燥濕健脾法修復放射性腸黏膜損傷機理研究*

付先鋒 晏燕 郭紅飛

（江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院 南昌330006）

近年全球癌癥發(fā)病率迅速增長，年新增癌癥患者近1 900萬。我國每年新增癌癥患者約400萬，居全球第一。其中，結(jié)直腸癌、婦科惡性腫瘤、前列腺癌、膀胱癌等發(fā)病率高，放療可以有效治療腹盆腔惡性腫瘤，大多數(shù)腫瘤患者需進行放射治療。雖然放療延長了部分患者的生存期，但無法避免對正常組織的損傷，導致了放射性腸炎的發(fā)生，尤以放射性直腸炎最為多見，治療難度高，治療效果差[1～2]。放射性腸炎臨床表現(xiàn)有解血便、黏液膿血便、便急、大便次數(shù)顯著增多、腹部疼痛、里急后重和肛門墜脹感[3]，多種多樣，不具有特異性，疾病后期甚至可能并發(fā)腸梗阻、瘺管形成、腸道穿孔、下消化道大出血等。放射性腸炎患者生活質(zhì)量極差。有數(shù)據(jù)顯示，90%左右放射性腸炎患者會出現(xiàn)排便習慣的永久性改變，工作生活不便，護理艱難，這給患者及家屬帶來額外的負擔，患者身心備受折磨。

放射性腸炎的發(fā)病機制，推測與患者接受放射線治療劑量的大小、腸道黏膜屏障破壞[4]、血管內(nèi)皮損傷、腸道菌群紊亂[5]等多種因素相關(guān)。內(nèi)窺鏡下可見毛細血管擴張、腸道黏膜充血、潰瘍形成、腸腔狹窄及組織壞死[6]；病理表現(xiàn)為腸道黏膜炎癥、水腫、壞死和纖維化[7]。目前臨床上多予抗生素，糖皮質(zhì)激素+止血類藥物+止瀉藥+鎮(zhèn)痛藥等保留灌腸，或中藥方劑中藥灌腸治療[8]；癥狀嚴重的患者進食流質(zhì)食物，給予營養(yǎng)支持治療。其中部分患者被迫選擇手術(shù)治療，效果不盡如人意。我們采用燥濕健脾法治療放射性腸黏膜損傷患者取得了良好的效果。本研究探討燥濕健脾法修復放射性腸黏膜損傷的機理?，F(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD大鼠60只（由江西中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供），雌雄各30只，體質(zhì)量190～210 g，喂食標準飼料7 d，提供足夠水分，保持動物房25℃恒溫，12 h交替照明，濕度50%～70%。

1.2 試劑與儀器 平胃散方藥組成：蒼術(shù)、厚樸、陳皮、甘草、大棗、生姜。提取流程：將蒼術(shù)、厚樸、陳皮三味藥材加水8倍充分浸泡3 h，用水蒸氣蒸餾提煉揮發(fā)油6 h，揮發(fā)油置入棕色瓶中密封保存?zhèn)溆?，分離出藥渣后，藥液保留待用；將生姜、大棗、甘草加水10倍浸泡2 h，加入蒼術(shù)、厚樸、陳皮的藥渣，武火沸后改文火，煎3次，每次2 h，去藥渣留藥液；將以上三部分藥液一起混合，濃縮為生藥含量1 g/ml的藥液，加入提取的揮發(fā)油，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。直線加速器、冷凍離心機由實驗室提供。

1.3 模型構(gòu)建 建模前準備：采用2%戊巴比妥溶液靜脈麻醉大鼠，仰臥體位，夾板固定四肢，模擬機下劃定照射野，按解剖定位腸道照射部位，鉛塊保護其余正常組織。照射條件：7 MeV直線電子加速器，皮膚距離放射源1 m，輻射范圍半徑6 cm，單次劑量10 Gy垂直照射。完成照射后大鼠正常進食?？瞻讓φ战M12只大鼠維持平常生活，不予照射，保持環(huán)境穩(wěn)定，大鼠均自行喝水。建模成功判斷標準：照射后大鼠出現(xiàn)消化道癥狀，即進食后嘔吐、大便帶血、解黏液便等，從受照射大鼠中隨機選取2只，麻醉后截取一部分大腸洗凈，福爾馬林固定、制作蠟塊，切片后置于高倍光學顯微鏡下觀察，確認腸黏膜損傷，確認模型建立成功。

1.4 分組與給藥 將48只建模大鼠按隨機數(shù)字表法，分成四組：模型組、燥濕健脾組、胰高血糖素樣肽-2（GLP-2）組、自然恢復組。根據(jù)體表面積確定每只大鼠灌胃的原藥劑量。放射8周后造成符合慢性放射性腸炎臨床表現(xiàn)的模型，造模成功后每天定時予各組等體積相應(yīng)藥物或生理鹽水2 ml灌胃，GLP-2組予GLP-2 250μg/（kg·d），分2次腹腔給藥，間隔12 h。

1.5 取樣 給藥7 d后采大鼠動脈血5 ml，靜置2 h，按2 400 r/min離心15 min，低溫抗凝保存上清液，待檢GLP-2含量；活體取大鼠空腸、結(jié)腸組織，固定待檢；活體刮取腸黏膜，部分分離細胞送檢，部分低溫保存待檢；隨機處死大鼠另取空腸、結(jié)腸常規(guī)處理，固定待檢。

1.6 檢測方法 腸道內(nèi)毒素（LPS），采靜脈血1 ml注入肝素抗凝試管，低溫離心后取上清液，稀釋5倍恒溫加熱10 min，離心15 min取上清液，按鱟試劑說明書定量測定[9]。腸道超氧化物歧化酶（SOD）活力，測定鄰苯三酚自氧化速率[10]。腸道腫瘤壞死因子-α（TNF-α），制作腸組織勻漿液，離心后采集上清液，ELISA法檢測細胞因子TNF-α含量[11]。腸道血小板活化因子（PAF）采用放射免疫技術(shù)測定[12]。GLP-2采用放射免疫技術(shù)測定[13]。

1.7 療效評定標準 參考《潰瘍性結(jié)腸炎中西醫(yī)結(jié)合診療共識意見（2017年）》[14]和《中國放射性直腸炎診治專家共識（2018版）》[1]確定放射性腸炎療效標準。腸黏膜損傷程度療效量化標準定義每個+為1分。充血水腫：一級為輕度；二級為中度；三級為重度。糜爛：一級為輕度；二級為中度可伴出血；三級為觸之易出血。潰瘍：一級≤3分；二級≥3分，紅腫明顯；三級，分布范圍廣，表面穢苔，紅腫顯著。見表1。

表1 腸黏膜損傷程度療效量化標準

1.8 觀察指標 比較各組療效，測定LPS、SOD、TNF-α、PAF、GLP-2水平。

1.9 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 療效比較 燥濕健脾組、GLP-2組療效評分優(yōu)于模型組和自然恢復組（P＜0.001）。見表2。

表2 各組療效評分比較（分，±s）

表2 各組療效評分比較（分，±s）

注：與空白對照組和自然恢復組比較，#P＜0.001。

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2.2 LPS、SOD、PAF、TNF-α、GLP-2水平比較 模型組LPS、SOD、PAF、TNF-α、GLP-2水平較空白對照組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），表示建模成功。自然恢復組LPS、SOD、PAF、TNF-α、GLP-2水平與模型組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。燥濕健脾組與GLP-2組LPS、PAF、TNF-α水平較模型組降低，SOD、GLP-2水平較模型組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表3。

表3 各組LPS、SOD、PAF、TNF-α、GLP-2水平比較（±s）

表3 各組LPS、SOD、PAF、TNF-α、GLP-2水平比較（±s）

注：與模型組相比，#P＜0.01，△P＞0.05。

組別 n LPS（EU/ml） SOD（U/mg） PAF（pmol/L） TNF-α（pg/ml） GLP-2（pg/ml）空白對照組模型組燥濕健脾組GLP-2組自然恢復組12 12 12 12 12 1.20±0.05 1.68±0.17 0.65±0.06#0.73±0.06#1.57±0.05△138.12±6.85 129.07±12.70 288.22±15.79#191.45±10.88#118.26±6.49△1.38±0.07 1.82±0.13 0.51±0.05#1.00±0.06#1.70±0.03△78.68±5.79 167.09±15.54 36.99±5.86#41.29±2.57#114.43±3.87△2.88±0.14 3.10±0.20 3.70±0.17#3.86±0.26#2.91±0.07△

3 討論

中醫(yī)學認為惡性腫瘤患者正氣虧虛，高能射線屬于火（熱）毒[15]，作用于腸道，熱毒內(nèi)蘊[16]，傷及脾土而致脾胃虛弱，脾虛百病生，濕邪不能運化。熱毒與濕邪在腸道混雜，致使腸道氣血瘀阻，腸道傳導失司，發(fā)為腹痛。濕熱毒邪灼傷腸道陰絡(luò)，脾虛不攝血，致腹瀉便血。中醫(yī)辨證為脾虛濕阻，瘀毒內(nèi)結(jié)，病位在腸，與脾胃肝腎虛損相關(guān)，臨床運用方藥治療效果明顯。張小萍[17]教授認為腸道功能是脾胃功能的延伸，腸黏膜水腫的病理改變，究其內(nèi)涵，與中醫(yī)理論“濕盛脾虛”有關(guān)；腸道的肌肉、黏膜、上皮細胞等也需要得到后天脾胃之氣的滋養(yǎng)，亦屬于脾主肌肉的范疇，腸黏膜功能與脾主肌肉有關(guān)，受損是脾虛的表現(xiàn)。燥濕健脾方——平胃散為苦溫燥濕的代表方，歷代醫(yī)家創(chuàng)造的諸多芳香化濕方劑都是在此基礎(chǔ)上化裁而來，長期臨床驗證療效確切。方中重用蒼術(shù)健脾燥濕為君；厚樸行氣化濕為臣；陳皮行氣化滯為佐；厚樸復脾胃升降之力，姜、棗、草健脾和中，調(diào)和諸藥為使，諸藥合用，共成燥濕健脾之功?，F(xiàn)代藥理學研究證明，陳皮、甘草、厚樸均有抗炎作用，可清除氧自由基。本研究結(jié)果顯示，健脾燥濕方可以減輕放射性腸炎大鼠腸道損傷。運用燥濕健脾法對受損腸黏膜進行修復符合傳統(tǒng)中醫(yī)證治療法，燥濕健脾方對放射性腸炎型大鼠腸道黏膜損傷有修復及治療作用，對臨床有重要指導意義。中醫(yī)藥治療具有療效好、副作用小、并發(fā)癥少等優(yōu)點，更符合我國當前國情。

綜上所述，燥濕健脾方可有效提升提升放射性腸黏膜損傷大鼠GLP-2含量，增強SOD活性，發(fā)揮清除氧自由基作用，阻斷腸黏膜氧化，促進腸黏膜修復，這為燥濕健脾方防治放射性腸黏膜損傷的臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。