不同溫度下冷凝集素試驗(yàn)對(duì)ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗(yàn)結(jié)果的影響

劉力銘

（平頂山市第一人民醫(yī)院，河南 平頂山 467000）

輸血是臨床上一項(xiàng)重要的搶救和治療措施，當(dāng)血紅蛋白＜60 g·L-1時(shí)，機(jī)體代償機(jī)能難以維持正常血壓水平，會(huì)引發(fā)機(jī)體活動(dòng)障礙，此時(shí)需輸血治療[1-2]。為保證輸血有效性、安全性，臨床常通過ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗(yàn)進(jìn)行配血[3]。冷凝集素屬自身抗體，正常生理情況下，不會(huì)促進(jìn)紅細(xì)胞凝集，但研究證實(shí)，在低溫條件下，紅細(xì)胞由于自身特性會(huì)出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，尤其在4℃時(shí)紅細(xì)胞明顯凝集[4]。高滴度冷凝集素會(huì)對(duì)交叉配血試驗(yàn)結(jié)果造成影響，從而降低輸血治療效果，因此，在進(jìn)行交叉配血時(shí)，需盡可能避免冷凝集素影響，提高配血成功率，保證用血安全[5]。本研究選取我院2019年2月至2020年4月間收治的需緊急輸血患者248例，探討不同溫度下冷凝集素試驗(yàn)對(duì)ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗(yàn)結(jié)果的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院收治的需緊急輸血患者248例（2019年2月～2020年4月）作為研究對(duì)象，其中女123例，男125例；年齡18～76歲，平均年齡56.68±8.14歲；體質(zhì)量45.6～77.8 kg，平均體質(zhì)量61.15±7.67 kg。

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者及其家屬知情、自愿并簽署同意書；血紅蛋白＜60 g·L-1；年齡≥18歲；無輸血史、藥物過敏史、遺傳病史。

排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有免疫系統(tǒng)疾病、肝功能損傷及艾滋病、結(jié)核病、乙肝等傳染性疾??；血型為Rh（-）。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑

血型血清學(xué)離心機(jī)（生產(chǎn)廠家：長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司，型號(hào)：TD-3A），全自動(dòng)血庫系統(tǒng)（生產(chǎn)廠家：煙臺(tái)艾德康生物科技有限公司，型號(hào)：AIS-EN70），恒溫水浴箱（生產(chǎn)廠家：常州市國旺儀器制造有限公司，型號(hào)：HHW-420.600.），顯微鏡（生產(chǎn)廠家：日本奧林巴斯公司，型號(hào)：BX53）。

凝聚胺試劑購于合肥天一生物技術(shù)研究所，抗A抗B血型定型試劑購于上海信帆生物科技有限公司，RhD血型定型試劑購于蘇州蘇大賽爾免疫生物技術(shù)有限公司。所有儀器與試劑均進(jìn)行嚴(yán)格質(zhì)控，按照使用說明書進(jìn)行操作。

1.2.2 ABO血型正反定型

抽取患者靜脈血2 mL，于37℃離心后取血清加入1 mL抗凝血?jiǎng)?，使用生理鹽水洗滌血液樣本內(nèi)的紅細(xì)胞3次，將經(jīng)過洗滌的溶液制成濃度為2%的紅細(xì)胞懸液。取10支試管，分別加入生理鹽水0.2 mL，接著向第1支試管加入0.2 mL血清，直至對(duì)半稀釋到第9支，最后與第10支進(jìn)行比較。向10支試管各加入0.2 mL紅細(xì)胞懸液，混合均勻后分別放置在20 ℃、37 ℃溫度下，靜置12 h后觀察結(jié)果。

1.2.3 電子交叉配血

血型鑒定：吸取內(nèi)含EDTA-K2抗凝劑的患者血液樣本2 mL，以3000 r·min-1離心5min后置于全自動(dòng)血庫系統(tǒng)進(jìn)行血型檢測。

電子交叉配血：首先檢測血液樣本中的不規(guī)則抗體，若結(jié)果呈陰性，根據(jù)血型鑒定結(jié)果，對(duì)血型匹配一致性進(jìn)行判斷，若結(jié)果呈陽性，需確定抗體性質(zhì)，后判斷血型匹配一致性。分別在20 ℃、37 ℃進(jìn)行交叉配血，查看凝集反應(yīng)是否出現(xiàn)并記錄結(jié)果。

1.2.4 血清學(xué)交叉配血

以試管法復(fù)查RhD血型與ABO血型，再采用1.2.3中血型鑒定方法與血液標(biāo)本進(jìn)行主側(cè)、次側(cè)交叉配血。

1.2.5 冷凝集素試驗(yàn)

向血清標(biāo)本中加入O型健康人群紅細(xì)胞或同型血，分別放置在4 ℃、31 ℃、37 ℃溫度下，記錄紅細(xì)胞凝集情況。

1.2.6 交叉配血試驗(yàn)

于37℃溫度下，使用鹽水法、凝聚胺配血法處理患者血液樣本，主側(cè)、次側(cè)均出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，代表配血不符，以24 ℃生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，制成濃度為2%的紅細(xì)胞懸液，再次進(jìn)行交叉配血，觀察結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS22.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例或率（n（%））表示，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)交叉配血與電子交叉配血結(jié)果比較

248例需緊急輸血患者血液樣本，血清學(xué)交叉配血、電子交叉配血主側(cè)相合率無明顯差異（P＞0.05），次側(cè)相合率差異顯著（P＜0.05），見表1。

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2.2 不同溫度下ABO血型鑒定結(jié)果

ABO血型，在不同溫度下的鑒定結(jié)果（表2）。

表2 不同溫度下ABO血型鑒定結(jié)果比較

2.3 不同溫度下電子交叉配血結(jié)果

20℃時(shí)電子交叉配血出現(xiàn)凝集例數(shù)多于30 ℃（P＜0.05），見表3。

表3 不同溫度下電子交叉配血結(jié)果（n（%），n=248）

2.4 冷凝集素試驗(yàn)結(jié)果

向血清標(biāo)本中加入O型健康人群紅細(xì)胞或同型血，分別放置在4℃、31℃、37℃溫度下，4℃溫度下出現(xiàn)明顯紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，31℃溫度下可見紅細(xì)胞凝集，而溫度升至37℃時(shí)，紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象消失。

2.5 交叉配血試驗(yàn)結(jié)果

于37℃溫度下，以鹽水法、凝聚胺配血法進(jìn)行交叉配血，主側(cè)、次側(cè)均出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，后用經(jīng)過處理的血清采取相同方法進(jìn)行交叉配血，主側(cè)、次側(cè)未出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，將血液樣本放置在載玻片，利用顯微鏡觀察到紅細(xì)胞彌漫、散在排列，交叉配血成功。

3 討論

輸血為臨床重要治療手段，為避免發(fā)生溶血、免疫排斥等不良反應(yīng)，輸血前需對(duì)供血者、受血者的血型進(jìn)行配對(duì)[6-7]?，F(xiàn)階段，在臨床配血時(shí)通常經(jīng)ABO血型正反定型匹配后方允許輸血，保證輸血安全性[8]。但正反定型結(jié)果受到眾多因素影響，冷凝集素是其中之一[9]。隨著電子技術(shù)進(jìn)步，電子交叉配血試驗(yàn)在臨床逐漸得到應(yīng)用，其具有便捷、高效、準(zhǔn)確等優(yōu)勢，能降低試劑庫存量，減少工作量，由計(jì)算機(jī)系統(tǒng)選擇與受血者相匹配的血型，還能減少人工操作失誤[10-11]。本研究對(duì)248例需緊急輸血患者血液樣本進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，冷凝集素引發(fā)的交叉配合不合，主要為次側(cè)不合，可在加溫后消除。溫度是影響冷凝集素活性的關(guān)鍵，有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，溫度＜31℃時(shí)，冷凝集素作用于紅細(xì)胞抗原，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，隨著溫度上升，冷凝集素活力消失[12]。本研究還發(fā)現(xiàn)，ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗(yàn)結(jié)果受到溫度影響。要避免冷凝集素的影響，在ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗(yàn)時(shí)需注意以下幾點(diǎn)：（1）春冬季節(jié)溫度較低，易出現(xiàn)高效價(jià)冷凝集素，可將血液樣本放置在37℃恒溫水浴箱中，后再行檢測，若提高溫度后，血型正反定型仍不相符或仍發(fā)生凝集反應(yīng)，需排除其他因素引發(fā)的凝集反應(yīng)；（2）ABO血型正反定型不符時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步選擇合適定型方法，如鹽水法、凝聚胺配血法；（3）對(duì)于需輸血治療的患者，應(yīng)首先確定冷凝集素的效價(jià)，保證輸入同型血液，同時(shí)注意輸血速度緩慢、血液溫度適宜，以保證輸血有效性、安全性[13-15]。

綜上所述，在低溫條件下，冷凝集素可促進(jìn)紅細(xì)胞凝集，影響輸血科ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗(yàn)結(jié)果，為保證輸血安全，應(yīng)選擇科學(xué)合理鑒別方式，避免漏檢、誤檢。