• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    低頻電針“胃脘下俞”對2型糖尿病大鼠胰腺形態(tài)和分泌功能的調(diào)控作用研究*

    2021-06-11 01:51:22曹昺焱高譽(yù)珊張淑靜
    針灸臨床雜志 2021年5期
    關(guān)鍵詞:胃脘胰島電針

    曹昺焱,李 瑞,陳 卓,肖 京,高譽(yù)珊,張淑靜

    (1.中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院,北京 100091;2.北京中醫(yī)藥大學(xué),北京 100029)

    糖尿病是位列心血管疾病、腫瘤之后的第三大損害人類生命和健康的非傳染性疾病[1]。流行病學(xué)顯示我國2013年糖尿病患病率為10.4%,其中絕大多數(shù)為2型糖尿病[2]。2型糖尿病的致病因素有:①胰島B細(xì)胞形態(tài)、功能受損;②肝、脂肪和骨骼肌等胰島素的主要靶細(xì)胞胰島素抵抗[3]。針灸是WHO認(rèn)可的糖尿病可行治療手段之一[4],其相關(guān)記載見于《備急千金要方》曰:“消渴咽喉干,灸胃管下俞三穴各百壯”。有研究表明,電針“胃脘下俞”能顯著降低模型動物空腹血糖[5-6]、血清甘油三酯、總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇[7]等指標(biāo),并顯著改善胰島素抵抗指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)[8],其機(jī)理涉及上調(diào)骨骼肌胰島素信號通路,改善胰腺形態(tài)和功能[9-10]。胃脘下俞穴位于背俞功能帶上,其所在的T8脊神經(jīng)節(jié)位于支配胰腺傳入神經(jīng)節(jié)的中心,其具有調(diào)節(jié)胰腺形態(tài)和功能的物質(zhì)基礎(chǔ)。對胃脘下俞穴進(jìn)行刺激理應(yīng)能通過神經(jīng)傳導(dǎo)改善胰腺形態(tài)和分泌功能,達(dá)到降低血糖的作用。本研究以胰高血糖素樣肽1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)為切入點(diǎn),探討低頻電針對2型糖尿病大鼠胰腺形態(tài)和功能的干預(yù)作用,為電針胃脘下俞穴降糖作用提出解釋。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動物

    實(shí)驗(yàn)動物為體質(zhì)量(155±5)g的雄性清潔級SD大鼠[斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動物科技有限公司,動物許可證號:SCXK(京)2011-004]。動物于23°C恒溫、60%恒濕、晝夜循環(huán)光照和自由飲食水的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,依體質(zhì)量隨機(jī)選取13只大鼠為空白組,不造模。其余大鼠以高脂飲食飼養(yǎng)結(jié)合腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)制備2型糖尿病大鼠模型。成模動物根據(jù)空腹血糖隨機(jī)分為模型組、電針組,每組12只。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會審核批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號:BUCM-3-2013090401-3001)。

    1.2 主要試劑與儀器

    普通飼料及高脂飼料(北京華阜康生物科技股份有限公司);鏈脲佐菌素、檸檬酸和二水檸檬酸鈉(美國Sigma公司);羅氏血糖儀(GC12723032)、羅氏血糖試紙(LOT24626232)(德國Roche公司);Masson染色試劑(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司);KWD-808電針(常州英迪電子醫(yī)療器械有限公司);無菌針灸針(LOT031426,北京中研太和醫(yī)藥有限公司);Legend micr017r離心機(jī)(美國Thermo公司);BX53顯微鏡(奧林巴斯公司);GLP-1受體多克隆抗體(LOT:GR193702-1,美國Abcam公司)。

    1.3 模型制備

    造模動物經(jīng)7周配方為70%普通飼料、10%蔗糖、10%豬油和10%蛋黃粉的高脂飼料喂養(yǎng)后,禁食過夜。次日以2%的STZ溶液(溶液配置:0.1 mol/L檸檬酸緩沖液和0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液按1.3∶1比例混勻,按20 mg/mL的質(zhì)量體積比溶解STZ粉末;STZ溶液制備于冰上完成,30 min內(nèi)完成注射)按照35 mg/kg的比例腹腔注射。于STZ注射后72 h檢測大鼠隨機(jī)血糖(Random blood glucose,RBG);于STZ注射14 d后進(jìn)行口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(Oral glucose tolerance test,OGTT)。RBG>16.7 mmol/L且OGTT 2 h血糖>11.1 mmol/L者判定為成模,并隨機(jī)分為模型組、電針組。

    自評估成模之日起,模型組、電針組改以普通飼料喂養(yǎng)。

    1.4 干預(yù)方法

    1.4.1 空白組及模型組 不進(jìn)行電針干預(yù)。

    1.4.2 電針組 以0.16 mm×7 mm針灸針向內(nèi)斜刺雙側(cè)“胃脘下俞”穴(穴位定位于大鼠第8胸椎棘突下旁開5 mm[11]),針刺深度4 mm。雙側(cè)穴位均接通電針。電針正極連接針刺“胃脘下俞”穴的針灸針針柄,負(fù)極連接于粘貼在大鼠同側(cè)后足上的以0.9%氯化鈉溶液浸濕的棉球,形成回路。電針參數(shù):2 Hz連續(xù)波,電流強(qiáng)度2 mA。留針20 min,6次/周,共4周。

    1.5 取材和指標(biāo)檢測

    1.5.1 空腹血糖檢測 全部動物于末次治療結(jié)束后禁食過夜,次日早8:00尾尖取血測空腹血糖(Fasting blood glucose,F(xiàn)BG)。

    1.5.2 空腹胰島素檢測 測空腹血糖后,動物以2%戊巴比妥納溶液按照45 mg/kg比例腹腔注射麻醉,腹主動脈取血。血樣本于室溫靜置凝固后,于4 ℃環(huán)境下3 000 r/min離心15 min,分離血清。由北京華英生物技術(shù)研究所以酶免法檢測空腹胰島素含量。

    1.5.3 胰島B細(xì)胞分泌功能檢測 B細(xì)胞功能指數(shù)(HOMA-B)=20×空腹胰島素/(空腹血糖-3.5)。

    1.5.4 胰腺形態(tài)學(xué)檢測 以HE染色和Masson染色觀察:動物腹主動脈取血致死后,取相同部位胰腺組織于20倍體積的波恩氏液固定72 h;此后經(jīng)石蠟包埋,制備5 μm連續(xù)切片。HE染色步驟:切片以二甲苯脫蠟2次,每次15 min,以100%、100%、95%、90%、80%和70%濃度的下行梯度乙醇水溶液脫二甲苯,每濃度5 min。去離子水中浸泡5 min后,以蘇木素染色5 min,流水稍沖,以鹽酸乙醇分化10 s,自來水浸泡15 min,以70%、80%、90%、95%、100%和100%濃度的上行梯度乙醇水溶液脫水,每濃度5 min,以二甲苯脫酒精2次,每次10 min,中性樹脂封片。40倍光鏡觀察胰島結(jié)構(gòu)。Masson染色步驟:切片以HE染色相同方法脫蠟、下行梯度乙醇脫二甲苯至去離子水后,于去離子水中浸泡5 min,滴試劑A(復(fù)合染色液)一滴搖勻,使試劑均勻覆蓋切片組織,染色5 min,以去離子水沖掉試劑后,于去離子水中浸泡15 min;滴試劑C(磷鉬酸)一滴搖勻,使試劑均勻覆蓋切片組織,甩去試劑C,以去離子水稍沖;滴試劑D(苯胺藍(lán))一滴搖勻,使試劑均勻覆蓋組織切片,染色6 min,甩去試劑D,去離子水稍沖;滴試劑B(分化液)一滴,分化30 s。染色后的切片以去離子水浸泡3次,每次3 min后,以HE染色相同方法上行梯度乙醇脫水至二甲苯,以中性樹脂封片。以40倍光鏡觀察胰島纖維化(藍(lán)綠染色)。

    1.5.5 胰腺GLP-1受體蛋白表達(dá)檢測 以western blot法檢測:100 mg胰腺組織于1 mL含蛋白酶抑制劑的裂解液中冰上研磨勻漿。取勻漿液10 000 r/min離心15 min。取上清液配平,煮沸變性后,上樣,以120 V電泳60 min;以80 V電轉(zhuǎn)70 min,將蛋白濕轉(zhuǎn)至0.45 μm孔徑的PVDF膜上,5%牛奶-TBST溶液室溫孵育1 h,加入1∶2 000稀釋的一抗,室溫孵育1 h后于4 ℃環(huán)境下孵育過夜。此后經(jīng)洗膜,二抗孵育后,于暗室曝光。

    1.5.6 數(shù)據(jù)處理 以Image-Pro Plus6.0 軟件計(jì)算條帶IOD(Integrated option density,總灰度值)作為表達(dá)量。以β-actin為內(nèi)參,計(jì)算胰腺GLP-1受體相對表達(dá)。本檢測重復(fù)3次,以平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    2 結(jié)果

    2.1 低頻電針對2型糖尿病大鼠血糖的調(diào)控作用

    表1所示,治療前,模型組、電針組大鼠空腹血糖均顯著高于空白組(P<0.01);模型組、電針組大鼠FBG差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4周干預(yù)結(jié)束后,模型組、電針組大鼠FBG仍顯著高于空白組(P<0.01);其中電針組大鼠FBG較模型組顯著降低(P<0.05)。上述結(jié)果提示以2 Hz、2 mA的低頻連續(xù)波電針刺激“胃脘下俞”可顯著降低2型糖尿病大鼠血糖。

    表1 電針干預(yù)前后空腹血糖

    2.2 低頻電針對2型糖尿病大鼠胰島形態(tài)的調(diào)控作用

    低頻電針干預(yù)后2型糖尿病大鼠胰島,HE染色如圖1示:空白組大鼠胰島呈規(guī)則的橢圓形,胰島形態(tài)飽滿,胰島B細(xì)胞及細(xì)胞核形態(tài)、顏色正常,胰島與外周的外分泌腺泡細(xì)胞之間邊界清晰;模型組大鼠胰島面積明顯縮小,胰島外周的外分泌腺泡細(xì)胞變大,部分侵入胰島,胰島形態(tài)不規(guī)則,其中,胰島B細(xì)胞核數(shù)量減少,顏色變深;電針組大鼠胰島面積介于空白組和模型組之間,胰島外周的外分泌腺泡細(xì)胞變大,細(xì)胞間隙變小,胰島形態(tài)稍不規(guī)則,胰島中仍可見部分代償增大的B細(xì)胞核,胰島B細(xì)胞核數(shù)量較模型組稍增多。

    圖1 低頻電針干預(yù)后2型糖尿病大鼠胰島形態(tài)學(xué)觀察(HE染色,40×,標(biāo)尺示50 μm)

    低頻電針干預(yù)后2型糖尿病大鼠胰島Masson染色,如圖2示:空白組大鼠胰島形態(tài)呈橢圓形,胰島外周均勻包繞一層藍(lán)色的薄層纖維,胰島內(nèi)部偶爾可見少量分布的纖維;模型組大鼠胰島面積縮小,形態(tài)不規(guī)則,胰島B細(xì)胞及細(xì)胞核顏色變深,胰島內(nèi)可見大量深藍(lán)色的纖維侵入,貫穿整個胰島;電針組大鼠胰島面積縮小,形態(tài)不規(guī)則較模型組稍改善,胰島B細(xì)胞及細(xì)胞核顏色變深,較模型組略好轉(zhuǎn),胰島中仍可見藍(lán)色的纖維侵入,纖維顏色較模型組稍變淺。

    圖2 低頻電針干預(yù)后2型糖尿病大鼠胰島形態(tài)學(xué)觀察(Masson染色,40×,標(biāo)尺示50 μm)

    上述結(jié)果示,低頻連續(xù)波電針“胃脘下俞”可保護(hù)2型糖尿病大鼠胰腺形態(tài),在一定程度上改善胰島纖維化和外分泌腺泡細(xì)胞對胰島的侵蝕。

    2.3 低頻電針對2型糖尿病大鼠胰島素分泌功能的調(diào)控作用

    表2所示,4周干預(yù)后,空白組、模型組和電針組空腹胰島素含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組、電針組胰島素分泌指數(shù)顯著低于空白組(P<0.01);其中電針組胰島素分泌指數(shù)顯著優(yōu)于模型組(P<0.05)。上述結(jié)果示低頻連續(xù)波電針“胃脘下俞”對保護(hù)胰島素分泌功能有顯著作用。

    表2 各組大鼠胰島素分泌比較

    2.4 低頻電針對2型糖尿病大鼠胰腺GLP-1受體蛋白表達(dá)的調(diào)控作用

    圖3、表3所示,空白組胰腺GLP-1受體蛋白表達(dá)顯著高于模型組(P<0.01)。經(jīng)過4周電針干預(yù)后,電針組胰腺GLP-1受體含量顯著高于模型組(P<0.05),但仍顯著低于空白組(P<0.05)。

    圖3 各組大鼠胰腺GLP-1R蛋白表達(dá)

    表3 各組大鼠胰腺GLP-1R蛋白相對表達(dá)量

    3 討論

    3.1 穴位選取依據(jù)

    2型糖尿病屬西醫(yī)病名,該病隸屬中醫(yī)學(xué)“消渴”范疇。胃脘下俞穴是首個明確見于中醫(yī)古籍記載的可用于消渴病治療的穴位?!秱浼鼻Ы鹨健费裕骸跋恃屎砀?,灸胃管下俞三穴各百壯”。實(shí)驗(yàn)研究表明,該穴可顯著降低2型糖尿病大鼠空腹血糖[5-6]、血清甘油三酯、總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇[7]等指標(biāo)。其機(jī)理既涉及改善胰腺形態(tài)和功能[9-10];也涉及調(diào)控胰島素抵抗[8]。即胃脘下俞穴可同時對2型糖尿病的兩大致病機(jī)理,胰島形態(tài)、分泌功能受損和肝、脂肪、骨骼肌等外周靶細(xì)胞的胰島素抵抗起干預(yù)作用。

    胃脘下俞穴的上述作用可部分通過現(xiàn)代神經(jīng)解剖學(xué)得到解釋:該穴位于第8胸椎棘突下旁開1.5寸。其所在平面位于支配胰腺傳入神經(jīng)節(jié)(T5~11神經(jīng)節(jié))的中心。胃脘下俞穴下的第8胸神經(jīng)后支可將電針的痛刺激、電刺激信號經(jīng)脊神經(jīng)前根、脊神經(jīng)和白交通支傳入交感干,終止于交感干神經(jīng)節(jié)。由交感干神經(jīng)節(jié)將電針刺激信號和由其他節(jié)段上行或下行來的神經(jīng)信號整合,發(fā)出到達(dá)胰腺的神經(jīng)叢,調(diào)節(jié)交感神經(jīng)的抑制胰腺分泌的功能[12]。另外一部分電針的痛刺激、電刺激信號經(jīng)脊髓上行至大腦中樞,經(jīng)中樞整合后由迷走神經(jīng)背核發(fā)下行纖維經(jīng)胸、腹腔臟器旁節(jié)或器官內(nèi)節(jié)交換神經(jīng)元,將電針信號輸送至胰腺,調(diào)節(jié)副交感神經(jīng)的促進(jìn)胰腺分泌的功能[12]。按照上述理論,電針“胃脘下俞”對胰腺的形態(tài)和分泌功能理應(yīng)具有一定的調(diào)節(jié)作用。

    3.2 指標(biāo)選取依據(jù)

    GLP-1由主要分布在小腸末端及大腸的L細(xì)胞合成。L細(xì)胞在受到包括碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪在內(nèi)的多種營養(yǎng)物質(zhì)的刺激下分泌GLP-1。GLP-1的受體廣泛分布于下丘腦食欲中樞、胃腸道消化器官、分泌胰島素的胰島B細(xì)胞和接受胰島素的肝、脂肪、骨骼肌細(xì)胞的細(xì)胞膜上。GLP-1能對2型糖尿病產(chǎn)生多方面的正向調(diào)控作用:其可作用于下丘腦食欲中樞,使機(jī)體產(chǎn)生飽腹感,減輕饑餓感;作用于胃,能夠抑制胃酸分泌,減少胃蠕動,延緩胃排空,達(dá)到減少主動進(jìn)食的作用;可作用于胰島A細(xì)胞,使胰高血糖素分泌減少,并作用于胰島B細(xì)胞,促進(jìn)胰島B細(xì)胞增殖,減少胰島B細(xì)胞凋亡,保護(hù)胰島B細(xì)胞的形態(tài)和功能;還可促進(jìn)胰島素基因轉(zhuǎn)錄,上調(diào)胰島素分泌[13]。且在機(jī)體血糖含量過低時,GLP-1不會發(fā)揮進(jìn)一步的降糖作用。上述作用與針灸療法多系統(tǒng)、多靶點(diǎn)和雙向良性調(diào)節(jié)的作用方式類似。

    本研究因此認(rèn)為,針灸對2型糖尿病的干預(yù)作用一部分是通過調(diào)節(jié)GLP-1信號通路實(shí)現(xiàn),并提出假說,低頻電針“胃脘下俞”穴可上調(diào)胰腺GLP-1受體含量;借助上調(diào)GLP-1信號通路,達(dá)到保護(hù)胰腺形態(tài)和分泌功能的作用,進(jìn)而改善2型糖尿病大鼠胰腺結(jié)構(gòu)和分泌功能,實(shí)現(xiàn)降血糖的作用。為了驗(yàn)證假說,進(jìn)行如下研究:①取大鼠胰腺檢測GLP-1受體蛋白表達(dá),觀察電針對糖尿病模型動物胰腺中GLP-1通路的激活情況;②以HE染色觀察電針對胰島及胰島B細(xì)胞形態(tài)的修復(fù)情況;③以Masson染色觀察電針對胰島纖維化的改善情況;④以胰島素分泌指數(shù)評估電針對胰島素分泌能力的調(diào)控。結(jié)果初步證實(shí):電針可以促進(jìn)糖尿病模型動物下調(diào)的胰腺GLP-1通路活躍度,在一定程度上改善胰島和胰島B細(xì)胞的形態(tài)受損,逆轉(zhuǎn)胰島纖維化,并通過對胰島形態(tài)學(xué)的修復(fù),恢復(fù)模型動物分泌胰島素的能力,改善2型糖尿病癥狀。

    猜你喜歡
    胃脘胰島電針
    王生義治療胃脘痛的臨證經(jīng)驗(yàn)
    胃脘痛應(yīng)該怎么貼敷?
    胰島β細(xì)胞中鈉通道對胰島素分泌的作用
    傣醫(yī)林艷芳老師臨床診治胃脘痛經(jīng)驗(yàn)
    電針改善腦卒中患者膝過伸的效果
    家兔胰島分離純化方法的改進(jìn)
    低頻電針治療多囊卵巢綜合征30例
    電針“遠(yuǎn)心”穴治療心腎不交型失眠療效觀察
    非編碼RNA在胰島發(fā)育和胰島功能中的作用
    福爾電針概述
    河南科技(2014年8期)2014-02-27 14:07:53
    人妻少妇偷人精品九色| 热99久久久久精品小说推荐| 99国产综合亚洲精品| 欧美精品一区二区免费开放| 国产视频首页在线观看| 五月天丁香电影| 涩涩av久久男人的天堂| 大香蕉久久网| 两性夫妻黄色片 | 九九爱精品视频在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 大片电影免费在线观看免费| 高清欧美精品videossex| 亚洲av在线观看美女高潮| www.av在线官网国产| 国产精品成人在线| 久久热在线av| 少妇熟女欧美另类| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美精品一区二区大全| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲伊人色综图| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲色图综合在线观看| 韩国高清视频一区二区三区| a级片在线免费高清观看视频| 一级片免费观看大全| 久久99热6这里只有精品| 久久久国产欧美日韩av| 大陆偷拍与自拍| 午夜av观看不卡| 久久综合国产亚洲精品| 激情视频va一区二区三区| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产片内射在线| 欧美日韩av久久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 全区人妻精品视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 午夜免费鲁丝| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久久久久久久久成人| 亚洲美女黄色视频免费看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美成人午夜精品| 亚洲精品一二三| 男女边摸边吃奶| 欧美少妇被猛烈插入视频| 熟女人妻精品中文字幕| 考比视频在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久影院123| 国产精品国产三级国产专区5o| 热99久久久久精品小说推荐| av在线观看视频网站免费| av天堂久久9| 国产日韩欧美视频二区| 国产成人一区二区在线| 18在线观看网站| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产69精品久久久久777片| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久久亚洲精品成人影院| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 丰满少妇做爰视频| 成年av动漫网址| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲av男天堂| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 99久久中文字幕三级久久日本| 99九九在线精品视频| av在线app专区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 各种免费的搞黄视频| 欧美人与性动交α欧美软件 | 成人漫画全彩无遮挡| 国产乱来视频区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 男人操女人黄网站| 精品少妇内射三级| 高清在线视频一区二区三区| 香蕉丝袜av| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 久久国内精品自在自线图片| 日韩欧美一区视频在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 午夜免费鲁丝| 久久久久久人妻| 国产成人精品在线电影| 色吧在线观看| www日本在线高清视频| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 天堂8中文在线网| 国产成人欧美| 色94色欧美一区二区| 极品人妻少妇av视频| 亚洲综合精品二区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 美女国产视频在线观看| 女性被躁到高潮视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 街头女战士在线观看网站| 免费大片18禁| av线在线观看网站| 制服丝袜香蕉在线| 黑人猛操日本美女一级片| 97人妻天天添夜夜摸| kizo精华| 看非洲黑人一级黄片| 咕卡用的链子| 国产淫语在线视频| freevideosex欧美| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 婷婷色av中文字幕| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲精品乱久久久久久| 少妇人妻精品综合一区二区| 欧美+日韩+精品| 久久精品国产自在天天线| av国产久精品久网站免费入址| 丁香六月天网| 日韩av不卡免费在线播放| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产成人欧美| 全区人妻精品视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲成色77777| 亚洲精品乱久久久久久| 秋霞在线观看毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产成人91sexporn| 国产片特级美女逼逼视频| 18+在线观看网站| 日韩中字成人| 亚洲欧美清纯卡通| 国产成人午夜福利电影在线观看| 日本午夜av视频| 最后的刺客免费高清国语| 青春草视频在线免费观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 看免费av毛片| 新久久久久国产一级毛片| 尾随美女入室| 美女主播在线视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产一区二区三区综合在线观看 | 日韩一区二区视频免费看| 中文欧美无线码| 嫩草影院入口| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 一边摸一边做爽爽视频免费| 五月开心婷婷网| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美激情国产日韩精品一区| 中文字幕av电影在线播放| 男女午夜视频在线观看 | 国产亚洲一区二区精品| 欧美最新免费一区二区三区| √禁漫天堂资源中文www| 免费看av在线观看网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久影院123| 乱人伦中国视频| 母亲3免费完整高清在线观看 | 一本久久精品| av视频免费观看在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 五月玫瑰六月丁香| 国产亚洲精品久久久com| 久久久久久人妻| 捣出白浆h1v1| 日本av免费视频播放| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产成人a∨麻豆精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 精品福利永久在线观看| 欧美精品国产亚洲| 国产亚洲精品久久久com| 新久久久久国产一级毛片| videosex国产| 日韩伦理黄色片| 久久精品久久精品一区二区三区| 三级国产精品片| 另类亚洲欧美激情| 一级,二级,三级黄色视频| 免费观看无遮挡的男女| 精品人妻在线不人妻| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲国产色片| 看免费成人av毛片| 一级片'在线观看视频| 飞空精品影院首页| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产一区有黄有色的免费视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 我要看黄色一级片免费的| 午夜福利,免费看| 成人国产av品久久久| 国产成人免费无遮挡视频| 国产淫语在线视频| 草草在线视频免费看| 少妇 在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 国产精品欧美亚洲77777| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 在线看a的网站| 日韩成人av中文字幕在线观看| tube8黄色片| 国产精品一国产av| a级毛片黄视频| 黄色一级大片看看| www.熟女人妻精品国产 | 精品久久国产蜜桃| 亚洲伊人色综图| 只有这里有精品99| 亚洲四区av| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 一级片'在线观看视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲精品视频女| 美国免费a级毛片| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲成国产人片在线观看| 久久久精品区二区三区| 国产免费福利视频在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 两个人免费观看高清视频| 日本vs欧美在线观看视频| 在线观看www视频免费| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产av国产精品国产| 成人午夜精彩视频在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 性色av一级| 成年美女黄网站色视频大全免费| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲,欧美精品.| 亚洲av福利一区| 成年av动漫网址| 国产黄色免费在线视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产成人精品福利久久| 久久影院123| 国产日韩欧美在线精品| 视频区图区小说| 一级黄片播放器| 国产熟女欧美一区二区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 男女无遮挡免费网站观看| 国产麻豆69| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲一码二码三码区别大吗| 日韩欧美精品免费久久| 免费大片黄手机在线观看| 国产精品三级大全| 一级爰片在线观看| 极品人妻少妇av视频| 婷婷成人精品国产| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成年人午夜在线观看视频| 波野结衣二区三区在线| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久久欧美国产精品| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲精品中文字幕在线视频| 18在线观看网站| 在线 av 中文字幕| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲色图综合在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| www.熟女人妻精品国产 | 国产综合精华液| 亚洲国产看品久久| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 国产黄色免费在线视频| 国产精品一区www在线观看| 国产av码专区亚洲av| av在线播放精品| 国产精品国产av在线观看| 亚洲av福利一区| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲欧洲国产日韩| 飞空精品影院首页| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| av网站免费在线观看视频| 春色校园在线视频观看| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲国产精品999| 一级a做视频免费观看| 国产色爽女视频免费观看| 精品国产一区二区久久| 中文字幕亚洲精品专区| 国产黄频视频在线观看| 亚洲精品第二区| 男的添女的下面高潮视频| av不卡在线播放| 国产男女超爽视频在线观看| 午夜福利视频精品| 精品酒店卫生间| 亚洲精品久久午夜乱码| 人妻一区二区av| 国国产精品蜜臀av免费| 美女中出高潮动态图| 女人精品久久久久毛片| 十八禁高潮呻吟视频| 婷婷色综合大香蕉| 飞空精品影院首页| 色5月婷婷丁香| √禁漫天堂资源中文www| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲av福利一区| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美成人午夜免费资源| 人人妻人人澡人人看| 999精品在线视频| 国产黄频视频在线观看| 国产69精品久久久久777片| 亚洲av国产av综合av卡| a 毛片基地| 男女免费视频国产| 久久国内精品自在自线图片| 久久人妻熟女aⅴ| 精品久久久精品久久久| 国产有黄有色有爽视频| 久久国内精品自在自线图片| 久久人妻熟女aⅴ| 日韩免费高清中文字幕av| 波野结衣二区三区在线| 高清不卡的av网站| 九草在线视频观看| 久久97久久精品| 在线精品无人区一区二区三| 综合色丁香网| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲 欧美一区二区三区| 十八禁网站网址无遮挡| 国产av国产精品国产| 久久久久精品人妻al黑| 久久99热这里只频精品6学生| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 一级毛片电影观看| 久久久欧美国产精品| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲精品一二三| 成人影院久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | av国产精品久久久久影院| 国产成人一区二区在线| xxxhd国产人妻xxx| 在线天堂中文资源库| 国产av国产精品国产| 看免费成人av毛片| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲av电影在线进入| 嫩草影院入口| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 制服丝袜香蕉在线| 午夜激情av网站| 久久久亚洲精品成人影院| 51国产日韩欧美| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产黄频视频在线观看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产深夜福利视频在线观看| av免费在线看不卡| 亚洲国产看品久久| 伦理电影免费视频| 伦精品一区二区三区| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲国产日韩一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产免费一区二区三区四区乱码| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日本欧美国产在线视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 免费黄色在线免费观看| 街头女战士在线观看网站| 999精品在线视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美 日韩 精品 国产| 久久精品国产自在天天线| 自线自在国产av| 美女国产视频在线观看| 欧美97在线视频| 精品久久国产蜜桃| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 丝袜美足系列| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲精品第二区| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲精品456在线播放app| 69精品国产乱码久久久| 老熟女久久久| 在线观看三级黄色| 日韩在线高清观看一区二区三区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 成人免费观看视频高清| 又黄又粗又硬又大视频| 日韩av不卡免费在线播放| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 两性夫妻黄色片 | 久久99蜜桃精品久久| 国产精品蜜桃在线观看| 美女国产视频在线观看| 精品一品国产午夜福利视频| 9色porny在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 欧美人与性动交α欧美软件 | 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 精品亚洲成国产av| 黑人猛操日本美女一级片| 日韩视频在线欧美| 亚洲精品乱久久久久久| 国产成人精品一,二区| 国产男女内射视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 丝瓜视频免费看黄片| 各种免费的搞黄视频| 日韩一区二区视频免费看| 两个人看的免费小视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 成年人午夜在线观看视频| 国产黄色免费在线视频| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲 欧美一区二区三区| 色网站视频免费| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品偷伦视频观看了| 纯流量卡能插随身wifi吗| 我的女老师完整版在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲精品第二区| 婷婷色综合大香蕉| 高清视频免费观看一区二区| 免费观看性生交大片5| 欧美日韩综合久久久久久| 曰老女人黄片| 国产精品偷伦视频观看了| 熟妇人妻不卡中文字幕| 大片电影免费在线观看免费| 高清视频免费观看一区二区| 咕卡用的链子| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 人妻 亚洲 视频| 久久青草综合色| 人体艺术视频欧美日本| 水蜜桃什么品种好| 国产一区二区在线观看日韩| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 久久狼人影院| 日本av手机在线免费观看| 九九在线视频观看精品| 免费黄色在线免费观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 黑丝袜美女国产一区| 丝袜脚勾引网站| 成人黄色视频免费在线看| 乱码一卡2卡4卡精品| 一级毛片电影观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲天堂av无毛| 国产乱人偷精品视频| 一边亲一边摸免费视频| 久久久久精品人妻al黑| 热99国产精品久久久久久7| 国产黄频视频在线观看| videos熟女内射| 欧美精品av麻豆av| 久久久久久久久久人人人人人人| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲美女视频黄频| 考比视频在线观看| 精品少妇内射三级| 亚洲精品自拍成人| 久久久久久人妻| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 大香蕉97超碰在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 日本wwww免费看| 精品一品国产午夜福利视频| 黄色毛片三级朝国网站| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久人人爽人人爽人人片va| 看免费成人av毛片| a级毛片黄视频| 日韩中字成人| 另类精品久久| 少妇的丰满在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 在线观看免费高清a一片| 久久久国产精品麻豆| 精品国产国语对白av| 黑丝袜美女国产一区| 国产男女内射视频| 国产精品成人在线| 中文字幕制服av| 一级毛片 在线播放| 91成人精品电影| 中国三级夫妇交换| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产男人的电影天堂91| 青春草视频在线免费观看| 一级毛片电影观看| 亚洲精品一二三| 精品久久国产蜜桃| 人妻一区二区av| 久久 成人 亚洲| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 99热全是精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产xxxxx性猛交| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲欧洲日产国产| 熟女av电影| 91在线精品国自产拍蜜月| 黄色一级大片看看| 久久韩国三级中文字幕| videosex国产| 国产在视频线精品| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲五月色婷婷综合| 制服诱惑二区| 国产深夜福利视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| av视频免费观看在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| av有码第一页| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲精品第二区| 午夜av观看不卡| 欧美成人午夜免费资源| 一本色道久久久久久精品综合| 久久婷婷青草| 9色porny在线观看| 女人久久www免费人成看片| 日韩欧美精品免费久久| 天天操日日干夜夜撸| 国产亚洲一区二区精品| 人人妻人人澡人人看| 一级爰片在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久久久视频综合| av有码第一页| 日韩一区二区三区影片| 精品午夜福利在线看| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 欧美成人午夜精品| 亚洲av福利一区| 亚洲经典国产精华液单| 国产乱来视频区| 国产男人的电影天堂91| 90打野战视频偷拍视频| 欧美丝袜亚洲另类| 有码 亚洲区| 色网站视频免费| 丝袜在线中文字幕| 男女高潮啪啪啪动态图| 免费观看av网站的网址| 男人舔女人的私密视频| 久久热在线av| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 视频中文字幕在线观看| 22中文网久久字幕| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 国产成人一区二区在线| 9热在线视频观看99| www.色视频.com| 国产在线视频一区二区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 黑人高潮一二区| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲av综合色区一区| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产成人精品久久久久久|