF1、IGF2濃度和Gn劑量關(guān)系

圖3 A～D患者卵泡液中IGF1和IGF2濃度和囊胚數(shù)、優(yōu)質(zhì)囊胚數(shù)之間的線性關(guān)系

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)反復(fù)妊娠失敗的不孕患者接受贈(zèng)卵，其妊娠率并不低于年輕不孕患者，提示優(yōu)質(zhì)囊胚是成功妊娠的關(guān)鍵[5]。因此本研究納入無優(yōu)質(zhì)囊胚形成的患者，探究GH對(duì)無優(yōu)質(zhì)囊胚形成患者胚胎質(zhì)量以及妊娠率的影響。

本研究給無優(yōu)質(zhì)囊胚患者GH預(yù)處理后，Gn促排使用劑量減小。研究發(fā)現(xiàn)GH能增加卵子顆粒細(xì)胞表面FSH受體的密度，也能增加GHR的密度[6]。Wang等[7]報(bào)道患者自Gn日開始補(bǔ)充GH沒有減少Gn的天數(shù)和總劑量，然而Roger[8]報(bào)道自Gn日的前一月經(jīng)周期開始補(bǔ)充GH明顯減少的Gn天數(shù)以及總劑量。因此，GH對(duì)Gn使用劑量的影響或許與GH預(yù)治療的時(shí)間有較強(qiáng)的相關(guān)性。

在本研究中，無優(yōu)質(zhì)囊胚患者GH預(yù)處理后，囊胚數(shù)增加，沒有提高胚胎植入率和妊娠率。Tesarik等[9]報(bào)道了實(shí)驗(yàn)組(>40歲)和對(duì)照組之間的獲卵數(shù)、囊胚數(shù)、妊娠率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但實(shí)驗(yàn)組有較低的流產(chǎn)率和較高的活產(chǎn)率。Keane等[10]給予預(yù)后不良的不孕患者GH治療，發(fā)現(xiàn)GH均能夠提升不孕患者的獲卵數(shù)、囊胚形成數(shù)以及更高的妊娠率和活產(chǎn)率。另在卵巢低反應(yīng)的患者中，GH提升了患者的獲卵率和囊胚形成率，但是沒有提高妊娠率[11]。

在濾泡液的各種激素中，GH濃度和胚胎的質(zhì)量緊密相關(guān)[12]。本研究中患者卵泡液的IGF1和IGF2濃度無明顯差異，和Gn劑量之間也不存在明顯的線性關(guān)系。眾多因子參與卵子的發(fā)育和成熟，GH影響卵子發(fā)育，減少Gn的用量，但卵泡液中的IGF1和IGF2濃度不是影響卵子發(fā)育的主要因素。

綜上所述，本研究給予無優(yōu)質(zhì)囊胚形成患者GH預(yù)治療提高了囊胚形成率，但沒有提升優(yōu)質(zhì)囊胚率、胚胎植入率以及妊娠率。同時(shí)，GH預(yù)治療明顯減少了Gn劑量，但卵泡液中的IGF1和IGF2與Gn劑量不成正相關(guān)，且與囊胚形成的幾率無明顯相關(guān)。但因樣本量小的研究對(duì)象選擇的偏倚以及GH在生殖領(lǐng)域具體作用機(jī)制仍不詳，本研究結(jié)果仍然需要大樣本、多中心隨機(jī)雙盲試驗(yàn)來進(jìn)一步證明。