老年乳腺癌組織中HER-2、GCDFP15及Calponin表達與術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

簡華勇 李廷超 (遵義醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院(遵義市第一人民醫(yī)院) ，貴州 遵義 563000)

手術(shù)是乳腺癌常用治療手段，手術(shù)本身具有較好干預(yù)效果，可有效切除病灶，延長患者生存時間，但仍有部分患者術(shù)后會發(fā)生復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，影響整體治療效果，增加預(yù)后風(fēng)險〔1〕。因此，早期預(yù)測乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險，對指導(dǎo)早期干預(yù)，減少術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移意義重大。隨著研究深入，人表皮生長因子受體(HER)2被證實可作為乳腺癌的獨立預(yù)后因素，且有研究顯示該基因表達情況與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切聯(lián)系，可能參與了術(shù)后癌細胞復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移〔2〕。巨囊性病液體蛋白(GCDFP)15為乳腺囊液組成蛋白，因正常乳腺導(dǎo)管小葉基本不分泌GCDFP15，且既往研究顯示該蛋白對乳腺癌具有較高診斷價值，故猜測GCDFP15可能參與了術(shù)后癌細胞的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移〔3,4〕。鈣調(diào)理蛋白(Calponin)屬于細胞骨架類蛋白，以往的研究著重觀察鈣蛋白在細胞收縮方面的作用，但近年來研究顯示，Calponin在腫瘤發(fā)展過程中也有重要作用〔5〕。本研究旨在分析HER-2、GCDFP15及Calponin表達與老年乳腺癥患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧分析遵義市第一人民醫(yī)院2017年6月至2020年6月經(jīng)病理組織確診并完成治療與隨訪的80例老年乳腺癌組織標本、61例結(jié)節(jié)性乳腺囊腫組織標本及41例癌旁正常組織標本。乳腺癌組年齡63～75歲，平均(69.51±3.52)歲；體重指數(shù)(BMI)17.6～24.8 kg/m2，平均(21.26±1.25)kg/m2。結(jié)節(jié)性乳腺囊腫組年齡63～76歲，平均(69.58±3.42)；BMI 17.7～24.9 kg/m2，平均(21.36±1.34)kg/m2。癌旁正常組年齡63～74歲，平均(68.95±3.49)歲；BMI 17.5～24.6 kg/m2，平均(21.06±1.54)kg/m2。3組基線資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。

1.2入選標準 納入標準：①乳腺癌符合《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范(2015版)》〔6〕中乳腺癌診斷標準，結(jié)節(jié)性乳腺囊腫患者均經(jīng)超聲檢查證實，且均經(jīng)病理組織切片確診；②年齡≥60周歲；③臨床影像學(xué)資料、實驗室檢查資料、病例資料均完整。排除標準：①心、肝、腎等重要臟器功能異常；②合并其他惡性腫瘤；③凝血功能異常；④合并免疫系統(tǒng)疾病。

1.3免疫組化法 取手術(shù)標本用4%中性甲醛固定液進行固定，石蠟包埋處理后，常規(guī)切4 μm切片；將石蠟切片用二甲苯脫蠟后，添加適量5%雙氧水，于常溫環(huán)境下孵育10 min，再用磷酸鹽緩沖液孵育5 min；孵育結(jié)束用蒸餾水沖洗3次(5 min/次)，置入含5% 山羊血清抗體內(nèi)封閉，10 min后直接滴加一抗(鼠抗人HER-2抗體、單克隆鼠抗GCDFP15抗體、鼠抗人Calponin抗體，均購自基因科技股份有限公司)，于4℃冰箱內(nèi)孵育過夜后，用蒸餾水沖洗3次(5 min/次)；滴加生物素標記的二抗(購自基因科技股份有限公司)，于37℃環(huán)境下孵育30 min，用蒸餾水沖洗3次(5min/次)；滴加用二代辣根酶標記的工作液體，于37℃環(huán)境下孵育10 min，孵育結(jié)束后用蒸餾水沖洗3次(5 min/次)；顯色后用酒精進行脫水，二甲苯透明及樹膠封片，最后于顯微鏡(購自日本奧林巴斯公司，型號：BX53)下觀察染色結(jié)果。

1.4結(jié)果判讀 ①HER-2陰性：無癌細胞染色或≤10%癌細胞呈現(xiàn)不完整細胞膜染色；陽性：>10%的癌細胞呈不完整或完整的細胞膜染色；染色強度微弱、一般或強。②GCDFP15陰性：細胞質(zhì)內(nèi)無染色；陽性：細胞質(zhì)著色呈棕黃色，且陽性細胞占比>5%。③Calponin陰性：肌上皮細胞或部分間質(zhì)細胞的細胞質(zhì)無著色，且無陽性細胞；陽性：肌上皮細胞或部分間質(zhì)細胞的細胞質(zhì)著色，可見陽性細胞。

1.5基線資料收集法 設(shè)計臨床資料調(diào)查問卷，記錄老年乳腺癌患者基線資料〔包括年齡、BMI、合并癥(糖尿?。嚎崭寡撬?7.0 mmol/L；高血壓：收縮壓水平≥140 mmHg，舒張壓水平≥90 mmHg；高脂血癥：低密度脂蛋白膽固醇水平>130 mg/dl)、臨床分期(Ⅰ～Ⅳ期)等〕及實驗室指標〔HER-2(陽性、陰性)、GCDFP15(陽性、陰性)、Calponin(陽性、陰性)〕。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0軟件進行Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗、單因素方差分析、χ2檢驗、秩和檢驗及多項Logistic回歸分析；繪制受試者工作特征(ROC)曲線，并計算曲線下面積(AUC)值，AUC值>0.90表示預(yù)測性能較高，0.71～0.90表示有一定的預(yù)測性，0.50～0.70表示預(yù)測性能較差，以檢驗HER-2、GCDFP15、Calponin表達預(yù)測術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的價值。

2 結(jié) 果

2.13組HER-2、GCDFP15、Calponin表達比較 乳腺癌組、結(jié)節(jié)性乳腺囊腫組HER-2與GCDFP15陽性率高于癌旁正常組，Calponin陽性率低于癌旁正常組，乳腺癌組HER-2與GCDFP15陽性率高于結(jié)節(jié)性乳腺囊腫組，Calponin陽性率低于結(jié)節(jié)性乳腺囊腫組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。見表1。

表1 3組HER-2、GCDFP15、Calponin表達比較〔n(%)〕

2.2復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組與未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組基線資料比較 80例老年乳腺癌患者隨訪結(jié)束，24例(30.00%)發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。兩組年齡、BMI、合并疾病、臨床分期差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組HER-2陽性、GCDFP15陽性、Calponin陰性均高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，HER-2陽性、GCDFP15陽性、Calponin陰性可能與老年乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P>0.05)。見表2。

組別n年齡(歲)BMI(kg/m2)合并疾病〔n(%)〕糖尿病(n=29)高血壓(n=27)高脂血癥(n=25)HER-2陽性〔n(%),n=52〕復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組2469.24±3.2421.34±1.259(31.03)8(29.63)6(24.00)20(38.46)無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組5669.62±3.2521.22±1.2420(68.97)19(70.37)19(76.00)32(61.54)t或χ2值0.3530.3960.0230.0030.6235.065P值0.7250.6930.8790.9590.4300.024組別n臨床分期〔n(%)〕Ⅰ期(n=13)Ⅱ期(n=23)Ⅲ期(n=29)Ⅳ期(n=15)GCDFP15陽性〔n(%),n=57〕Calponin陽性〔n(%),n=22〕復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組245(38.46)6(26.09)10(34.48)3(20.00)21(36.84)2(9.09)無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組568(61.54)17(73.91)19(65.52)12(80.00)36(63.16)20(90.91)χ2/P值0.636/0.5254.420/0.0366.317/0.012

2.3HER-2、GCDFP15、Calponin表達對老年乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移影響的回歸分析 將HER-2、GCDFP15、Calponin表達作為自變量并賦值，HER-2陽性=1，陰性=0；GCDFP15陽性=1，陰性=0；Calponin陰性=1，陽性=0。將老年乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況作為因變量(1=復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，2=未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移)，經(jīng)多項Logistic回歸分析結(jié)果顯示，HER-2陽性、GCDFP15陽性、Calponin陰性是老年乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響因素(OR>1，P>0.05)。見表3。

表3 術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響因素多因素分析結(jié)果

2.4HER-2、GCDFP15、Calponin表達預(yù)測老年乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的價值 將術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況作為狀態(tài)變量(1=復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，2=未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移)，將HER-2、GCDFP15、Calponin表達作為檢驗變量(HER-2：1=陽性，0=陰性；GCDFP15：1=陽性，0=陰性；Calponin：1=陰性，0=陽性)，繪制ROC曲線(圖1)顯示，HER-2陽性、GCDFP15陽性、Calponin陰性預(yù)測術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的AUC分別為0.807(AUC 95%CI：0.696～0.918，P<0.001)、0.857(AUC 95%CI：0.762～0.952,P<0.001)、0.833(AUC 95%CI：0.380～0.928，P<0.001)，均>0.80，有一定預(yù)測價值。

圖1 HER-2、GCDFP15、Calponin表達預(yù)測老年乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險ROC曲線

3 討 論

作為女性常見惡性腫瘤，乳腺癌的發(fā)病機制尚未明確，多認為與遺傳、乳腺良性疾病未治愈等因素有關(guān)〔7〕。目前臨床治療乳腺癌多采用外科手術(shù)，手術(shù)雖可將腫瘤病灶有效切除，但術(shù)后仍有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險，不利于患者預(yù)后〔8〕。因此，早期預(yù)測乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險是臨床早期干預(yù)，改善患者預(yù)后的關(guān)鍵。

隨著分子生物技術(shù)發(fā)展，分子病理學(xué)在乳腺癌的診斷、干預(yù)及預(yù)后評估中得到重視〔9〕。HER-2作為乳腺癌基因，其在乳腺癌中的作用已得到證實，且現(xiàn)已成為腫瘤靶向藥物治療新靶點〔10〕。HER-2過表達除了會增加腫瘤細胞侵襲能力外，還會促進淋巴血管新生，增加淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險，同時可降低腫瘤細胞對化療藥物敏感性，影響整體干預(yù)效果，繼而增加術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險〔11，12〕。本研究結(jié)果提示乳腺癌患者病理組織中HER-2表達增高；經(jīng)回歸分析并繪制ROC曲線結(jié)果證實HER-2過表達參與了乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。GCDFP15多被作為大汗腺標志物，主要由大汗腺、泌乳腺等腺體分泌而來，因多種乳腺病變均存在大汗腺分化表現(xiàn)，且有研究顯示乳腺癌組織中GCDFP15過表達，故GCDFP15被臨床作為乳腺癌診斷特異性指標〔13，14〕。因乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移可能會影響乳腺囊液分泌，繼而影響GCDFP15表達情況，故猜測可將GCDFP15作為乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險的預(yù)測指標〔15〕。作為細胞骨架類蛋白，Calponin根據(jù)電點的不同可分為H1-Calponin、H2-Calponin、H3-Calponin 3種亞型，其中H2-Calponin廣泛存在于內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞等細胞中〔16〕。有研究顯示，H2-Calponin表達增加是腫瘤預(yù)后的一個積極因素〔17〕。王華等〔18〕研究發(fā)現(xiàn)，下調(diào)的H2-Calponin可促進食管鱗癌細胞增殖、轉(zhuǎn)移。由此可見，Calponin陰性可能會增加乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險。本研究結(jié)果提示乳腺癌患者GCDFP15表達增加，Calponin表達下調(diào)；經(jīng)回歸分析并繪制ROC曲線結(jié)果證實GCDFP15、Calponin表達也與老年乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且可作為乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險的另一預(yù)測指標。

綜上，老年乳腺癌患者術(shù)后仍有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險，可能與組織中HER-2過表達、GCDFP15過表達、Calponin表達下調(diào)有關(guān)，檢測老年乳腺癌患者HER-2、GCDFP15、Calponin表達，對預(yù)測患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險與指導(dǎo)早期防治干預(yù)計劃擬定有積極意義。