江西特產(chǎn)中藥茶芎抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集研究*

吳先昊 尹小明 袁源見 黃斌 田瑩瑩 曾強(qiáng) 趙詩云＃

（1江西省中醫(yī)藥研究院 南昌330046；2江西省人民醫(yī)院 南昌330006）

茶芎來源于傘形科藁本屬植物茶芎（Ligusticum chuanxiong Hort.cv.fuxiong）的干燥根莖，是江西九江地區(qū)栽培的特產(chǎn)中藥材，九江地區(qū)常用來泡茶，故名“茶芎”。茶芎與川芎、臺芎、西芎合稱芎，始見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。茶芎升散，通行經(jīng)絡(luò)，郁在中焦、胸膈痞滿作痛，須茶芎開提其氣以升之，故茶芎總解諸郁，直達(dá)三焦，通陰陽之氣血[1～2]。在古代，茶芎常作為川芎的替代品用于處方中。與川芎不同，茶芎長期不開花，以無性繁殖為主。九江修水地區(qū)將其用來泡十錦茶，長年飲用，可增強(qiáng)體質(zhì)，促進(jìn)新陳代謝?，F(xiàn)代藥理研究表明茶芎中含有苯酞類、揮發(fā)油、藁本內(nèi)酯、揮發(fā)性生物堿、茶芎多糖等成分，茶芎及其成分具有抗炎、增強(qiáng)免疫、增加頸總動脈流量、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞等作用[3～5]。本研究探討茶芎對大鼠血小板聚集的影響及可能機(jī)制?，F(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗動物 SD大鼠，SPF級，雄性，體質(zhì)量180～220 g，購于江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心，許可證號：SCXK（贛）2018-0003。

1.2 受試藥與試劑 茶芎采自九江瑞昌，經(jīng)虞金寶研究員（江西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所）鑒定為傘形科藁本屬植物茶芎。茶芎水提物由本課題組提供，取240 g干燥樣品，切成飲片，加水煎煮2次，合并濾液濃縮至1 000 ml。阿司匹林（國藥準(zhǔn)字J20171021）、二磷酸腺苷（ADP）（美國海倫娜公司）。1.3 主要儀器 AggRam血小板聚集儀（型號BJF52001，美國海倫娜公司）。西斯美康血凝儀（型號CS-5100），試劑均為原裝進(jìn)口配套。

1.4 實(shí)驗方法 SD雄性大鼠40只，隨機(jī)分為4組，每組10只，即空白對照組、阿司匹林腸溶片組（60 mg/kg）、茶芎水提物高劑量組（2.4 g/kg）、茶芎水提物低劑量組（0.6 g/kg）。阿司匹林腸溶片組、茶芎水提物各劑量組連續(xù)灌胃給藥7 d，第6天給藥后禁食，自由飲水過夜，第7天進(jìn)行末次給藥，2 h后用乙醚麻醉，腹主動脈取血。

1.5 觀察指標(biāo) 大鼠腹主動脈取血兩份，用3.8%枸櫞酸鈉溶液按1:9抗凝。一份參照文獻(xiàn)[6]，用血小板聚集儀記錄血小板5 min最大聚集率（PAGmax），并計算各給藥組血小板聚集的最大抑制率（IR），IR=（空白對照組PAGmax－給藥組PAGmax）/空白對照組PAGmax×100%。另一份全血以轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心15 min，取血漿，用西斯美康血凝儀檢測凝血酶原時間（PT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶時間（TT）和纖維蛋白原（Fib）含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以（±s）表示，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 茶芎水提物對ADP誘導(dǎo)大鼠血小板聚集的影響 茶芎水提物高劑量組、阿司匹林腸溶片組5 min PAGmax均低于空白對照組，差異有極顯著性（P＜0.01）；茶芎水提物低劑量組與空白對照組比較，PAGmax有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。阿司匹林腸溶片組、茶芎水提物高、低劑量組IR分別為31.5%、13.2%、3.8%，說明茶芎具有抗血小板聚集作用，且呈劑量依賴性。見表1。

表1 茶芎水提物對ADP誘導(dǎo)大鼠血小板聚集的影響（n＝10，±s）

表1 茶芎水提物對ADP誘導(dǎo)大鼠血小板聚集的影響（n＝10，±s）

注：與空白對照組比較，△P＜0.01。

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2.2 茶芎水提物對大鼠凝血象的影響 與空白對照組比較，茶芎水提物高劑量組、阿司匹林腸溶片組APTT和TT顯著延長，差異有極顯著性意義（P＜0.01）；與空白對照組比較，茶芎水提物高劑量組、阿司匹林腸溶片組PT明顯延長，差異具有顯著性（P＜0.05）。與空白對照組比較，茶芎水提物高、低劑量組大鼠血液中Fib含量均明顯減少，差異具有顯著性（P＜0.05）。見表2。

表2 茶芎水提物對大鼠凝血象的影響（n＝10，±s）

表2 茶芎水提物對大鼠凝血象的影響（n＝10，±s）

注：與空白對照組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01。

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3 討論

血栓是心腦血管疾病的重要誘因，而血小板過度激活是血栓形成的中心環(huán)節(jié)，心、腦血管血栓性疾病占我國人口病死原因的首位[7]。血小板活化后會聚集并黏附在血管內(nèi)形成血栓，造成血管栓塞的發(fā)生。其機(jī)理是血管、組織損傷或異物使血小板過度活化和凝血系統(tǒng)過度激活，進(jìn)一步促進(jìn)血小板聚集、凝血因子活化和纖維蛋白生成，導(dǎo)致血栓和纖維蛋白的生成與降解失衡，如不加以控制將引起血管栓塞。研究表明，血栓形成的危險因素包括糖尿病、高血壓、高血脂、吸煙、遺傳等。血小板在聚集劑的激活下，其膜上纖維蛋白原受體暴露，在Ca2+的參與下纖維蛋白原與血小板結(jié)合，使相鄰的血小板連接在一起，最終導(dǎo)致血小板聚集成團(tuán)[8]。誘導(dǎo)血小板聚集的物質(zhì)分為生理性和病理性聚集劑，生理性聚集劑有膠原、凝血酶、腎上腺素、5羥色胺（5-HT）、組胺、血栓烷A2（TXA2）、ADP等，病理性聚集劑有病菌、藥物、免疫復(fù)合物等。聚集劑引起血小板膜上相應(yīng)受體激活和細(xì)胞信號傳導(dǎo)，從而降低環(huán)磷酸腺苷（cAMP）濃度，提高游離Ca2+濃度?？寡“寰奂?、降低血液黏度、抑制血栓形成是防治血栓性疾病的重要方式。根據(jù)作用靶點(diǎn)不同，抗血小板聚集的機(jī)理分為：（1）抑制血小板環(huán)氧化酶，從而抑制花生四烯酸轉(zhuǎn)變成前列腺素G2和H2，導(dǎo)致產(chǎn)生的TXA2下降，血小板內(nèi)cAMP含量升高，血小板聚集抑制；（2）與Ca2+結(jié)合，除去血漿中的Ca2+，從而抗血小板聚集，如枸櫞酸鈉；（3）纖溶酶原激活，纖溶酶（一類絲氨酸蛋白酶）對纖維蛋白分解液化，從而清除血栓[9]。凝血四項是臨床檢驗血栓性疾病的常用指標(biāo)，PT反映外源性凝血途徑，主要由凝血因子（FⅦ）的活性來決定；APTT反映內(nèi)源性凝血途徑，主要反應(yīng)凝血因子Ⅱ（FⅡ）、Ⅴ（FⅤ）、Ⅷ（FⅧ）、Ⅸ（FⅨ）、Ⅺ（FⅪ）等活性；TT主要反映纖維蛋白原的活性，與凝血因子Ⅰ（FⅠ）相關(guān)；Fib是由肝細(xì)胞分泌的參與凝血和止血過程的一種糖蛋白，F(xiàn)ib轉(zhuǎn)變成不溶性纖維蛋白導(dǎo)致血液凝固。

阿司匹林常用于急性冠脈綜合征的治療以及動脈粥樣硬化的二級預(yù)防，具有良好的效果，其機(jī)理為抑制環(huán)氧合酶的活性，從而減少TXA2的合成，抑制血小板聚集，進(jìn)而防止血栓形成，降低心腦血管事件的發(fā)生。雖然阿司匹林在防治血栓性疾病方面發(fā)揮了重要作用，但其對血小板的抑制作用是不可逆的，且有出血的副作用，使其在臨床上的長期應(yīng)用受到了限制。中醫(yī)藥在防治慢性疾病方面有其特有的優(yōu)勢，具有多靶點(diǎn)、毒副作用小等特點(diǎn)。因此，從中醫(yī)藥中尋找用于防治心腦血管疾病的藥物顯得尤為重要。茶芎具有活血行氣、祛風(fēng)止痛等作用，常用于頭風(fēng)頭痛、風(fēng)濕痹痛等癥。本研究表明，茶芎水提物高劑量組可明顯降低ADP誘導(dǎo)的血小板聚集率，延長PT、APTT、TT時間，降低大鼠全血中Fib含量。至于茶芎是通過哪條途徑使血小板聚集率下降，有待今后進(jìn)一步研究。