基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究三葉湯治療咳嗽的作用和配伍規(guī)律

賴艷妮詹少鋒劉小虹黃慧婷*

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州510405； 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州510405）

“咳嗽”在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中是一種常見的呼吸道癥狀，屬于一種重要的防御機(jī)制，而在中醫(yī)學(xué)中則屬于肺系疾病中獨(dú)立的病名?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》 中提出“五臟六腑皆令人咳，非獨(dú)肺也”，認(rèn)為“咳”本屬肺病，但不是肺獨(dú)有之病，有肺病及于他臟而為咳者，有他臟病及于肺而咳者［1］?！秱摗?繼承了“五臟六腑皆令人咳”的理論，將咳嗽歸納為六經(jīng)病癥［2］。

三葉湯由“三葉”（枇杷葉、龍脷葉、人參葉）為君，苦杏仁、浙貝母、紫菀、款冬花、桔梗、牛蒡子、防風(fēng)、木蝴蝶、甘草等相伍組成，是嶺南醫(yī)家治療多種原因引起的急、慢性咳嗽的經(jīng)驗(yàn)方，通過臨床辨證加減化裁，對治療鼻后滴流綜合征慢性咳嗽［3］、咳嗽變異型哮喘［4］、風(fēng)燥犯肺型感染后咳嗽［5］、喉源性咳嗽［6］?？色@得良好的效果。然而，對于三葉湯治療咳嗽基礎(chǔ)研究的報(bào)道仍處于空缺的狀態(tài)，且中藥多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)限制了中藥的進(jìn)一步開發(fā)和走向國際化。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從整體觀出發(fā)，構(gòu)建藥物、分子、靶點(diǎn)、疾病之間的多重網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，多層次、全面地闡明中藥方劑的藥理作用機(jī)制［7］，為中醫(yī)藥的發(fā)展提供了新的視角。本研究擬通過借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的理念和方法，對三葉湯中君、臣、佐、使治療咳嗽的分子機(jī)制和配伍規(guī)律進(jìn)行剖析，為進(jìn)一步開發(fā)和臨床運(yùn)用提供科學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料 TCMSP 數(shù)據(jù)庫［8］（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform／中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)，http：／ ／lsp.nwu.edu.cn／tc?msp.php ）；DAVID 數(shù)據(jù)庫（Laboratory of Human Retrovirology and Immunoinformatics，https：／ ／david.ncifcrf.gov）；CTD 數(shù)據(jù)庫（The Comparative Toxicogenomics Database／比較毒物基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫，http：／ ／ctdbase.org）；Polysearch 數(shù)據(jù)庫（http：／ ／polysearch.cs.ualberta.ca）；STRING 數(shù)據(jù)庫［9］（https：／ ／string?db.org／cgi／input.pl）；Venny2.1.0 工 具（http：／ ／bioinfogp.cnb.csic.es／tools／venny／index.html）；Cytoscape3.7.1 軟件；gProfiler 工具［10］（https：／ ／biit.cs.ut.ee／gprofiler／gost）。

1.2 三葉湯潛在活性成分及靶點(diǎn)的獲取 將評估藥物活性的兩個(gè)重要參數(shù)——生物口服利用度≥20%（oral bioavail?ability，OB）及類藥性≥0.15（Drug?likeness，DL）作為初次篩選潛在活性成分的重要閾值［11］（每味中藥化學(xué)成分中主要的活性成分及特征成分也將納入為潛在活性成分），從TCMSP 數(shù)據(jù)庫中獲得三葉湯潛在活性成分及潛在預(yù)測蛋白靶點(diǎn)。利用DAVID 數(shù)據(jù)庫的基因名稱轉(zhuǎn)換工具，將蛋白靶點(diǎn)轉(zhuǎn)換為基因名。

1.3 三葉湯治療咳嗽候選活性成分及靶點(diǎn)的篩選 結(jié)合CTD 數(shù)據(jù)庫、Polysearch2 數(shù)據(jù)庫及String 數(shù)據(jù)庫，獲得目標(biāo)疾?。人裕┑陌悬c(diǎn)。使用韋恩圖工具Venny2.1.0，將疾病靶點(diǎn)與三葉湯潛在預(yù)測靶點(diǎn)進(jìn)行維恩圖的繪制，并篩得三葉湯治療咳嗽的候選靶點(diǎn)。

1.4 三葉湯治療咳嗽“藥物?活性成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)及蛋白互作網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 通過整合三葉湯治療咳嗽的候選活性成分?靶點(diǎn)的文本數(shù)據(jù)，運(yùn)用Cytoscape3.7.1 軟件分別構(gòu)建三葉湯君藥、臣藥、佐藥、使藥組合治療咳嗽的“藥物?活性成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。通過軟件中的NetworkAnalyzer 工具進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)湫再|(zhì)分析，同時(shí)運(yùn)用cytoHubba 工具進(jìn)行Hubba nodes 的分析，獲得以degree 為算法的在該網(wǎng)絡(luò)中排名前70 的核心節(jié)點(diǎn)并構(gòu)建核心節(jié)點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)。

1.5 基因本位（GO）及KEGG 富集分析 使用gProfiler工具對核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO 富集分析，包括生物學(xué)過程（Bio?logica lProcess，BP）、細(xì)胞組 分（Cellular Component，CC）、分子功能（Molecular Function，MF）富集分析。結(jié)合Cytoscape 軟件中的ClueGO 工具，將核心靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 富集分析，并使用CluePedia 進(jìn)行富集網(wǎng)絡(luò)的可視化。

2 結(jié)果

2.1 三葉湯治療咳嗽潛在活性成分及其靶點(diǎn)信息 通過檢索TCMSP 數(shù)據(jù)庫中三葉湯組成藥物（枇杷葉、人參葉、龍脷葉）的各自所含化學(xué)成分及對應(yīng)預(yù)測靶點(diǎn)，共獲得446種化學(xué)成分及303 個(gè)預(yù)測靶點(diǎn)，通過OB 值和DL 值篩選后，剩余潛在活性成分17 種。另外，三味中藥中一些沒有達(dá)到OB 和DL 值閾值的主要活性成分也納入潛在活性成分中，如龍脷葉中的合金歡基丙酮［12］，枇杷葉中的蘆丁、異槲皮苷、熊果酸、齊墩果酸及科羅索酸［13?14］。從CTD 數(shù)據(jù)庫中獲取的與“咳嗽”相關(guān)的靶點(diǎn)共有19 171 個(gè)，三葉湯預(yù)測靶點(diǎn)中共有277 個(gè)靶點(diǎn)與“咳嗽”相關(guān)。Degree≥3 的潛在活性化合物詳細(xì)信息如表1 所示，degree≥3 的潛在關(guān)鍵靶點(diǎn)詳細(xì)信息如表2 所示。

表1 三葉湯君藥組合潛在活性成分基本信息

表2 三葉湯君藥組合潛在關(guān)鍵靶點(diǎn)

2.2 網(wǎng)絡(luò)分析

2.2.1 君藥?潛在活性成分?靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)分析 分析網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)湫再|(zhì)可以有效、快速、全面地了解核心活性成分及靶點(diǎn)，有助于進(jìn)一步掌握三葉湯君藥治療咳嗽的分子作用機(jī)制。如圖1 所示，該網(wǎng)絡(luò)共有個(gè)271 節(jié)點(diǎn)（黃色三角形為中藥、紫色圓形為潛在活性成分、紅色六邊形為靶點(diǎn)），形成的最短路徑共有73 170 條（節(jié)點(diǎn)間的連線代表相互作用），網(wǎng)絡(luò)異質(zhì)性參數(shù)為3.352，集中性參數(shù)為0.458。Degree 值越大，則節(jié)點(diǎn)越大，表明該節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中越為重要。以de?gree 為橫坐標(biāo)（X），對應(yīng)節(jié)點(diǎn)數(shù)（nodes）為縱坐標(biāo)（Y），形成的冪函數(shù)為Y＝39.638X－0.991，相關(guān)性系數(shù)為0.963，R2為0.690。

圖1 三葉湯君藥候選活性成分?靶點(diǎn)互相作用網(wǎng)絡(luò)

2.2.2 君藥核心節(jié)點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)分析 在三葉湯君藥治療咳嗽Degree 排名前70 的核心“藥物?活性成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)互作圖（圖2）中，枇杷葉（degree ＝17）和人參葉（degree ＝4）在方藥中占據(jù)較重要的位置，即對應(yīng)的活性成分和／或靶點(diǎn)所占比例較多（三角形為中藥，圓形為活性成分，六邊形為靶點(diǎn)，顏色越深表明該節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的degree 越大）?；钚猿煞址矫妫琶^前的分別有MOL000098（degree ＝126）、MOL006821（degree ＝105）、MOL000422（degree ＝56）、MOL000358（degree ＝35）、MOL000354（degree ＝30）、MOL001002（degree ＝17）、MOL000511（degree ＝12）、MOL002372（degree ＝7）、MOL000878（degree ＝ 6）、MOL000415（degree ＝ 6）、MOL005344（degree ＝ 4）、MOL000359（degree ＝ 4）、MOL012588（degree ＝ 4）、MOL012579（degree ＝ 4）、MOL012578（degree＝4）。靶點(diǎn)前列腺素G ／ H 合成酶2（PTGS2）、孕酮受體（PGR）、凝血因子X（F10）、DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶2?α（TOP2A）、核受體 輔激活因子2（NCOA2）、Caspase?3（CASP3）、細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子BAX（BAX）、轉(zhuǎn)錄因子p65（RELA）、熱休克蛋白HSP 90?α（HSP90AA1）、前列腺素G（PTGS1）、凋亡調(diào)節(jié)因子Bcl?2（BCL2）、黃嘌呤脫氫酶（XDH）、轉(zhuǎn)錄因子AP?1（JUN）、腫瘤壞死因子（TNF）、γ?氨基丁酸受體亞基α ?1（GABRA1）、磷脂酰肌醇?4，5?二磷酸3?激酶催化亞基γ（PIK3CG）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARG）、雄激素受體（AR）的degree 依次為9、6、6、6、5、5、5、5、5、5、4、4、4、4、4、4、4、4。

圖2 三葉湯君藥核心節(jié)點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

2.3 君藥基因本位（GO）及KEGG 富集分析 運(yùn)用gPro?filer 工具將三葉湯中君藥的40 個(gè)潛在關(guān)鍵靶點(diǎn)分別進(jìn)行GO?CC（Cellular Component／細(xì)胞組 分）、GO?MF（Molecular Function／分子功 能）、GO?BP（Biological Process／生物過程）。

GO?CC 富集結(jié)果共有23 個(gè)條目具有顯著性，顯著性前20 的條目（圖3）有細(xì)胞外空間、細(xì)胞質(zhì)、質(zhì)膜、細(xì)胞外區(qū)域、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞表面、膜筏、核質(zhì)、小窩、受體復(fù)合物、線粒體外膜、質(zhì)膜的組成部分、細(xì)胞質(zhì)的核周區(qū)域、質(zhì)膜外側(cè)、細(xì)胞外外泌體、線粒體、核染色質(zhì)、核、突觸后膜和血小板α 顆粒腔等細(xì)胞組分。

圖3 GO?CC 富集結(jié)果

GO?MF 富集結(jié)果中具有顯著性意義的條目共有27 個(gè)，顯著性前20 的條目（圖4）包括酶結(jié)合、蛋白質(zhì)結(jié)合、相同的蛋白質(zhì)結(jié)合、蛋白激酶結(jié)合、蛋白質(zhì)同源二聚化活性、藥物結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、蛋白質(zhì)異二聚化活性、支架蛋白結(jié)合、RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子活性，配體激活的序列特異性DNA 結(jié)合、糖蛋白結(jié)合、蛋白酪氨酸激酶活性、序列特異性DNA 結(jié)合、RNA 聚合酶Ⅱ核心啟動(dòng)子近端區(qū)序列特異性DNA 結(jié)合、蛋白激酶活性、轉(zhuǎn)錄激活因子活性，RNA 聚合酶Ⅱ核心啟動(dòng)子近端區(qū)序列特異性結(jié)合、蛋白磷酸酶2A 結(jié)合、類固醇激素受體活性、轉(zhuǎn)錄因子活性，序列特異性DNA 結(jié)合及絲氨酸型內(nèi)肽酶活性等分子功能。

圖4 GO?MF 富集結(jié)果

GO?BP 富集結(jié)果共有145 個(gè)條目具有顯著性，排名前20 的條目（圖5）有對藥物的反應(yīng)、對脂多糖的反應(yīng)、衰老、來自RNA 聚合酶II 啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄的正調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)節(jié)，DNA 模板化、對雌二醇的反應(yīng)、細(xì)胞增殖的正調(diào)節(jié)、基因表達(dá)的正調(diào)節(jié)、凋亡過程的負(fù)調(diào)節(jié)、對缺氧的反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、一氧化氮生物合成過程的正調(diào)節(jié)、細(xì)胞對缺氧的反應(yīng)、對乙醇的反應(yīng)、血管生成的正調(diào)節(jié)、細(xì)胞對機(jī)械刺激的反應(yīng)、對有毒物質(zhì)的反應(yīng)、ERK1 和ERK2 級聯(lián)的正調(diào)節(jié)、平滑肌細(xì)胞增殖的正調(diào)節(jié)。

圖5 GO?BP 富集結(jié)果

40 個(gè)潛在關(guān)鍵靶點(diǎn)KEGG 富集分析結(jié)果（圖6）表明，三葉湯君藥治療咳嗽主要涉及低氧誘導(dǎo)因子?1（HIF?1）、腫瘤壞死因子（TNF）、磷脂酰肌醇?3?激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）等信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、I 型跨膜蛋白質(zhì)（Toll 樣受體）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和松弛素（Relaxin）信號(hào)通路。與肺部疾病相關(guān)的疾病信號(hào)通路包括小細(xì)胞肺癌、結(jié)核、甲型流感、百日咳等。最后利用Cytoscape 軟件中的CluePedia 工具將40 個(gè)潛在關(guān)鍵靶點(diǎn)富集的疾病通路與相關(guān)基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建和可視化（圖7），不同顏色代表不同的簇（cluster），顏色相同代表功能組分相似，這有利于進(jìn)一步探討潛在目標(biāo)基因與疾病通路之間的相互作用。

圖6 KEGG 富集結(jié)果

圖7 KEGG 富集信號(hào)通路?基因網(wǎng)絡(luò)

2.4 臣?佐?使藥組合的網(wǎng)絡(luò)分析 中醫(yī)藥治療疾病注重君臣佐使相伍相配，以達(dá)到最好的藥效發(fā)揮作用。為了更好地理解三葉湯中“臣?佐?使”藥的作用特點(diǎn)及配伍規(guī)律，分別對方中的臣藥組合“苦杏仁?款冬花?浙貝母?紫菀”、佐藥組合“木蝴蝶?桔梗?防風(fēng)?牛蒡子”及使藥“甘草”進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理的剖析，同時(shí)構(gòu)建藥物?活性成分?靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖（圖8～10）。紅色正方形為中藥，綠色三角形為活性分子，黃綠色圓形為靶點(diǎn)?；贠B、DL 值，同時(shí)通過文獻(xiàn)查閱保留每味中藥的主要活性成分和特征成分，初步共篩得211 個(gè)候選活性成分（未給出），針對疾病“咳嗽”進(jìn)一步篩得75 個(gè)潛在活性成分（表3）和16 個(gè)預(yù)測靶點(diǎn)（表4）。

表4 臣?佐?使藥預(yù)測靶點(diǎn)

圖8 臣藥組合網(wǎng)絡(luò)分析圖

表3 臣?佐?使藥潛在活性成分

臣藥組合共篩選出18 個(gè)化合物和12 個(gè)與“咳嗽”相關(guān)的靶點(diǎn)（圖8）。靶點(diǎn)分別為F2、NOS3、EGF、VEGFA、SERPINE1、ADRA2A、ADRA2B、OPRD1、DRD2、OPRM1、OPRK1、ADRA2C。KEGG 富集分析表明其主要與信號(hào)通路神經(jīng)活性配體?受體相互作用及HIF?1 信號(hào)通路相關(guān)聯(lián)；GO功能分析提示其主要涉及調(diào)節(jié)體液水平、磷脂酶C 激活G蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)傳導(dǎo)途徑、金屬離子傳輸?shù)恼{(diào)節(jié)、激酶活性的正調(diào)節(jié)和調(diào)節(jié)鉀離子的轉(zhuǎn)運(yùn)、白細(xì)胞介素?4 和白細(xì)胞介素?13 信號(hào)傳導(dǎo)等分子功能；

佐藥組合共篩選出30 個(gè)化合物和12 個(gè)與“咳嗽”相關(guān)的靶點(diǎn)（圖 9）。F2、OPRM1、NOS3、ALB、EDN1、SERPINE1、GCG、PYY、VEGFA、ADRA2A、EGF、ADRA2B。KEGG 富集提示其與HIF?1 信號(hào)通路相關(guān)；GO 功能分析表明第二信使介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)、調(diào)節(jié)體液水平、離子傳輸?shù)恼{(diào)節(jié)、信號(hào)受體活性的調(diào)節(jié)、傷口愈合的積極調(diào)節(jié)、對神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的積極調(diào)節(jié)、組織穩(wěn)態(tài)血小板激活，信號(hào)傳導(dǎo)和聚集及GPCR 配體結(jié)合與其關(guān)系密切；

圖9 佐藥組合網(wǎng)絡(luò)分析圖

使藥共篩選出38 個(gè)化合物和8 個(gè)與“咳嗽”相關(guān)的靶點(diǎn)（圖 10 ）。OPRM1、F2、OPRD1、NOS3、STAT3、VEGFA、EGF、SERPINE1。KEGG 富集提示HIF?1 信號(hào)通路與其顯著相關(guān)；GO 功能分析表明其與鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)、受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用的正調(diào)節(jié)、血液凝固的負(fù)調(diào)節(jié)、神經(jīng)系統(tǒng)過程的調(diào)節(jié)、急性炎癥反應(yīng)及白細(xì)胞介素?4 和白細(xì)胞介素?13信號(hào)傳導(dǎo)等分子功能密切相關(guān)。

圖10 使藥網(wǎng)絡(luò)分析圖

3 討論

三葉湯是嶺南醫(yī)家以疏風(fēng)潤肺止咳為組方原則，以止嗽散加減所創(chuàng)。用以治療嶺南地區(qū)治療多種原因引起的急、慢性咳嗽。方中“三葉”枇杷葉、龍脷葉、人參葉清均為清輕之品，借“治上焦如羽，非輕不舉”之法，清化相配，降潤相合，為治療肺家咳嗽之良藥。三葉湯化裁后對鼻后滴流綜合征慢性咳嗽（風(fēng)痰肺燥型）［3］、咳嗽變異型哮喘［4］、風(fēng)燥犯肺型感染后咳嗽［5］、喉源性咳嗽［6］等療效顯著。

在臨床療效確切的前提下，本研究擬借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法，從細(xì)胞、分子層面剖析三葉湯中君?臣?佐?使藥的配伍規(guī)律和藥理作用機(jī)制。在篩選出來的15 個(gè)君藥潛在活性成分中一些活性成分已有治療肺系疾病的相關(guān)研究報(bào)道：如研究表明人參皂苷Rh2（G?Rh2）對小鼠哮喘具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抑制磷酸化AKT、p38MAPK 以及NF?κB 信號(hào)通路有關(guān)［15］。槲皮素能通過抑制炎性介質(zhì)TNF?α、IL?8 的釋放而改善ALI 大鼠的氣體交換功能，從而減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)的急性肺損傷［16］。異鼠李素作為槲皮素的中間代謝產(chǎn)物，對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的急性肺損傷（ALI）模型有保護(hù)作用［17］，可在體內(nèi)和體外通過調(diào)控MAPKs 和NF?κB 信號(hào)通路顯著抑制TNF?α，IL?1β 和IL?6 的分泌，減輕ALI 模型的中性粒細(xì)胞浸潤及水腫。

對40 個(gè)君藥關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 富集，結(jié)果提示三葉湯君藥治療咳嗽的藥理作用機(jī)制可能與松弛素、低氧誘導(dǎo)因子?1、VEGF 等信號(hào)通路有關(guān)。研究表明，松弛素（relaxin，RLX）對肺有保護(hù)作用，可通過激活cAMP／PKA 途徑增強(qiáng)Epac 協(xié)同PKA 抑制ERK1／2 磷酸化，減輕ASMCs 增生來減輕氣道炎癥反應(yīng)［18］。低氧誘導(dǎo)因子?1（HIF?1）在LPS 導(dǎo)致的大鼠急性肺損傷中HIF?1 可通過VEGR、SDF1 及CXCR4等靶基因的表達(dá)促進(jìn)肺損傷的修復(fù)［19?20］。VEGF 是哮喘氣道重塑和炎癥的介質(zhì)，可通過刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、增加血管通透性來促進(jìn)支氣管內(nèi)新血管的生成［21］。

對臣藥?佐藥?使藥組合進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理剖析，發(fā)現(xiàn)均可通過HIF?1 信號(hào)通路，協(xié)同君藥調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)并及時(shí)促進(jìn)肺損傷的修復(fù)。同時(shí)臣藥組合還與白細(xì)胞介素?4 和白細(xì)胞介素13 的水平密切相關(guān)，而研究表明白細(xì)胞介素4 和13 分別在咳嗽變異型哮喘、支氣管哮喘的急性發(fā)作期起重要作用［22?23］。

綜上所述，三葉湯君藥可能是通過調(diào)控松弛素、腫瘤壞死因子、血管內(nèi)皮生長因子、低氧誘導(dǎo)因子?1、I 型跨膜蛋白質(zhì)等信號(hào)通路，抑制氣道炎癥反應(yīng)，減輕氣道重塑，促進(jìn)支氣管內(nèi)心血管的生成，減輕肺部損傷，從而達(dá)到治療小細(xì)胞肺癌、結(jié)核、甲型流感、百日咳等肺部疾病的作用。臣?佐?使藥則可通過調(diào)節(jié)HIF?1 信號(hào)通路、白細(xì)胞介素?4 和白細(xì)胞介素13 的水平協(xié)助君藥抑制炎癥反應(yīng)，減輕肺部損傷，達(dá)到協(xié)同配伍的作用。本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法，篩選了三葉湯治療“咳嗽”的關(guān)鍵靶點(diǎn)和潛在活性分子，初步探討了君藥?臣藥?佐藥?使藥的藥理作用機(jī)制和協(xié)同配伍作用特點(diǎn)，為三葉湯的進(jìn)一步開發(fā)和臨床運(yùn)用提供了科學(xué)依據(jù)。