蟬花孢子粉多糖的酶輔助提取及其對(duì)酒精性肝損傷小鼠的保護(hù)作用

南婷婷,許東霞,王余宸銘,楊 麗,史 璐,鄭 義,2,*

(1.徐州工程學(xué)院食品與生物工程學(xué)院,江蘇徐州 221018; 2.江蘇省食品資源開(kāi)發(fā)與質(zhì)量安全重點(diǎn)建設(shè)實(shí)驗(yàn)室,江蘇徐州 221018)

酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD)是世界上最常見(jiàn)的肝病之一[1],也是我國(guó)第二大肝病。ALD初期表現(xiàn)為脂肪肝,可進(jìn)展為酒精性肝炎、肝纖維化、肝硬化和肝癌等[2]。影響ALD發(fā)生和進(jìn)展的因素很多,主要包括酒精攝入量、飲酒頻次、酒精類別、飲酒方式、性別、種族和遺傳因素等[3]。酒精性肝病的治療方法包括藥物療法、營(yíng)養(yǎng)療法和肝移植等,目前尚無(wú)令人滿意的治療方法[4-6]。乙醇引起的氧化應(yīng)激被認(rèn)為是ALD的發(fā)病機(jī)制之一[7]。長(zhǎng)期大量酒精攝入,經(jīng)肝臟代謝后可導(dǎo)致過(guò)量的活性氧(ROS),使肝臟中抗氧化酶活性下降,造成肝細(xì)胞損傷[8]。攝入外源抗氧化劑拮抗酒精導(dǎo)致的氧化應(yīng)激被認(rèn)為是一種很有前景的ALD治療策略[9]。近年來(lái),在ALD治療藥物的篩選中,生物活性多糖受到廣泛關(guān)注,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明長(zhǎng)根奧德蘑多糖[10]、秀珍菇菌絲體多糖[11]、毛頭鬼傘多糖[12]和云芝菌絲體多糖[13]等大量的真菌多糖具有較好的保肝作用。

蟬花(Cordycepscicadae)又稱蟬草、蟬茸、蟬花等,與冬蟲(chóng)夏草和蛹蟲(chóng)草同屬真菌門、子囊菌綱、麥角菌目、麥角菌科、蟲(chóng)草屬真菌,是我國(guó)傳統(tǒng)的中藥材,具有較高的藥食兩用性價(jià)值。多糖為蟬花的主要活性成分之一,蟬花孢梗束多糖具有抗氧化[14]、抗衰老[15]和抗腫瘤[16]作用。前期研究表明,蟬花孢梗束多糖可通過(guò)提高體內(nèi)抗氧化酶活性、直接清除自由基和螯合金屬離子等途徑發(fā)揮其對(duì)環(huán)磷酰胺致小鼠肝損傷的保護(hù)作用[17]。有關(guān)蟬花孢子粉多糖保肝作用的研究未見(jiàn)報(bào)道。

傳統(tǒng)的多糖提取方法包括熱水浸提、煎煮提取等。然而傳統(tǒng)方法存在多糖得率低、溶劑消耗大、能耗高、耗時(shí)長(zhǎng)等缺點(diǎn),此外這些方法通常對(duì)細(xì)胞壁的破碎效果不佳。綠色提取是天然產(chǎn)物研究的必然趨勢(shì),綠色提取可提高多糖得率、減少溶劑消耗、降低能耗、減少環(huán)境污染。酶輔助提取可以提高多糖的得率,同時(shí)維持多糖的結(jié)構(gòu)與生物活性,目前尚未見(jiàn)應(yīng)用于蟬花孢子粉多糖提取的研究報(bào)道。

本研究采用酶輔助提取蟬花孢子粉多糖,通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)及響應(yīng)面法優(yōu)化酶輔助提取工藝參數(shù),采用急性酒精性肝損傷小鼠模型評(píng)價(jià)了蟬花孢子粉多糖的保肝作用,旨在為蟬花孢子粉多糖的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蟬花孢子粉 由江蘇省食品資源開(kāi)發(fā)利用與質(zhì)量安全重點(diǎn)建設(shè)實(shí)驗(yàn)室制備;昆明小鼠(18～22 g,6周齡) 濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司,生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK魯20140007;纖維素酶(100000 U/g) 食品級(jí),和氏璧生物科技有限公司;丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、過(guò)氧化氫酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)測(cè)試盒 南京建成生物工程研究所;水飛薊賓 國(guó)藥準(zhǔn)字H20040299,天津天士力圣特制藥有限公司。

723C可見(jiàn)分光光度計(jì)、FA2104N電子分析天平 上海精密科學(xué)儀器有限公司;PC-1000數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋 上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠;TGL-16G型臺(tái)式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;SHZ-D(Ш)循環(huán)水式真空泵 鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 酶輔助法提取蟬花孢子粉多糖 稱取蟬花孢子粉1.00 g,置于一定體積、一定pH的檸檬酸緩沖液中,預(yù)熱至酶解溫度,加入一定量的纖維素酶,在一定溫度下水浴酶解一段時(shí)間。提取后沸水浴滅酶10 min,冷卻,抽濾,濾液濃縮至原體積的1/20,在4 ℃下乙醇(終體積分?jǐn)?shù)80%)沉淀12 h,3000 r/min離心10 min,收集沉淀,所得沉淀用無(wú)水乙醇洗滌3次,冷凍干燥后得蟬花孢子粉粗多糖。Sevage法脫蛋白,重復(fù)數(shù)次,直至兩相界面無(wú)蛋白為止。蒸餾水透析48 h,除去Sevag試劑,濃縮,冷凍干燥得蟬花孢子粉多糖。

1.2.2 多糖得率的測(cè)定 采用苯酚-硫酸法[18]。配制質(zhì)量濃度為40 μg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,依次吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6和1.8 mL,去離子水補(bǔ)至2.0 mL,迅速加入1.0 mL 6%苯酚和5.0 mL濃硫酸,混勻后沸水浴15 min,冷卻后在490 nm處測(cè)吸光度。以葡萄糖微克數(shù)為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0066x+0.0014,R2=0.9978。取1 mL多糖樣品溶液,參照上述方法測(cè)定吸光度,根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖得率。

蟬花孢子粉多糖得率按下式計(jì)算:

式中:0.9表示校正系數(shù);W1表示從回歸方程求得的多糖質(zhì)量,μg;N表示稀釋倍數(shù);V表示反應(yīng)液體積,mL;W表示稱取的蟬花孢子粉質(zhì)量,g。

表1 單因素實(shí)驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels of single factor experiments

1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn) 通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)考察液料比、纖維素酶用量、酶解pH、酶解時(shí)間和酶解溫度對(duì)酶輔助提取蟬花孢子粉多糖的影響,試驗(yàn)因素水平如表1所示。每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采取Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì),安排四因素三水平試驗(yàn),試驗(yàn)因素水平如表2所示。

表2 Box-Behnken試驗(yàn)因素水平表Table 2 Factors and levels of Box-Behnken experiments

1.2.5 小鼠分組與處理 小鼠經(jīng)7 d適應(yīng)性飼養(yǎng)后,隨機(jī)分為正常組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和蟬花孢子粉多糖低、中、高劑量組。每組10只小鼠,雌雄各半。陽(yáng)性對(duì)照組灌胃150 mg/kg水飛薊賓,低、中、高劑量組分別灌胃50、100和200 mg/kg蟬花孢子粉多糖,每天1次,連續(xù)20 d;正常組和模型組每天灌胃等量去離子水。第21 d,除正常組外,其余組小鼠灌胃50%乙醇(12 mL/kg),每隔12 h一次,連續(xù)3次;正常組每次灌胃等體積去離子水。

1.2.6 生化指標(biāo)檢測(cè) 在末次灌胃50%乙醇12 h后,小鼠稱重,眼眶靜脈叢采血,血樣于室溫靜置1 h,在4 ℃下,3500 r/min離心10 min,收集血清,按照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定血清中ALT和AST活性。頸椎脫臼法處死小鼠,取肝臟和脾臟,稱重臟器,根據(jù)臟器質(zhì)量與其體重比,計(jì)算臟器系數(shù)。取肝臟,加適量預(yù)冷生理鹽水,制成10%(m/V)肝組織勻漿,在4 ℃下,3500 r/min離心10 min,收集上清液,根據(jù)試劑盒說(shuō)明書測(cè)定肝組織中SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較采用Dunnett-t檢驗(yàn),P<0.05表示差異顯著,P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 液料比對(duì)多糖得率的影響 如圖1所示,當(dāng)液料比在15～30 mL/g之間時(shí),蟬花孢子粉多糖得率隨液料比的增加而升高,當(dāng)液料比高于30 mL/g時(shí),多糖得率的增加趨于平緩。料液比影響溶液的黏度和濃度,當(dāng)其較小時(shí),溶液黏度大,酶分子不易擴(kuò)散,得率小;當(dāng)其逐漸升高時(shí),酶分子擴(kuò)散快,得率高;當(dāng)升高到達(dá)一定程度時(shí),由于濃度差變小,得率趨于平衡。液料比過(guò)大,將會(huì)導(dǎo)致后續(xù)操作能耗增加,故料液比取30 mL/g左右最佳。

圖1 液料比對(duì)酶輔助提取蟬花孢子粉多糖得率的影響Fig.1 Effect of liquid to material ratio on yield of CCSP

2.1.2 纖維素酶用量對(duì)多糖得率的影響 圖2為不同纖維素酶用量對(duì)酶輔助提取蟬花孢子粉多糖得率的影響。當(dāng)酶用量在0.2%～0.6%之間時(shí),蟬花孢子粉多糖得率隨酶用量的增加而升高,當(dāng)酶用量高于0.6%時(shí),多糖得率的增幅趨于平緩。這是因?yàn)榻狍w系中酶分子已接近飽和狀態(tài),致使多糖得率增長(zhǎng)平緩?？紤]酶的成本,故酶使用量確定為0.6%左右。

圖2 纖維素酶用量對(duì)蟬花孢子粉多糖得率的影響Fig.2 Effect of cellulase amount on the yield of CCSP

2.1.3 酶解pH對(duì)多糖得率的影響 如圖3所示,多糖得率隨pH的升高而先增加后減少,并在pH為6.0時(shí)達(dá)到最大值,這表明纖維素酶催化水解蟬花孢子細(xì)胞壁較適宜的pH在6.0左右,低于或高于適宜pH時(shí),酶的活性降低,從而導(dǎo)致多糖得率降低。故選擇較優(yōu)酶解pH為6.0左右。

圖3 酶解pH對(duì)蟬花孢子粉多糖得率的影響Fig.3 Effect of enzymolysis pH value on the yield of CCSP

2.1.4 酶解時(shí)間對(duì)多糖得率的影響 圖4為不同酶解時(shí)間對(duì)酶輔助蟬花孢子粉多糖得率的影響。當(dāng)酶解時(shí)間在20～80 min之間時(shí),多糖得率隨酶解時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,當(dāng)酶解時(shí)間超過(guò)80 min時(shí),多糖得率的增加趨于平緩,此時(shí)浸出的蟬花孢子多糖已達(dá)到平衡狀態(tài),故酶解時(shí)間可采用80 min。由于酶解時(shí)間對(duì)蟬花孢子粉多糖得率的影響不如其他因素顯著,后續(xù)采用Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行工藝優(yōu)化時(shí),不再考察酶解時(shí)間對(duì)多糖得率的影響。

圖4 酶解時(shí)間對(duì)蟬花孢子粉多糖得率的影響Fig.4 Effect of extraction time on the yield of CCSP

2.1.5 酶解溫度對(duì)多糖得率的影響 不同酶解溫度對(duì)酶輔助提取蟬花孢子粉多糖得率的影響如圖5所示。酶解溫度在30～50 ℃時(shí),多糖得率呈顯著(P<0.05)增加的趨勢(shì),這是因?yàn)殡S著酶解溫度增高,越接近酶的最適溫度,同時(shí)浸提體系的黏度降低,有助于多糖分子的浸出。但溫度大于50 ℃后,酶活受到抑制,多糖得率急劇下降。故選取50 ℃為較為適宜的酶解溫度。

圖5 酶解溫度對(duì)蟬花孢子粉多糖得率的影響Fig.5 Effect of extraction temperature on the yield of CCSP

2.2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,液料比、纖維素酶用量、酶解pH和酶解溫度對(duì)蟬花孢子粉多糖得率的影響較大,而酶解時(shí)間多糖得率的影響相對(duì)較小。進(jìn)一步采用四因素三水平Box-Behnken試驗(yàn)優(yōu)化酶輔助提取蟬花孢子粉多糖的工藝參數(shù)。

Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果如下表3所示。

表3 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 3 Design and results of Box-Behnken experiment

2.2.1 回歸模型的建立與檢驗(yàn) 利用Design-Expert軟件對(duì)表3數(shù)據(jù)進(jìn)行多元非線性回歸分析,得到蟬花孢子粉多糖得率(Y)與4個(gè)因素即液料比(A)、纖維素酶用量(B)、酶解pH(C)和酶解溫度(D)的二次多項(xiàng)回歸方程:Y=7.29+0.19A+0.3B+0.054C-0.23D-0.04AB-0.085AC+0.040AD-0.040BC+0.025BD-0.13CD-0.037A2-0.38B2-0.92C2-2.48D2。對(duì)該回歸方程進(jìn)行方差分析,結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 酶輔助提取蟬花孢子粉多糖的回歸模型方差分析Table 4 Analysis of variance with regression model for enzyme-assisted extraction of CCSP

一次項(xiàng)中,A、B、D對(duì)響應(yīng)值的影響極顯著(P<0.01),C對(duì)響應(yīng)值的影響不顯著(P>0.05);二次項(xiàng)中,B2、C2、D2的對(duì)響應(yīng)值的影響達(dá)到極顯著(P<0.01),說(shuō)明各因素與多糖得率之間存在明顯的二次關(guān)系;交互項(xiàng)中,CD對(duì)響應(yīng)值的影響達(dá)到顯著水平(P<0.05),表明酶解溫度與酶解pH之間的交互效應(yīng)對(duì)蟬花孢子粉多糖的得率有顯著影響。

2.2.2 交互效應(yīng)分析 為考察酶解溫度與酶解pH之間的交互效應(yīng)對(duì)蟬花孢子粉多糖得率的影響,可固定其它因素為零水平,由Design Expert軟件繪制得到交互效應(yīng)的響應(yīng)面,如圖6所示。響應(yīng)面坡度越陡峭,表明兩因素間的交互效應(yīng)對(duì)多糖得率的影響越大。當(dāng)酶解溫度從40 ℃增加到50 ℃,多糖得率隨之增加;酶解溫度超過(guò)50 ℃后,多糖得率逐漸下降。酶解pH從5.5增加到6.0,多糖得率隨之增加;酶解pH超過(guò)6.0后,多糖得率逐漸降低。因此要獲得較高的多糖得率,酶解溫度應(yīng)在50 ℃左右,酶解pH應(yīng)在6.0左右。

圖6 酶解溫度與酶解pH的交互效應(yīng) 對(duì)蟬花孢子粉多糖得率的影響Fig.6 Interactive effect of enzymolysis temperature and enzymolysis pH value on the yield of CCSP

2.2.3 最優(yōu)提取工藝優(yōu)化以及驗(yàn)證試驗(yàn) 對(duì)上述回歸方程求二階偏導(dǎo),得到纖維素酶輔助提取蟬花孢子粉多糖的最佳工藝參數(shù)為料液比34.9 mL/g、纖維素酶用量0.64%、酶解時(shí)間80 min、酶解pH5.98、酶解溫度50.06 ℃,在此條件下蟬花孢子粉多糖得率的理論值為7.48%。為便于實(shí)際操作,將最佳工藝參數(shù)調(diào)整為液料比35 mL/g,纖維素酶用量0.64%、酶解時(shí)間80 min、酶解pH6.0、酶解溫度50 ℃。在此修正條件下,實(shí)測(cè)蟬花孢子粉多糖得率為7.46%±0.12%(n=3),與理論值較一致,表明此模型的預(yù)測(cè)性較好,可用于指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐。

2.3 蟬花孢子粉多糖對(duì)酒精性肝損傷小鼠的保護(hù)作用

2.3.1 蟬花孢子粉多糖對(duì)小鼠體重與臟器系數(shù)的影響 由表5可知,與正常組相比,模型組小鼠體重增加值顯著(P<0.05)下降,肝臟系數(shù)和脾臟系數(shù)顯著升高(P<0.05)。與模型組小鼠相比,蟬花孢子粉多糖處理組小鼠體重增加值顯著(P<0.05)增加,肝臟系數(shù)和脾臟系數(shù)顯著(P<0.05)下降;中劑量組和高劑量組小鼠體重增加值、肝臟和脾臟系數(shù)與正常組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。與模型組相比,陽(yáng)性對(duì)照水飛薊賓也能顯著(P<0.05)降低酒精性肝損傷小鼠的肝臟系數(shù)和脾臟系數(shù),改善小鼠體重。

2.3.2 蟬花孢子粉多糖對(duì)血清ALT和AST活性的影響 如圖7所示,模型組小鼠血清AST和ALT活性極顯著高于正常組(P<0.01),表明酒精暴露導(dǎo)致小鼠肝細(xì)胞損傷。與模型小鼠相比,蟬花孢子粉多糖組小鼠血清中的AST和ALT活性極顯著降低(P<0.01)。水飛薊賓也能極顯著降低小鼠血清ALT和AST活性(P<0.01)。

表5 蟬花孢子粉多糖對(duì)酒精性肝損傷小鼠體重增加值、肝臟系數(shù)和脾臟系數(shù)的影響Table 5 Effects of CCSP on increase of body weight and organ index in alcohol-induced liver injury mice

表6 蟬花孢子粉多糖對(duì)酒精性肝損傷小鼠肝臟SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量的影響Table 6 Effect of CCSP on liver SOD,CAT,GSH-Px activities and MDA level in alcohol-induced liver injury mice

圖7 蟬花孢子粉多糖對(duì)酒精性肝損傷 小鼠血清中ALT和AST活性的影響Fig.7 Effect of polysaccharidesspores of Cordyceps cicadae on serum ALT and AST activities in alcohol-inducedliver injury mice注:**P<0.01,與模型組比較極顯著; # #P<0.01,與正常組比較極顯著。

2.3.3 蟬花孢子粉多糖對(duì)肝組織中抗氧化酶和MDA含量的影響 如表6所示,模型組小鼠肝臟SOD、CAT和GSH-Px活性均顯著低于正常組(P<0.05),MDA含量顯著高于正常組(P<0.05),提示酒精暴露損傷了機(jī)體抗氧化防御體系。蟬花多糖低、中、高劑量組小鼠肝臟中SOD、CAT和GSH-Px活性均顯著高于模型組(P<0.05),MDA含量顯著低于模型組(P<0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組小鼠抗氧化酶含量也顯著高于模型組(P<0.05),MDA水平顯著低于模型組(P<0.05)。

3 討論與結(jié)論

酶輔助提取技術(shù)具有提取得率高、提取條件溫和短等優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)已應(yīng)用于多種生物活性多糖的提取中。Li等[19]獲得了酶輔助提取石榴皮多糖的最佳工藝條件為酶解溫度55 ℃,酶解pH5.0,酶解時(shí)間88 min,液料比 22∶1 mL/g,纖維素酶用量0.93%。Wu等[20]獲得了復(fù)合酶輔助提取竹蓀多糖的最佳工藝參數(shù)為纖維素酶用量2.0%,木瓜蛋白酶用量2.0%,果膠酶用量1.5%,酶解溫度52.5 ℃,酶解時(shí)間105 min,酶解pH5.25。Rostami等[21]獲得了酶輔助提取歐錦葵多糖的最佳提取條件為纖維素酶用量5.64%,酶解溫度55.65 ℃,酶解時(shí)間3.4 h,酶解pH5.22。本研究獲得的纖維素酶輔助提取蟬花孢子粉多糖的最佳工藝參數(shù)為液料比35 mL/g,纖維素酶用量0.64%、酶解時(shí)間80 min、酶解pH6、酶解溫度50 ℃。不同研究者所得的最佳工藝參數(shù)差異較大,這可能與原材料的種類、原材料的粉碎程度、多糖在細(xì)胞內(nèi)的存在位置等因素有關(guān)。

肝脾腫大是酒精性肝損傷臨床上最為常見(jiàn)的體征,肝臟系數(shù)和脾臟系數(shù)可反映肝脾腫大的程度。蟬花孢子粉多糖可明顯降低酒精性肝損傷小鼠的肝臟系數(shù)和脾臟系數(shù),提示蟬花孢子粉多糖可緩解酒精攝入造成的肝脾腫大。

肝臟是酒精代謝的主要場(chǎng)所,酒精代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧,導(dǎo)致肝臟發(fā)生氧化應(yīng)激,造成肝細(xì)胞膜損傷,致使血清AST和ALT活性升高。血清AST和ALT活性通常被認(rèn)為是肝細(xì)胞損傷的生物標(biāo)志物[22-23]。低、中和高劑量蟬花孢子粉多糖均能顯著(P<0.05)拮抗急性酒精誘導(dǎo)的小鼠血清ALT和AST活性升高,提示蟬花孢子粉多糖可能通過(guò)維持肝細(xì)胞膜通透性,從而發(fā)揮其對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠的保護(hù)作用,這與前人研究結(jié)果一致[24-26]。

機(jī)體抗氧化防御體系分為兩類,即酶促抗氧化體系和非酶促抗氧化體系;酶促抗氧化體系主要由SOD、CAT和GSH-Px等組成[27];MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的終產(chǎn)物,可反映機(jī)體氧化損傷的程度[28-29]。乙醇代謝過(guò)程中產(chǎn)生的大量活性氧可使SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,改變其空間構(gòu)象,從而使酶活性下降;攻擊細(xì)胞內(nèi)的生物大分子,引起脂質(zhì)氧化損傷等。蟬花孢子粉多糖能顯著(P<0.05)提高小鼠肝組織中抗氧化酶活性,降低MDA含量,提示蟬花孢子粉多糖可通過(guò)提高機(jī)體抗氧化酶活性,發(fā)揮其對(duì)酒精性肝損傷小鼠的保護(hù)作用。

本研究通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面法優(yōu)化得到了纖維素酶輔助提取蟬花孢子粉多糖的最佳工藝參數(shù)為液料比35 mL/g,纖維素酶用量0.64%、酶解時(shí)間80 min、酶解pH6、酶解溫度50 ℃。在此條件下,蟬花孢子粉多糖得率為7.46%±0.12%。

蟬花孢子粉多糖能降低酒精性肝損傷小鼠血清ALT和AST活性,拮抗酒精所致小鼠肝臟SOD、CAT和GSH-Px活性的下降,降低MDA含量。結(jié)果表明蟬花孢子粉多糖對(duì)酒精致急性肝損傷小鼠具有較好保護(hù)作用,其作用機(jī)制與提高機(jī)體SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶活性相關(guān)。