卵巢癌患者癌組織中nm23-H1蛋白和N-cad的表達及意義#

戎鳳敏 秦海霞 張景航 張嬌

（新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院婦科，河南 新鄉(xiāng) 453100）

卵巢癌是臨床常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第3位，死亡率位居婦科惡性腫瘤第1位[1]。由于卵巢癌發(fā)病隱匿，目前缺乏有效的普查和早期診斷方法，約有70%以上的患者就診時發(fā)現(xiàn)腫瘤已處于晚期，預后極差[2]。惡性腫瘤的轉移和侵襲與患者的預后密切相關，是患者死亡的直接原因，而nm23-H1基因重要的腫瘤轉移抑制基因[3]，通過橡黃素上調肝癌細胞的nm23-H1可明顯抑制肝癌侵襲轉移能力[4]。研究發(fā)現(xiàn)，神經型鈣粘附蛋白（N-cadherin，Ncad）可通過上皮細胞-間質轉化（Epithelial- mesenchymal transition，EMT）途徑參與腫瘤的發(fā)生與轉移，對妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有一定影響[5]?；诖耍疚膶?18例卵巢癌患者癌組織中nm23-H1蛋白及N-cad表達及其臨床意義進行探究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月至2013年12月間我院收治的118例卵巢癌患者的臨床資料以及保存的癌組織和癌旁組織標本進行研究。所有患者年齡35～65歲、平均年齡51.61±10.65歲，≤60歲者44例、＞60歲者74例，絕經前者43例、絕經后者75例，病理類型：漿液型腺癌71例、黏液型腺癌39例、其他8例，病理分級：Ⅰ級49例、Ⅱ級40例、Ⅲ級29例，F(xiàn)IGO分期：Ⅰ～Ⅱ期47例、Ⅲ～Ⅳ71例。

納入標準：所有患者均經病理檢查確診為卵巢癌；年齡＞18歲；經我院倫理委員會審核通過。

排除標準：合并其他惡性腫瘤者；其他卵巢疾病者。所有患者術前均未接受放化療、激素治療等新輔助抗腫瘤治療，早期患者采用手術治療為主，晚期患者均接受新輔助化療及姑息性減瘤術。

1.2 方法

所有卵巢癌組織、癌旁組織標本均采用免疫組化SP法[6]：所有病例標本均經石蠟包埋，切片機5 μm連續(xù)切片，溫箱烤干，切片經常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水干燥，3%過氧化氫去內源性過氧化物酶，pH 6.0枸櫞酸緩沖液抗原修復，血清工作液封閉10 min后加兔抗人nm23-H1單克隆抗體（北京博奧森生物技術有限公司生產），4℃冰箱孵育過夜后加入生物素標記二抗，二氨基聯(lián)苯（DAB）顯色，蘇木精復染，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、干燥后封片；利用光學顯微鏡 觀察腫瘤細胞的染色情況。若細胞質或者是細胞核內部出現(xiàn)棕黃色的顆粒，則將nm23-H1和Ncad標記為陽性，用符號“+”代表，若沒有觀察到棕黃色顆粒，則將其標記為陰性，用符號“－”代表[7]。

陽性染色為胞漿（少數(shù)為胞漿和胞核）有細小棕色顆粒沉著，陰性切片中午棕色物質出現(xiàn)；陽性程度[8]按陽性細胞所占比例分為4級：0（-）、1%～30%（+）、31%～60%（++）、＞60%（+++）；無病生存期指首次化療日期開始至出現(xiàn)局部復發(fā)和（或）遠處轉移的時間[9]。

1.3 觀察指標

根據(jù)卵巢癌病理分為Ⅰ級（n=49）、Ⅱ級（n=40）、Ⅲ級（n=29），全部隨訪者98例根據(jù)淋巴結轉移分為轉移組（n=35）和無轉移組（n=63），分析nm23-H1蛋白、N-cad表達陽性率與卵巢癌病理分級、淋巴結轉移間的關系；以陽性++級及以上為高表達（nm23-H1高表達組，n=69；Ncad高表達組，n=34）、以陽性++級為低表達（nm23-H1低表達組，n=49；N-cad低表達組，n=84），比較臨床病理特征之間的nm23-H1、N-cad表達差異和兩組間的生存率。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±SD）表示，行t檢驗或單因素方差分析；計數(shù)資料以例或率（n（%））表示，行χ2檢驗或Fisher精確概率檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 卵巢癌組織及癌旁組織中nm23-H1、N-cad蛋白表達情況

118例卵巢癌組織中nm23-H1蛋白（見圖1-①）陽性表達率為78.81%（93/118），其中-級25例、+級24例、++級37例、+++級32例；癌旁組織nm23-H1蛋白陽性表達率為91.53%（108/118），癌組織nm23-H1蛋白陽性表達率明顯低于癌旁組織（χ2=7.548，P=0.006）。

圖1 代表性免疫組化圖

N-cad蛋白（見圖1-②）陽性表達率為38.98%（46/118），其中-級72例、+級11例、++級19例、+++級16例；癌旁組織N-cad陽性表達率16.10%（19/118），癌組織N-cad蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織（χ2=15.479，P＜0.0001）。

2.2 不同病理分級癌組織中nm23-H1和N-cad表達水平

Ⅰ級卵巢癌組織nm23-H1表達總陽性率最高，N-cad總陽性率最低（P＜0.05），見表1和表2。

表1 不同病理分級癌組織中nm23-H1（n（%））

表2 不同病理分級癌組織中N-cad表達水平（n（%））

2.3 nm23-H1蛋白和N-cad表達與腫瘤轉移的關系

隨訪40個月，獲得全部隨訪資料者98例，失訪率16.95%（20/118），其中轉移者35例，無轉移者63例；轉移者nm23-H1表達陽性率低于無轉移組（P＜0.05），轉移者N-cad表達陽性率（見圖1）高于無轉移組（P＜0.05），見表3。

表3 nm23-H1和N-cad表達與腫瘤轉移的關系

2.4 nm23-H1蛋白表達與卵巢癌臨床病例特征關系

nm23-H1低表達組漿液型腺癌比例更高（P＜0.05），nm23-H1低表達組和N-cad高表達組病理分級中Ⅲ級比例高、FIGO分期中Ⅲ～Ⅳ比例高（P＜0.05），見表4和表5。

表4 nm23-H1蛋白表達與卵巢癌臨床病理特征關系

表5 N-cad蛋白表達與卵巢癌臨床病理特征關系

2.5 生存分析

本文研究隨訪時間自首次化療日期開始，末次隨訪日期為2018年4月，隨訪40個月。獲得全部隨訪資料者98例，nm23-H1低表達組和N-cad高表達組3年生存率更低（P＜0.05），見表4。

表5 nm23-H1和N-cad表達與生存率的關系

3 討論

人類nm23基因位于17號染色體長臂，該基因編碼具有二磷酸核苷激酶活性的蛋白質，對腫瘤的增殖、分化、侵襲及轉移起重要作用[10]。研究表明，nm23基因編碼的蛋白幾乎存在于所有正常細胞中，而在高分化腫瘤細胞中的表達較高，在低分化及具有高度轉移潛能的腫瘤細胞中不表達或僅有微弱表達[11]。

既往nm23基因家族研究較多，目前已知nm23基因家族包括H1～H10等10個基因，其中nm23-H1與腫瘤轉移關系密切[12]。E-cad是一種鈣依賴性跨膜糖蛋白，在細胞極化、細胞間黏附以及組織結構當中起到重要作用，E-cad的表達和分布異常與腫瘤細胞的去分化、侵襲、淋巴結轉移等有關[13]。近年來研究發(fā)現(xiàn)N-cad在腫瘤發(fā)生進展中的相關作用[14]。但在卵巢癌組織中nm23-H1蛋白及N-cad表達水平的研究較少。

本研究結果顯示，nm23-H1蛋白表達與卵巢腫瘤分化程度，卵巢癌病情進展相關。故nm23-H1的表達有利于維持細胞的正常分化，其高表達水平能夠下調卵巢腫瘤細胞的生長速率。nm23抑制基因的兩個重要作用分別是參與二磷酸鳥苷轉化，排斥腫瘤細胞微管蛋白的聚合，影響細胞骨架狀態(tài)以抑制腫瘤細胞移動；參與G蛋白調控的跨膜信息傳遞，阻斷生長信號傳導[15]。

基質金屬蛋白酶是卵巢癌敏感性標志物，可通過調節(jié)細胞外基質和基底膜來影響腫瘤細胞的侵襲和擴散[16-17]。nm23-H1基因可正向調控基質金屬蛋白酶抑制劑-1mRNA與蛋白表達，負向調控基質金屬蛋白酶-9 mRNA與蛋白表達，從而改變細胞的黏附能力，最終抑制腫瘤生長、轉移[18]。而N-cad在卵巢癌患者中的表達水平與腫瘤發(fā)生、病理分期明顯相關，這說明N-cad高表達能促進細胞的去分化，增強腫瘤病情進展。由于高表達N-cad可促進腫瘤發(fā)生EMT，使相對靜止的腫瘤細胞變?yōu)橛羞\動能力的細胞[19]，因此在腫瘤轉移中也發(fā)揮重要作用。

本次結果顯示，N-cad高表達確能使卵巢癌患者預后不良風險提高。

綜上所述，卵巢癌組織中的nm23-H1蛋白及N-cad高表達均能影響腫瘤細胞分化、干擾臨床病情進展，從而影響卵巢癌患者的生存期。