黑芝麻不同炮制品的化學成分變化及降血脂藥理作用對比研究

張麗麗，蘇松柏，朱迪，文興寬

(1.貴州醫(yī)科大學神奇民族醫(yī)藥學院，貴州 貴陽 550001；2.貴州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550001)

黑芝麻為脂麻科植物脂麻(SesamumindicumL)的干燥成熟種子[1],又名胡麻、烏麻、脂麻,為一年生草本，是人類長期食用的作物之一[2-3]。黑芝麻在全球都有大面積種植，我國主產(chǎn)于河南、湖北、安徽、江西，其他各省各地零散種植[4]。我國是黑芝麻的生產(chǎn)大國，加之色黑、顆粒飽滿、口感好及含油量高等特點，深受國內(nèi)外市場的喜愛。黑芝麻含有許多營養(yǎng)成分，具有很高的營養(yǎng)價值和醫(yī)用價值，于2002年2月28日被衛(wèi)生部列為藥食兩用的名單。黑芝麻炮制方法眾多，炮制方法不同，功效用法也不同。據(jù)史書記載，“黑芝麻消痰生用，逐風酒蒸，入補蒸曬，炒食不生風病”,因而有九蒸九曬、酒蒸法、清炒法和未加工曬制的生品四種炮制方法[5]?！吨袊幍洹?一部)[1]和其他地方收載的炮制規(guī)范中收錄了清炒法。黑芝麻藥效成分因不同炮制方法而引起當中的藥效成分增加或減少，這些化學成分的改變必然會導致藥效活性的改變[6-8]。為提高黑芝麻的應用水平，增加黑芝麻的醫(yī)用價值和商用價值，國內(nèi)外科研工作者和生產(chǎn)者對黑芝麻的加工技術及制品、成分研究分析都進行了相關的研究[9-12]。本研究主要對四種炮制制品的主要化學成分及降血脂藥理作用對比研究，為了更全面的應用和開發(fā)黑芝麻，提高黑芝麻的藥用價值，對四種不同炮制制品的化學成分研究及藥效學對比研究具有重大意義。

1 材料與設備

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

SD大鼠70只(雌雄各半、SPF級)，體質(zhì)量180～200 g，為長沙市天勤生物技術有限公司提供，許可編號：SCXK(湘)2014-0011。

1.1.2 飼料及飼養(yǎng)條件

飼料為維持飼料、高脂飼料，高脂飼料配方為豬油18%、白糖20%、蛋黃3%、維持料59%，等級：A級，墊料為無菌墊料，均由長沙市天勤生物技術有限公司提供。

1.1.3 試劑與藥品

黑芝麻(20150801，貴陽濟仁堂中藥飲片廠)，芝麻素(110836-201706中國食品藥品檢定研究院)；芝麻林素(MUST-17030605，中國科學院成都生物研究所)；石油醚(20120503，重慶川江化學試劑廠)為分析純；氫氧化鈉(20151230)、鹽酸(20160315)、磷酸氫二鈉(20160512)、檸檬酸(20170123)均購自重慶江川化工有限公司，試劑均為分析純。阿托伐他丁鈣片(170910，北京嘉林藥業(yè)股份有限公司)；紹興黃酒(湖州老恒和釀造有限公司)；甘油三酯試劑盒(AUZ5480)、高密度脂蛋白膽固醇試劑盒(AUZ6194)、低密度脂蛋白膽固醇試劑盒(AUZ6224)、總膽固醇試劑盒(AUZ4792)均購自貝克曼庫爾特實驗系統(tǒng)(蘇州)有限公司。

1.2 儀器設備

電子分析天平(AEL-16，梅特勒上海有限公司)，超聲波清洗器(CH-300，北京創(chuàng)新超聲電子研究所)，高效液相色譜儀(ANGLIENT1100)，色譜柱：Hypersil BDS C18，全自動生化分析儀(AU680，Beckman Coulter K.K)。

2 實驗方法

2.1 四種黑芝麻炮制品的制備

生品黑芝麻取出1 kg后在陽光下曬9 h后作為樣品1干品備用；取1 kg黑芝麻依據(jù)《中國藥典》(一部)[1]標準，將黑芝麻炒制有爆裂聲后放冷作為樣品2炒品備用；取1 kg黑芝麻用黃酒蒸6 h后，曬干后作為樣品3酒蒸曬品備用；取2 kg黑芝麻用水蒸6 h后，取出曬干，再繼續(xù)用水蒸6 h后，曬干，如此反復9次后作為樣品4九蒸九曬品備用(其中每蒸曬1次稱取100 g備用)。

2.2 脂肪油測定方法

取“2.1”項下的樣品約5 g，粉碎后加入60 mL石油醚靜置30 min，超聲提取45 min，濾過，分別收集濾渣和濾液。濾渣在45 ℃的條件下烘干，稱重，計算收率。濾液在60～90 ℃條件下進行揮發(fā)，量取脂肪油體積。

2.3 黑色素測定方法

稱取黑芝麻樣品各約2 g，各加80 mL 5%NaOH溶液，置于60 ℃的水浴中恒溫加熱2 h，濾過，濾液加適量鹽酸調(diào)節(jié)pH值1～4，使黑色素絮凝，靜置12 h使其沉降，瀝去上層棕色清液，沉淀用少量水洗滌，蒸干得黑色素粗品，量取適量的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液(稱取NaH2PO441.84 g溶于584.5 mL蒸餾水中配成0.2 mol/L溶液；稱取檸檬酸0.36 g溶于16.5 mL蒸餾水中配成0.1 mol/L溶液。將兩溶液混合得到pH 8.0的緩沖液)使黑色素粗品充分溶解，再濾過，得濾液，用緩沖液定容至50 mL，搖勻，采用紫外分光光度儀測定。

2.4 芝麻素和芝麻林素含量測定方法

2.4.1 HPLC色譜條件

流動相：甲醇-0.1%醋酸水溶液(68∶32)；檢測波長：290 nm；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃。

2.4.2 樣品的制備

精密稱取各黑芝麻炮制品2 g，加20 mL石油醚浸泡30 min，超聲提取45 min，濾過，精密量取10 mL濾液置于蒸發(fā)皿中水浴上揮干，用正丁醇溶解，并稀釋，定容至10 mL容量瓶，過0.45 μm濾膜備用。

2.4.3 對照品的制備

精密稱取對照品芝麻素適量和對照品芝麻林素適量，加正丁醇溶解，制成每1 mL含芝麻素0.406 mg和芝麻林素0.214 mg的溶液，備用。

2.5 降血脂藥理作用研究方法

2.5.1 動物分組及處理

70只SD大鼠,雌雄各半，隨機分為干品組、清炒品組、酒蒸曬組、九蒸九曬組、陽性組、高脂模型組、空白組,共7組，每組10只。造模期除Nor組均投高脂飼料造模，各組均于造模成功后按表1給藥。

表1 實驗分組及編號

(1)適應期：將雌雄隨機分籠，每籠5只，在新環(huán)境下正常投喂維持飼料1周，觀察記錄大鼠情況。

(2)造模期：適應期結束后，選取平均體質(zhì)量(200±10)g的大鼠隨機按表1分成7組，除Nor組投維持飼料外，均投高脂飼料造模。周期為3周,期間每3 d稱1次體質(zhì)量，每天稱墊料重量，正常飲食飲水，3周后，禁食不禁水12 h，每組取一只剪尾采血，測血清生化TG、CHOL、HDL和LDL指標；(3)造模成功后，按表1進行分組投藥，早晚各1次，AC組每天進行灌胃投藥，期間每3 d測1次體質(zhì)量，每天稱墊料重量，正常飲食飲水，為期3周，3周結束后禁食不禁水12 h，每組進行剪尾采血，用斷頭法將大鼠處死后解剖取出肝臟并稱肝重。

2.5.2 統(tǒng)計學處理

應用SPSS24.0統(tǒng)計軟件建立實驗數(shù)據(jù)庫進行分析，對所有數(shù)據(jù)進行正態(tài)分布檢驗，結果呈正態(tài)分布，以均數(shù)±標準差表示，組間差異進行單因素檢驗分析，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 脂肪油的測定結果

表2 脂肪油不同炮制品的含量變化

結果表明，黑芝麻在不同條件下炮制后，脂肪油的含量變化較大。濾渣收率大，所得到的脂肪油越少。

3.2 黑色素測定結果

表3 黑色素的吸光度測定(470 nm)

由表3可以得出：在波長470 nm處黑色素的含量隨著炮制方法的不同變化明顯。

3.3 芝麻素與芝麻林素的含量測定結果

3.3.1 方法學考察

3.3.1.1 線性關系考察

取對照品溶液，分別稀釋到不同的濃度，按“2.4.1”項下方法測定。以峰面積為縱坐標、樣品濃度為橫坐標進行回歸處理，得芝麻素回歸方程：Y=8 316.7X-0.060 9，相關系數(shù)r=0.999 9；得芝麻林素回歸方程：Y=9 686.7X+9.384 7，相關系數(shù)r=0.999 9，芝麻素在0.243 6～0.568 4 μg范圍內(nèi)有良好的線性關系，芝麻林素在0.128～0.300 μg范圍內(nèi)有良好的線性關系，結果見圖1。

3.3.1.2 精密度

取同一批干品約2 g，按“2.4.2”項下制備溶液，按“2.4.1”項下測定。進樣量為10 μL，連續(xù)進樣5次。芝麻素的RSD為0.124%，芝麻林素的RSD為0.121%。結果表明，該儀器精密度良好。

3.3.1.3 穩(wěn)定性

取同一批干品約2 g，按“2.4.2”項下制備溶液，按“2.4.1”項下測定。間隔一定時間，分別為0﹑2﹑4﹑6﹑8、10、12 h進行測定，進樣量為10 μL。測得芝麻素RSD為0.094%，芝麻林素RSD為0.15%。結果表明，樣品溶液在12 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

3.3.1.4 重復性

取同一批干品6份，按“2.4.2”項下制備溶液，按“2.4.1”項下測定，進樣量為10 μL。測得芝麻素RSD為1.01%，芝麻林素RSD為0.8%，結果表明重復性良好。

3.3.1.5 加樣回收試驗

取同一批干品的樣品6份，精密稱取1 g，分加入對照品(芝麻素為2 mg，芝麻林素為1 mg)，按“2.4.2”項下制備溶液，過0.45 μm濾膜，進樣量10 μL，按“2.4.1”項下測定，結果表明準確度良好。

3.3.1.6 芝麻素與芝麻林素的含量測定

稱取黑芝麻干品、清炒品、酒蒸曬品、九蒸九制品等12個樣品各約2 g，按“2.4.2”項下制備溶液，過0.45 μm濾膜，取“2.4.3”項下的對照品溶液，按“2.4.1”項下測定，進樣量為10 μL，結果見表4。表4可見,黑芝麻炮制方法和炮制次數(shù)的不同，其中芝麻素與芝麻林素的含量有著不同的變化。其中芝麻素在黑芝麻干品的含量最高，清炒品次之，九蒸九曬品隨著蒸制次數(shù)的增加而逐漸減少。芝麻林素的含量變化有所不同，但總體呈下降趨勢。

注: A.對照品(1.芝麻素，2.芝麻林素)；B.干品；C.清炒制品；D:酒蒸曬品；E：九蒸九曬品。圖1 高效液相色譜圖

表4 芝麻素與芝麻林素含量測定結果

3.4 降血脂藥理作用結果

3.4.1 一般結果

在適應期、高脂模型期，雌雄大鼠飲食飲水情況、體質(zhì)量及一般活動未見異常，與空白組相比，投高脂飼料的大鼠普見排便減少，飲水增加，體質(zhì)量上升快(見表5)，毛色偏暗發(fā)黃。高脂造模期結束轉(zhuǎn)為投藥期，通過投藥期數(shù)據(jù)顯示，四種炮制品黑芝麻同高脂模型組、空白組相比，有明顯改善大鼠排便情況(見表6)，解剖大鼠肝臟組織，稱其重量與空白組、高脂模型組相比，四種黑芝麻炮制品的肝重變化情況(見表7)。

表5結果表明，投藥后，干品組、九蒸九曬組與陽性組體質(zhì)量影響最明顯，酒蒸曬組與清炒品組幾乎沒有明顯體質(zhì)量變化。

表5 大鼠在適應期、高脂模型期、投藥期的體質(zhì)量變化情況

表6 大鼠在適應期、高脂模型期、投藥期的排便重量情況表

表6結果表明，高脂模型組大鼠排便量較少，大鼠在投藥期間，四種黑芝麻炮制品中清炒品組和九蒸九曬法炮制品組的大鼠排便量較多。

表7 投藥期結束后高脂模型大鼠肝臟量

表7中表明黑芝麻四種炮制品對雄性大鼠肝臟影響無差異，九蒸九曬品對雌性大鼠降低肝重的作用較其他三種炮制品更明顯，高脂模型組同各小組有顯著性差異(P<0.05)。

3.4.2 大鼠血檢結果

表8結果表明，血清生化指標TG:干品組和九蒸九曬品組與高脂模型組比較,有顯著性差異(P<0.05)；Hyp值略高于各小組TG值，表明高脂模型組造模是成功的；血漿CHOL生化指標，與高脂模型組和空白組進行統(tǒng)計學分析，除九蒸九曬組外，均有顯著性差異(P<0.05)；血清生化指標HDL都無顯著性差異；各小組血清的LDL生化指標與Hyp進行統(tǒng)計學分析，除STST組外均有顯著性差異(P<0.05),與空白組相比，清炒品組有顯著性差異(P<0.05)。

表8 四種炮制品黑芝麻對大鼠血液生化指標的影響

4 結論與討論

實驗結果表明黑芝麻不同炮制品的化學成分隨不同的炮制方法呈現(xiàn)一定的變化規(guī)律，黑芝麻不同炮制品中九蒸九曬黑芝麻炮制品對血漿TG的降低作用最強，清炒黑芝麻炮制品對血漿LDL的降低作用最強。

實驗結果表明采用石油醚提取黑芝麻中的脂肪油，提取率為38.96%，與文獻中報道的40%基本一致。黑芝麻中黑色素含量變化趨勢為隨著蒸制次數(shù)的增加而增加，表明不同炮制方法對黑芝麻中的黑色素含量變化有一定的變化趨勢，或增加或減少。黑芝麻具有烏黑頭發(fā)、補腎的作用，黑色素含量增加是否與補腎及烏黑頭發(fā)的作用增強相關還需進一步研究。因炮制方法的不同，芝麻素與芝麻林素含量也發(fā)生變化，表明在炮制過程中有成分含量上的變化或轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌煞帧?/p>

古今中外對黑芝麻研究的文章較多[13-16]。不少學者研究發(fā)現(xiàn)黑芝麻有多種功效，降血脂的作用較明顯。本文對不同炮制品的降血脂藥理作用進行了對比分析研究，通過實驗發(fā)現(xiàn)九蒸九曬炮制品對血漿TG的降低作用最明顯；清炒炮制品對血漿LDL的降低作用最明顯；清炒炮制品和酒蒸曬炮制品對血漿CHOL的降低作用優(yōu)于九蒸九曬炮制品，清炒炮制品和干品對血漿LDL的降低作用優(yōu)于九蒸九曬品；清炒炮制品和九蒸九曬法炮制的黑芝麻潤腸通便效果明顯優(yōu)于其它炮制品。九蒸九曬炮制品降低雌性大鼠的肝重最明顯。