免疫性血小板減少性紫癜患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平變化及其與預后的關系

蔣玲 鐘麗麗 廖龍躍

【摘要】 目的：探討免疫性血小板減少性紫癜（ITP）患兒血小板相關抗體（PAIgG、PAIgM、PAIgA）水平變化及其與預后的關系。方法：回顧性分析本院2017年1月-2020年9月82例ITP患兒的臨床資料，并將其作為研究組，另選取本院同期體檢的50例健康兒童作為對照組。研究組患兒根據病情嚴重程度分為輕度組（n=19）、中度組（n=34）和重度組（n=29），并根據預后情況分為預后良好組（n=65）和預后不良組（n=17）。采集各組空腹靜脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平，分析ITP患兒PAIgG、pAIgM、PAIgA水平變化，使用ROC曲線分析其與預后的關系。結果：研究組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。不同病情嚴重程度ITP患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。重度組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均高于中度組和輕度組，中度組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均高于輕度組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。預后良好組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均低于預后不良組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。由ROC曲線可知，PAIgG、PAIgM、PAIgA三者聯(lián)合預測ITP患兒的AUC為0.901，高于三者單獨預測的0.724、0.715、0.710（P<0.05）。結論：ITP患兒PAIgG、pAIgM、PAIgA水平升高，三者與病情嚴重程度及預后相關，可作為臨床評估預后的參考指標。

【關鍵詞】 免疫性血小板減少性紫癜 血小板抗體 預后

Changes of PAIgG， PAIgM and PAIgA Levels in Children with Immune Thrombocytopenic Purpura and Their Relationship with Prognosis/JIANG Ling， ZHONG Lili， LIAO Longyue. //Medical Innovation of China， 2021， 18（12）： 0-089

[Abstract] Objective： To explore the changes of platelet-related antibodies （PAIgG， PAIgM， PAIgA） levels in children with immune thrombocytopenic purpura （ITP） and their relationship with prognosis. Method： The clinical data of 82 children with ITP in our hospital from January 2017 to September 2020 were retrospectively analyzed， and they were selected as the research group， and 50 healthy children who underwent physical examination in the same period in our hospital were selected as the control group. The children in the study group were divided into mild group （n=19）， moderate group （n=34） and severe group （n=29） according to the severity of the disease. According to the prognosis， they were divided into good prognosis group （n=65） and poor prognosis group （n=17）. Fastening venous blood was collected in each group， and the levels of PAIgG， PAIgM and PAIgA in each group were detected by ELISA. Changes in PAIgG， PAIgM and PAIgA levels in ITP children were analyzed， and the relationships between PAIgG， PAIgM and PAIgA and prognosis were analyzed by ROC curve. Result： The levels of PAIgG， PAIgM and PAIgA in the study group were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Comparison of PAIgG， PAIgM and PAIgA levels in ITP children with different severity of disease， the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of PAIgG， PAIgM and PAIgA in severe group were higher than those in moderate group and mild group， and the levels of PAIgG， PAIgM and PAIgA in moderate group were higher than those in mild group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of PAIgG， PAIgM and PAIgA in the good prognosis group were lower than those in the poor prognosis group， the differences were statistically significant （P<0.05）. According to the ROC curve， the AUC of PAIgG， PAIgM and PAIgA in children with ITP was 0.901， which was higher than 0.724， 0.715 and 0.710 of the single prediction of three （P<0.05）. Conclusion： The levels of PAIgG， PAIgM and PAIgA increase in ITP children， which are correlated with the severity of the disease and prognosis， and could be used as a reference index for clinical evaluation of prognosis.

[Key words] Immune thrombocytopenic purpura Platelet antibody Prognosis

First-authors address： Xinyu Peoples Hospital， Xinyu 338000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.12.020

免疫性血小板減少性紫癜（ITP）是巨噬細胞及血小板在免疫紊亂作用下生成減少而引起的獲得性自身免疫性出血性疾病，患兒臨床以血小板減少、黏膜及皮膚自發(fā)性出血等為主要表現(xiàn)[1-2]。近年來我國ITP發(fā)病率呈升高趨勢，但其發(fā)病具體機制仍處于研究中，臨床致力于尋找診斷及預測ITP預后的可靠指標[3]。血小板相關抗體（PAIg）是臨床診斷出血性疾病的重要指標，多項報道均顯示，大部分ITP患兒會出現(xiàn)PAIg水平升高，其中包括PAIgG、PAIgM及PAIgA[4-6]。隨著醫(yī)學技術的發(fā)展，臨床對出血性疾病與PAIg關系的研究不斷開展，但關于PAIg與ITP患兒病情嚴重程度及預后關系的報道較少。基于此，本研究探討ITP患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平變化及其與預后的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017年1月-2020年9月本院82例ITP患兒的臨床資料，并將其作為研究組。（1）納入標準：①滿足《血液病診斷及治療標準》中ITP診斷標準[7];②首次確診為ITP;③年齡不超過16歲;④近期未接受相關免疫治療或血小板輸注治療。（2）排除標準：①繼發(fā)性血小板減少癥;②合并惡性腫瘤、內分泌性疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其他自身免疫性疾病;③先天發(fā)育不全或畸形;④精神、認知功能嚴重損傷;⑤存在血液系統(tǒng)疾病史;⑥腦、心、肺等重要臟器嚴重損傷;⑦臨床資料不全。另選取本院同期體檢的50例健康兒童作為對照組?；純杭覍倬炇鹬橥鈺?，本研究經醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 （1）血小板分離：所有研究對象于清晨空腹取靜脈血約6 mL，放置于EDTA抗凝管中，以800 r/min轉速離心5 min后取富血小板血漿，加入等量PBS-BSA清洗液，以800 r/min轉速離心5 min后，去上清液，得血小板沉淀，并調整血小板濃度為3×109/L。（2）PAIgG、PAIgM、PAIgA檢測：將FITC-羊抗鼠IgG、FITC-羊抗人IgM、FITC-羊抗人IgA（均由美國BD公司生產）分別與1 mL血小板懸液混合，室溫下，避光急性10 min孵育，使用PBS-BSA洗滌2次進行檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測PAIgG、PAIgA、PAIgM，將同型陰性對照設置陽性閾值。

1.2.2 治療方法 患兒給予靜注人免疫球蛋白[生產廠家：國藥集團武漢血液制品有限公司，批準文號：國藥準字S20070027，規(guī)格：2.5 g/瓶（5%，50 mL）]，400 mg/（kg·d），靜脈注射;口服醋酸潑尼松片（生產廠家：新鄉(xiāng)市常樂制藥有限責任公司，批準文號：國藥準字H41020214，規(guī)格：

5 mg/片），20 mg/d;重組人血小板生成素（生產廠家：沈陽三生制藥有限責任公司，批準文號：國藥準字S20050048，規(guī)格：15 000 U/mL）300 U/（kg·d），皮下注射。

1.3 觀察指標及判定標準

1.3.1 比較兩組一般資料 統(tǒng)計并比較兩組性別、年齡、體重等一般資料。

1.3.2 比較兩組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平 比較研究組及對照組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平。

1.3.3 比較不同病情嚴重程度ITP患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平 根據血小板減少程度，將ITP患兒分為輕度組（血小板計數(shù)≥30×109/L）19例、中度組（10×109/L≤血小板計數(shù)<30×109/L）21例、重度組（血小板計數(shù)<10×109/L），比較各組ITP患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平。

1.3.4 比較不同預后ITP患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平 療效判定如下，顯效：血小板計數(shù)恢復正常，臨床癥狀消失，2個月內無復發(fā);有效：血小板計數(shù)超過50×109/L或升高30×109/L，臨床癥狀明顯改善，2個月內無復發(fā);緩解：血小板計數(shù)不超過30×109/L，臨床癥狀有所改善，2個月內無復發(fā);無效：未達到上述標準[8]。治療有效及顯效患兒為預后良好組（n=65），治療無效及緩解患兒為預后不良組（n=17），比較預后良好組及不良組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 21.0軟件對所得數(shù)據進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗，多組數(shù)據比較采用單因素方差分析;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。采用ROC曲線分析PAIgG、pAIgM、PAIgA水平對ITP患兒預后的預測價值。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 研究組女31例，男51例;年齡6～14歲，平均（9.71±1.81）歲;體重22～58 kg，平均（31.52±3.24）kg。對照組女22例，男28例;

年齡6～15歲，平均（10.03±1.55）歲;體重24～52 kg，平均（30.84±3.02）kg。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 研究組和對照組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平比較 研究組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.3 不同病情嚴重程度ITP患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平比較 不同病情嚴重程度ITP患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。重度組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均高于中度組和輕度組，中度組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均高于輕度組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.4 不同預后ITP患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平比較 預后良好組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均低于預后不良組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表3。

2.5 PAIgG、PAIgM、PAIgA水平及三者聯(lián)合對ITP患兒預后的預測價值 由ROC曲線可知，PAIgG、PAIgM、PAIgA三者聯(lián)合預測ITP患兒預后的AUC為0.901，高于三者單獨預測的0.724、0.715、0.710（P<0.05），見圖1和表4。

3 討論

ITP在不同種族、性別及年齡人群中均存在患病者，發(fā)病年齡出現(xiàn)兩極分化，在14歲以下兒童及60歲以上老年群體的發(fā)病率相對較高[9]。血小板主要脫落于巨核細胞胞質中，在其表面存在復雜的抗原，臨床根據抗原類型將血小板抗體分為特異性抗體及PAIg。迄今ITP發(fā)病機制尚未闡明，多數(shù)學者認為免疫調節(jié)功能異常是造成該病的重要原因，而PAIg在ITP的發(fā)生及進展中發(fā)揮著重要作用[10-11]。有研究認為，機體免疫介導產生的PAIg會促進單核-巨噬細胞系統(tǒng)吞噬血小板，導致外周血中血小板明顯減少，引起ITP[12]。此外，PAIg還能結合巨核細胞表面抗原，對血小板的生成發(fā)揮直接抑制作用[13]。因此，現(xiàn)階段臨床常通過檢測PAIg水平對ITP進行診斷。

目前PAIgG、PAIgM、PAIgA等抗體是臨床研究較多的PAIg，IgG是占比最多的抗體，IgG抗體與血小板抗原結合后留置于單核-巨噬細胞系統(tǒng)中，破壞血小板，造成血小板減少[14]。PAIgM的細胞膜溶解能力較強，可以影響血小板凋亡過程，此外，PAIgM也能夠激活補體，激發(fā)相關反應鏈，影響血小板功能。IgA的占比僅次于IgG，同時具備IgG及IgM部分功能，可以影響免疫反應[15]。有研究報道，ITP患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平高于健康兒童[16]。本研究使用流式細胞計數(shù)儀檢測ITP患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA水平發(fā)現(xiàn)，研究組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均高于對照組，與上述研究結果類似，提示PAIgG、PAIgM、PAIgA與ITP的發(fā)生密切相關。葉加建等[17]研究發(fā)現(xiàn)，ITP患者血小板相關抗體水平遠高于健康人群，也佐證了本研究結果。石元耀等[18]認為，PAIgG、PAIgM、PAIgA與ITP患兒的病情嚴重程度有關，隨著ITP患兒病情的加重，PAIgG、PAIgM、PAIgA水平也隨之升高。本研究結果顯示，重度組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平高于中度組和輕度組，中度組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均高于輕度組，與其研究結果一致，表明PAIgG、PAIgM、PAIgA水平變化會影響ITP患兒病情進展。ITP患兒體內的PAIg升高，使血小板減少，導致血小板生成刺激增加，進而生成較多的前血小板，前血小板由于含有較多的α顆粒，其體積及密度明顯大于正常血小板，使之在血液循環(huán)中更容易被破壞[19]。此外，PAIg結合抗原后會對補體系統(tǒng)發(fā)揮激活作用，使巨噬細胞表面受體和C3裂解產物相結合，加速血小板吞噬過程。PAIgG的FC段可以結合巨噬細胞FC受體，發(fā)揮吞噬血小板的作用[20]?，F(xiàn)階段臨床少有PAIgG、PAIgM、PAIgA水平與ITP患兒預后的關系研究，本研究發(fā)現(xiàn)，ITP患兒預后良好組PAIgG、PAIgM、PAIgA水平均低于預后不良組，說明PAIgG、PAIgM、PAIgA水平有利于判斷ITP患兒的預后。本研究ROC曲線分析PAIg對ITP患兒預后的預測價值發(fā)現(xiàn)，PAIgG、PAIgM、PAIgA三者聯(lián)合預測ITP患兒預后的AUC高于三者單獨預測，進一步證實了PAIgG、PAIgM及PAIgA水平對ITP患兒預后的預測價值較高。臨床應加強檢測ITP患兒PAIg水平，對評估ITP患兒病情進展及判斷預后具有重要的意義。

綜上所述，ITP患兒PAIgG、pAIgM、PAIgA水平升高，三者與病情嚴重程度相關，聯(lián)合檢測對預后具有良好的預測價值，可作為臨床評估預后的參考指標。

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（收稿日期：2021-03-05） （本文編輯：姬思雨）