基于Box?Behnken 響應(yīng)面法優(yōu)化萊菔子炒制工藝及對(duì)離體十二指腸運(yùn)動(dòng)的影響

龐荔丹魏嬌嬌苗 壯王安君吳家勁薛明真朱立俏

（山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南250355）

萊菔子為十字花科植物蘿卜Raphanus sativusL.的干燥成熟種子。具有消食除脹、降氣化痰之功效，常用于治療飲食停滯、脘腹脹滿、大便秘結(jié)、痰壅喘咳等癥［1］。傳統(tǒng)中藥炮制理論認(rèn)為萊菔子炮制具有“生熟異治，生升熟降”的藥性變化特點(diǎn)，生品主升，長(zhǎng)于涌入風(fēng)痰，炒品主降，長(zhǎng)于消食除脹、降氣化痰［2］。目前臨床均以炒萊菔子入藥?，F(xiàn)代研究表明，萊菔子可用于治療高血壓［3］、癌 癥［4］、消化不 良［5］、降血脂［6］、降 血糖［7］等疾病，主要含有硫苷類［8?9］、芥子酸及其寡糖酯［10?11］、芥子堿硫氰酸鹽［12］等成分，其中硫苷類成分為其炮制前后的特征性成分，蘿卜苷（glu?coraphenin，GRE）是其含量最高的硫苷類成分［13］，通過(guò)前期研究發(fā)現(xiàn)還含有另一硫苷類成分，暫定名為RS01。而炮制前后芥子堿硫氰酸鹽（si?napine thiocyanate，ST）的含量 未發(fā)生 明顯變化［14］。目前萊菔子均以ST 為指標(biāo)成分進(jìn)行提取、炮制及質(zhì)量控制研究，指標(biāo)成分缺乏專屬性。另外萊菔子炮制工藝參數(shù)多適用于小量鍋炒的規(guī)模［15］，與炒藥機(jī)工業(yè)化炒制的參數(shù)偏差較大?；诖?，本實(shí)驗(yàn)以優(yōu)化萊菔子炒藥機(jī)炒制工藝為目標(biāo)，采用Box?Behnken 響應(yīng)面法，以GRE、RS01 和ST 多指標(biāo)量化萊菔子的最佳炒制工藝，以期為規(guī)范萊菔子的炮制工藝和工業(yè)化大生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)，保證臨床用藥的安全性和有效性。

1 材料

Agilent1260 高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司）；MK?30 型炒藥機(jī)（江陰市祝塘明科機(jī)械廠）；EX225ZH／AD 型電子分析天平（十萬(wàn)分之一，常州奧豪斯儀器有限公司）；KQ5200 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；MP160 多道生理記錄儀（美國(guó)Biopac 公司）；HW200s 恒溫平滑肌實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司）；FLBP?200型萬(wàn)能高速粉碎機(jī)（上海菲力博食品機(jī)械有限公司）；GFL?230 電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市萊玻特瑞儀器設(shè)備有限公司）。蘿卜苷對(duì)照品（純度≥98%，美國(guó)Cayman 公司，批號(hào)0453522?24）；芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品（純度≥98%，成都德思特生物技術(shù)有限公司，批號(hào)DST160910?021）。乙腈、甲醇（色譜純，美國(guó)TEDIA 公司）；水為娃哈哈飲用純凈水；其余試劑為分析純。

生萊菔子飲片（生產(chǎn)批號(hào)181101），購(gòu)于山東百味堂中藥飲片有限公司，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院張芳副教授鑒定為十字花科植物蘿卜RaphanussativusL.的干燥成熟種子。

雄性健康SD 大鼠，體質(zhì)量（200～220）g，購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，合格證號(hào)SCXK（魯）20140007。

2 方法與結(jié)果

2.1 蘿卜苷、芥子堿硫氰酸鹽、RS01 含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 Inertsil ODS?3 色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相乙腈（A）?0.1% 磷酸（B），梯度洗脫（0～15 min，5%～10% A；15～17 min，10%～12.5% A；17～27 min，12.5%～14% A；27～55 min，14%～25% A；55～57 min，25%～70% A；57～70 min，70%～100% A；70～80 min，100% A）；體積流量1.0 mL／min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)225、326 nm；進(jìn)樣量10 μL。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取干燥至恒定質(zhì)量的蘿卜苷對(duì)照品12.70 mg、芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品10.75 mg，分別置于25 mL 量瓶中，用純凈水將蘿卜苷溶解后定容至刻度，制成0.508 mg／mL對(duì)照品溶液，備用；用50% 甲醇將芥子堿硫氰酸鹽溶解后定容至刻度，制成0.43 mg／mL 對(duì)照品溶液，備用。

2.1.3 供試品溶液制備 取炒萊菔子適量，粉碎，過(guò)40 目篩，精密稱取粉末約2 g，置于100 mL 具塞錐形瓶中，精密加入蒸餾水25 mL 浸泡30 min后，再精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲30 min，靜置，冷卻至室溫，補(bǔ)足減失質(zhì)量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.1.2”項(xiàng)下蘿卜苷對(duì)照品溶液1、2、5、10、20、50、80 μL，芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液1、2、5、8、10、15 μL，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣10 μL。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行回歸，得蘿卜苷、芥子堿硫氰酸鹽回歸方程分別為Y＝679.1X＋36.36（r＝0.999 8）、Y＝2 826X＋38.83（r＝0.999 8），分別在0.508～40.64、0.43～6.45 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 系統(tǒng)適應(yīng)性和專屬性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品、供試品溶液各10 μL，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣。結(jié)果，蘿卜苷、芥子堿硫氰酸鹽的保留時(shí)間分別為5.331、26.027 min，RS01 保留時(shí)間為49.093 min，分離度良好。色譜圖見圖1。

圖1 各成分HPLC 色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

2.1.6 精密度試驗(yàn) 取“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣6 次，測(cè)得蘿卜苷峰面積RSD 為0.63%，芥子堿硫氰酸鹽峰面積RSD 為0.84%，RS01 峰面積RSD 為0.74%，表明儀器精密度較好。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一炮制條件下的炒萊菔子粉末，按“2.1.3”項(xiàng)下方法平行制備6 份供試品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)得蘿卜苷峰面積RSD 為1.53%，芥子堿硫氰酸鹽峰面積RSD 為1.84%，RS01 峰面積RSD為1.69%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液，于0、2、4、6、8、10、12 h 在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)得蘿卜苷峰面積RSD 為0.89%，芥子堿硫氰酸鹽峰面積RSD 為1.29%，RS01 峰面積RSD 為1.56%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液6 份，精密加入蘿卜苷、芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下各進(jìn)樣10 μL測(cè)定，測(cè)得蘿卜苷、芥子堿硫氰酸鹽平均加樣回收率分別為98.92%、99.44%，RSD 分別為0.92%、2.35%。

2.1.10 RS01 含量變化表示 RS01 在炮制條件改變后，根據(jù)HPLC 數(shù)據(jù)分析可知其含量會(huì)發(fā)生明顯的變化，是具有顯著性的評(píng)價(jià)指標(biāo)，但由于缺乏對(duì)照品，無(wú)法采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行含量測(cè)定。因此，本實(shí)驗(yàn)以RS01 峰面積與所對(duì)應(yīng)飲片質(zhì)量的比值表示其相對(duì)含量。

2.1.11 綜合得分評(píng)價(jià)指標(biāo) 參考文獻(xiàn)［16］，以蘿卜苷、芥子堿硫氰酸鹽和RS01 為指標(biāo)成分，采用Box?Behnken 響應(yīng)面法進(jìn)行多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)，綜合得分（Z）＝蘿卜苷得分×40%＋芥子堿硫氰酸鹽得分×40%＋RS01 得分×20%、指標(biāo)成分得分（S）＝該指標(biāo)成分含量／該指標(biāo)成分所在組中含量的最高值。本實(shí)驗(yàn)單因素考察和響應(yīng)面分析均以綜合評(píng)分為主，各指標(biāo)得分為輔進(jìn)行分析。

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 炒制溫度 將炒藥機(jī)轉(zhuǎn)速設(shè)置為30 r／min，預(yù)熱30 min，取生萊菔子飲片約100 g，置于炒藥機(jī)中，分別于180、200、220、240、260 ℃炒制3 min，取出放涼，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)條件下進(jìn)樣，按“2.1.11”項(xiàng)下方法進(jìn)行指標(biāo)得分和綜合得分的計(jì)算。結(jié)果見表1。

表1 不同炒制溫度下指標(biāo)成分的指標(biāo)得分和綜合評(píng)分（n＝3）Tab.1 Index scores and comprehensive scores of index components at different processing temperatures（n＝3）

由表1 可知，3 種指標(biāo)成分均在炮制溫度200 ℃時(shí)出現(xiàn)最高值，但芥子堿硫氰酸鹽含量在各溫度下差別不大，同時(shí)以綜合評(píng)分也在200 ℃時(shí)得分最高。因此，選取180、200、220 ℃3 個(gè)水平進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化。

2.2.2 炒制時(shí)間 將炒藥機(jī)轉(zhuǎn)速設(shè)置為30 r／min，預(yù)熱30 min，稱取生萊菔子飲片100 g，置于炒藥機(jī)中，于200 ℃下分別炒制1、3、5、7 min，取出放涼，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)行HPLC 含量測(cè)定和指標(biāo)得分、綜合得分的計(jì)算。結(jié)果見表2。

表2 不同炒制時(shí)間下指標(biāo)成分的指標(biāo)得分和綜合評(píng)分Tab.2 Index scores and comprehensive scores of index components under different processing time

由表2 可知，蘿卜苷、芥子堿硫氰酸鹽硫氰酸鹽含量均在炒制時(shí)間為3 min 時(shí)出現(xiàn)最高值，RS01含量在1 min 時(shí)出現(xiàn)了最高值，但3 min 時(shí)與最高值十分接近。根據(jù)指標(biāo)得分為輔，綜合得分為主的分析，選取2、3、4 min 3 個(gè)水平進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化。

2.2.3 炒藥機(jī)轉(zhuǎn)速 將炒藥機(jī)溫度設(shè)置為200 ℃，預(yù)熱30 min，稱取生萊菔子飲片100 g，置于炒藥機(jī)中，分別于轉(zhuǎn)速20、30、40 r／min 下炒制3 min，取出放冷，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)行HPLC 測(cè)定和得分計(jì)算。結(jié)果見表3。

表3 炒藥機(jī)不同轉(zhuǎn)速下指標(biāo)成分的指標(biāo)得分和綜合評(píng)分Tab.3 Index scores and comprehensive scores of index components at different processing speed

由表3 可知，蘿卜苷、芥子堿硫氰酸鹽含量均在30 r／min 出現(xiàn)最高值，RS01 含量在20 r／min 出現(xiàn)最高值，綜合評(píng)分以炒制30 r／min 得分最高。因此，選取20、30、40 r／min 3 個(gè)水平進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化。

2.3 響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

2.3.1 響應(yīng)面法實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以炒制溫度（A）、炒制時(shí)間（B）和炒藥機(jī)轉(zhuǎn)速（C）作為考察因素，蘿卜苷、芥子堿硫氰酸鹽、RS01 的指標(biāo)得分（S）和綜合得分（Z）作為響應(yīng)值，設(shè)計(jì)3 因素3 水平方案，采用Box?Behnken 中心組合設(shè)計(jì)原理，經(jīng)Design?Expert V8.0.6 軟件處理，得到3 因素3 水平共17 組試驗(yàn)，結(jié)果見表4。

表4 萊菔子炒制工藝的響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果Tab.4 Results of response surface optimization for stir?frying process of R.sativus

2.3.2 方差分析 應(yīng)用Design?Expert.V8.0.6 軟件進(jìn)行分析，得到多元二次回歸模擬方程為Z＝－7.805 18＋0.071 495A＋0.980 42B－0.028 88C－3.310 53×10－3AB＋1.571 15×10－4AC＋3.278 48×10－3BC－1.521 31×10－4A2－0.058 818B2－2.393 56×10－4C2，方差分析見表5。方程決定系數(shù)R2＝0.960 0，校正決定系數(shù)＝0.908 6，表明該模型的擬合程度較好；F＝18.67，P＝0.000 4 ＜0.01，表明回歸方程具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；變異系數(shù)（CV%）為3.82%，方程的離散程度較小，且F失擬＝2.04，P＝0.250 5＞0.05，表明方程的失擬程度不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可用于優(yōu)選萊菔子炒制工藝。另外，一次項(xiàng)A、B、C、二次項(xiàng)A2、B2和兩兩交互項(xiàng)AB對(duì)于回歸模型具有顯著性影響，而3 個(gè)單因素指標(biāo)對(duì)于響應(yīng)面回歸模型的影響程度依次為A＞B＞C。

表5 方差分析Tab.5 Analysis of variance

2.3.3 響應(yīng)面3D 圖分析 按“2.3.2”項(xiàng)下得到的回歸方程，利用Design?Expert.V8.0.6 軟件進(jìn)行萊菔子炒制條件的優(yōu)選，響應(yīng)面分析見圖2。根據(jù)所得的3D 圖，可通過(guò)觀察響應(yīng)曲面的傾斜度來(lái)確定2 個(gè)指標(biāo)對(duì)于響應(yīng)值Z的影響程度，傾斜度越大，則影響程度越高，同時(shí)3D 圖的顏色變化和等高線形狀也可作為判斷曲面傾斜度大小的指標(biāo)，顏色越深則提取出的含量越多，坡度越大，對(duì)響應(yīng)值的影響越顯著，等高線最小橢圓的中心點(diǎn)即為響應(yīng)值最高點(diǎn)，橢圓形則表示兩因素交互作用明顯，而圓形則反之。因此，可以得出A與B、C的相互作用明顯，A對(duì)于Z的影響程度最大的結(jié)論。

圖2 炒制溫度、炒制時(shí)間和炒藥機(jī)轉(zhuǎn)速間的交互作用Fig.2 Interactions among stir?frying temperature，stir?frying time and rotation speed of herbal medicine roaster

以綜合評(píng)分作為響應(yīng)值并結(jié)合單因素考察方法，優(yōu)選出的萊菔子炒制條件為炒制溫度217.09 ℃，炒制時(shí) 間 3.05 min，炒制轉(zhuǎn) 速29.73 r／min?？紤]到實(shí)際應(yīng)用中的可行性，最終確定為炒制溫度220 ℃，炒制時(shí)間3 min，炒制轉(zhuǎn)速30 r／min。

2.3.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 取1 kg 生萊菔子飲片，共10份，按照響應(yīng)面法優(yōu)選出的炮制工藝，在200 ℃、2 min、40 r／min，200 ℃、3 min、30 r／min，220 ℃、3 min、30 r／min，220 ℃、3 min、20 r／min，240 ℃、3 min、30 r／min 5 種炮制條件下制備炒萊菔子飲片，每個(gè)條件平行制備2 份，結(jié)果見表6。由此可知，響應(yīng)面優(yōu)選的最佳炮制工藝的平均綜合得分為0.990 75，與回歸方程的擬合值1.038 342 761 接近，相對(duì)誤差均小于5%，2 組平行樣品的RSD＜3%，表明精密度較好；與相近幾組炮制工藝的數(shù)據(jù)相比，響應(yīng)面優(yōu)化出的炮制工藝3 個(gè)指標(biāo)的得分和綜合得分均最好，表明響應(yīng)面模型和回歸方程具有良好的預(yù)測(cè)性，所優(yōu)選出的萊菔子炮制工藝可行性高，對(duì)相關(guān)后續(xù)研究具有指導(dǎo)意義。

表6 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Tab.6 Results of verification tests

2.4 炒萊菔子水提液對(duì)大鼠離體十二指腸運(yùn)動(dòng)的影響

2.4.1 炒萊菔子水提液制備 取萊菔子飲片適量，置于炒藥機(jī)中，設(shè)置炒制溫度220 ℃，炒藥機(jī)轉(zhuǎn)速30 r／min，炒制時(shí)間3 min，粉碎，加10 倍量水提取2 次，每次0.5 h，濾過(guò)，合并提取液，濃縮至質(zhì)量濃度為1 g／mL，備用。

2.4.2 Kreb’s 營(yíng)養(yǎng)液制備 稱取NaCl 7.8 g、KCl 0.35 g、MgSO40.15 g、NaH2PO40.21 g、NaHCO31.37 g、CaCl211.1 g、葡萄糖1.8 g，加蒸餾水至1 L，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.4.3 大鼠離體十二指腸腸管制備 大鼠禁食不禁水24 h，脫頸椎處死后剖開腹部，剪取近幽門端十二指腸腸管10 cm，置于預(yù)冷的Kreb’s 液中，小心分離腸外周結(jié)締組織，用預(yù)冷的Kreb’s 液沖洗腸內(nèi)容物，剪成3 cm 長(zhǎng)的腸段備用。將腸段置于盛有20 mL Kreb’s 液的恒溫37 ℃浴槽中，持續(xù)通入5% CO2和95% O2混合氣體（1～2 個(gè)氣泡／s），每隔15 min 換1 次Kreb’s 液，前負(fù)荷1 g，平衡1 h，待腸管收縮穩(wěn)定后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)［18］。分別緩慢向盛有Kreb’s 液的恒溫37 ℃浴槽中加入不同劑量的炒萊菔子水提液，記錄給藥前后的十二指腸腸段收縮的振幅和張力，37 ℃Kreb’s 液沖洗腸段3 次，待大鼠腸段恢復(fù)正常收縮頻率后，滴加下一個(gè)劑量的炒萊菔子水提液，重復(fù)上述步驟。

2.4.4 不同劑量炒萊菔子水提液對(duì)大鼠離體十二指腸運(yùn)動(dòng)的影響

精密吸取“2.4.1”項(xiàng)下炒萊菔子水提液600 μL，緩慢加入腸管已平衡好的37 ℃恒溫浴槽中，記錄加藥前后腸管變化，按“2.4.3”項(xiàng)下方法依次加入800、1 000、1 200 μL 水提液，觀察離體十二指腸腸管收縮振幅和張力變化。

采用SPSS 17.0 軟件對(duì)不同萊菔子樣品給藥前后數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，Graphpad Prism 8.0.1 軟件將數(shù)據(jù)處理成柱狀圖的形式，結(jié)果見圖3。

圖3 炒萊菔子水提液對(duì)大鼠離體十二指腸張力和振幅的影響Fig.3 Effect of aqueous extract of stir?fried R.sativus on the tension and amplitude of rats ’isolated duodenum

由此可知，炒萊菔子水提取液在質(zhì)量濃度為0.03～0.06 mg／mL 時(shí)可增大腸收縮的振幅（P＜0.05，P＜0.01），在質(zhì)量濃度為0.04～0.06 mg／mL時(shí)可使腸運(yùn)動(dòng)振幅增大（P＜0.05，P＜0.01），表明炒萊菔子水提液具有促進(jìn)離體十二指腸運(yùn)動(dòng)的作用。

3 討論

中藥炮制直接影響臨床療效，明代《本草蒙筌》 中講到“凡藥制造，貴在適中，不及則功效難求，太過(guò)則氣味反失［17］”。由單因素考察結(jié)果表明，炒制溫度對(duì)萊菔子中蘿卜苷和RS01 含量影響較大，生萊菔子中蘿卜苷會(huì)發(fā)生酶解反應(yīng)［13］，萊菔子炒制太過(guò)檢測(cè)不到蘿卜苷［18］，但炒制溫度對(duì)RS01 的報(bào)道尚未發(fā)現(xiàn)。由此可見蘿卜苷和RS01 含量的高低是反映炒萊菔子質(zhì)量的重要專屬性指標(biāo)。因此采用專屬性的多指標(biāo)評(píng)價(jià)方法優(yōu)化萊菔子的炒制工藝，可更全面專屬的反映萊菔子炒制程度對(duì)其質(zhì)量的影響，確定萊菔子炒制中的“火候”要求。

傳統(tǒng)炮制理論認(rèn)為萊菔子炒制具有“生熟異治、生升熟降”的藥性變化特點(diǎn)，萊菔子炒制性轉(zhuǎn)沉降，具有消食除脹、降氣化痰之功效，在臨床中作為常用消食藥。但其消食除脹的物質(zhì)基礎(chǔ)和藥理作用機(jī)制并不明確，因此基于上述實(shí)驗(yàn)推測(cè)蘿卜苷和RS01 可能為萊菔子炒制“生熟異治”的物質(zhì)基礎(chǔ)。炒制得當(dāng)?shù)某慈R菔子可具有促進(jìn)大鼠離體十二指腸運(yùn)動(dòng)。

根據(jù)各指標(biāo)響應(yīng)值的回歸模型進(jìn)行分析，蘿卜苷＝－13.131 33＋0.109 51A＋2.101 44B－0.073 168C－7.188 75×10－3AB＋3.363 75×10－4AC＋0.010 850BC－2.206 37×10－4A2－0.138 13B2－5.843 00×10－4C2，F(xiàn)＝17.79，P＝0.000 5＜0.05，模型回歸顯著。模型決定系數(shù)R2＝0.958 1，Radj2 ＝0.904 2，CV ＝8.78%，表明方程擬合度好，而F失擬＝22.25，P＝0.005 9＜0.05，失擬性顯著，表明僅以蘿卜苷作為指標(biāo)，不適合進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)；芥子堿硫氰酸鹽＝－3.322 67 ＋0.038 021A＋0.191 79B－3.256 25×10－3C－4.950 00×10－4AB＋3.325 00×10－5AC－1.557 50×10－3BC－8.803 12×10－5A2－7.637 50×10－3B2＋4.012 50×10－5C2，F(xiàn)＝7.80，P＝0.006 5 ＜0.05，表明二次多元回歸方程的模型顯著，模型決定系數(shù)R2＝0.909 3，Radj2＝0.792 7，CV ＝2.00%，表明方 程的擬 合度較 好；RS01 ＝＋0.332 64＋2.917 50×10－3A－2.487 50×10－3B－4.062 50×10－4C，模型決定系數(shù)R2＝0.443 8，Radj2＝0.315 5，CV＝5.74%，表明方程的擬合度較差，F(xiàn)＝3.46，P＝0.048 2＞0.05，表明回歸模型不顯著，而且不是多元二次方程，為一次多元方程，沒有交叉項(xiàng)的影響存在。綜上所述，以評(píng)價(jià)指標(biāo)的綜合得分進(jìn)行萊菔子炮制工藝的響應(yīng)面優(yōu)化具有必要的意義。