小熊貓槽盤吸蟲感染病理觀察

王運(yùn)盛，吳秀山，趙素芬，普天春，盧 巖,2，張成林,2*

（1.北京動(dòng)物園，北京 100044；2.圈養(yǎng)野生動(dòng)物技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100044）

小熊貓（Ailurus fulgens）為亞洲特有物種，過去幾十年受棲息地大規(guī)模減少以及人類狩獵活動(dòng)的影響，該物種的種群數(shù)量減少了40%，全球種群約為10 000只，已被列入IUCN紅色名錄的易危級別，嚴(yán)格禁止交易[1,2]。中國圈養(yǎng)小熊貓已有60多年歷史，臨床上小熊貓常發(fā)生外傷、甲溝炎、蛇傷等外科疾病，細(xì)菌性胃腸炎、消化不良、排黏、熱射病等內(nèi)科疾病，以及惡心絲蟲、球蟲、肺線蟲、蛔蟲、疥螨、蜱蟲、吸蟲等寄生蟲病[3]。

槽盤吸蟲隸屬于背孔科（Notocotylidae）、槽盤屬（Ogmocotyle），多見于綿羊、山羊、羚羊、鹿、林麝、麅、大熊貓、小熊貓等，主要寄生在小腸內(nèi)，蟲體腹面從頭到尾中間凹陷，兩邊翹起，形似槽狀，從而得名槽盤吸蟲。槽盤吸蟲?。∣gmocotylosis）是危害小熊貓健康及生存的一個(gè)重要因素。鄔捷（1959年）[4]、危碎凡（1965年）[5]等先后報(bào)告在小熊貓?bào)w內(nèi)發(fā)現(xiàn)了印度槽盤吸蟲（Ogmocotyle indica）。隨后，綿陽市動(dòng)物園、南寧動(dòng)物園工作人員進(jìn)行野生動(dòng)物寄生蟲普查時(shí)發(fā)現(xiàn)小熊貓槽盤吸蟲感染率分別達(dá)67%和50%[6]。對于嚴(yán)重感染致死病例，小腸漂洗獲得的印度槽盤吸蟲蟲體數(shù)目達(dá)18 600條以上[7]。臨床上，對圈養(yǎng)小熊貓飼養(yǎng)和管理帶來了極大挑戰(zhàn)。北京動(dòng)物園獸醫(yī)院收檢死亡小熊貓1例，經(jīng)糞檢發(fā)現(xiàn)大量槽盤吸蟲，根據(jù)檢出吸蟲形態(tài)，獸醫(yī)診斷槽盤吸蟲可能是致死該小熊貓的重要病因。本研究采用組織病理學(xué)方法觀察小熊貓感染槽盤吸蟲后各器官組織的病理學(xué)變化，以期為小熊貓寄生蟲病診斷和治療提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病料

病死小熊貓1只。

1.2 方法

1.2.1 剖檢及病理組織學(xué)檢查 剖檢發(fā)病死亡的小熊貓，觀察其病理變化，采集心、肝、脾、肺、腎、腸、胰腺等組織，迅速投入10%的福爾馬林進(jìn)行病理組織切片前處理。

1.2.2 槽盤吸蟲鏡檢 采集病料小腸內(nèi)容物，置入粗制尼龍網(wǎng)內(nèi)，生理鹽水沖洗，待沖洗液清亮后，將濾渣內(nèi)蟲體制作壓片，體視鏡下觀察。同時(shí)，挑取肺臟結(jié)節(jié)內(nèi)蟲體，制作壓片，體視鏡下觀察蟲體結(jié)構(gòu)。

1.2.3 HE染色 石蠟切片分別經(jīng)二甲苯脫蠟，無水乙醇、9 5%乙醇、8 5%乙醇、7 5%乙醇、50%乙醇梯度復(fù)水，下行至雙蒸水中，蘇木精染色10 min，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，水洗返藍(lán)15 min，依次通過50%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇梯度脫水后，伊紅染色1 min，95%乙醇洗滌，再經(jīng)無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。切片放置于37℃溫箱內(nèi)過夜烘干后鏡檢。光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理學(xué)變化情況。

2 結(jié)果

2.1 病理變化

剖檢病死小熊貓，肺組織充血，肺邊緣出血明顯，肺表面可見米粒大小灰白色結(jié)節(jié)（見圖1A、1B）；心肌質(zhì)軟、塌陷，心外膜可見散在出血點(diǎn)；腎髓質(zhì)、大盞充血，脾顏色不均、質(zhì)地硬實(shí)、邊緣淤血；腸道鼓脹，腸系膜淋巴結(jié)紅腫；對小腸內(nèi)容物及肺內(nèi)蟲體壓片，體視鏡觀察，槽盤吸蟲蟲卵呈卵圓形，具有兩層卵殼，卵的兩極各具有1根卵絲，其中一極卵絲較為粗大，另一極卵絲相對細(xì)小，卵內(nèi)充滿已經(jīng)發(fā)育的卵細(xì)胞（見圖1C）；槽盤吸蟲蟲體呈長葉形，兩端鈍圓，兩側(cè)向體腹面卷折，蟲體兩邊翹起，前部狹彎如鉤狀，后部膨大而鈍圓；雄莖囊呈弧形橫臥于蟲體前半部，生殖孔開口于蟲體亞中部，陰莖伸出孔外；睪丸具有大量分瓣，形如香腸狀、豆?fàn)罨虿灰?guī)則的長卵圓形，卵黃腺分布于蟲體后1/3處，根據(jù)蟲卵及蟲體形態(tài)，判定感染小熊貓槽盤吸蟲（見圖1D）。

圖1 小熊貓剖檢觀察

2.2 病理學(xué)觀察結(jié)果

脾：低倍鏡下觀察可見脾臟組織被膜增厚，動(dòng)脈充血，紅髓中大量紅細(xì)胞浸潤；高倍鏡下觀察脾臟部分區(qū)域網(wǎng)狀細(xì)胞大量增生，含鐵血黃素沉著。心?。旱捅剁R下觀察心肌纖維排列松散；高倍鏡下可見心肌細(xì)胞顆粒變性，細(xì)胞間充斥多量紅細(xì)胞，心肌出血；部分心肌束出現(xiàn)斷裂。腸道：未見明顯病理變化。胰腺：低倍鏡下觀察胰腺各組織結(jié)構(gòu)基本正常；高倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn)胰腺細(xì)胞腫脹，細(xì)胞顆粒變性明顯，部分區(qū)域細(xì)胞由顆粒變性轉(zhuǎn)變?yōu)樗葑冃?，胰腺組織向水腫方向發(fā)展。腎：低倍鏡下腎小管上皮細(xì)胞萎縮，脫落，體積縮小，腎小管管壁變薄，管腔變大，腎小球呈分葉狀；高倍鏡下，遠(yuǎn)曲小管和近曲小管部分上皮細(xì)胞顆粒變性、腫脹且脫離基底膜；脫落的上皮細(xì)胞發(fā)生壞死崩解，僅殘存細(xì)胞輪廓；腎小球毛細(xì)血管充血，腎小囊明顯擴(kuò)張，在腎小管之間可見大量紅細(xì)胞。肝：低倍鏡下觀察肝索排列紊亂，肝淤血、出血，大量紅細(xì)胞崩解，含鐵血黃素沉積，呈棕黃色點(diǎn)狀分布于組織內(nèi)。高倍鏡下觀察肝細(xì)胞顆粒變性。肺：病理學(xué)觀察取材樣本呈兩種表現(xiàn)，一種為低倍鏡下觀察肺泡間隔顯著增寬，肺泡正常結(jié)構(gòu)消失；高倍鏡下觀察增寬的間質(zhì)中淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤，肺泡間隔、小葉間隔內(nèi)血管充血、出血；另一種為間質(zhì)性肺炎，未發(fā)生間質(zhì)性肺炎區(qū)域可見肺組織結(jié)構(gòu)較為完整，但在肺泡中發(fā)現(xiàn)寄生蟲體（見圖2A）；油鏡下觀察可見寄生蟲體嗜堿性深染（見圖2B）。

圖2 小熊貓病理學(xué)觀察

3 討論

我國境內(nèi)發(fā)現(xiàn)的槽盤吸蟲以印度槽盤吸蟲、鹿槽盤吸蟲、福建槽盤吸蟲和小熊貓槽盤吸蟲最為常見[8]。其中，印度槽盤吸蟲廣泛分布于我國甘孜、阿壩、涼山、雅安等地，尤以漢源縣綿羊的感染率及感染度最高，在四川羚羊、陜西大熊貓、廣西黑山羊小腸內(nèi)可以檢測到鹿列葉吸蟲，且主要寄生在宿主小腸內(nèi)[3,9,10]。南京某動(dòng)物園死亡小熊貓小腸內(nèi)因寄居大量印度槽盤吸蟲，致使腸道多處出現(xiàn)肉芽腫，造成機(jī)體消瘦、抵抗力下降，引起死亡[11]。據(jù)報(bào)道，寄生于小熊貓?bào)w內(nèi)的吸蟲至少有兩個(gè)蟲種，即印度槽盤吸蟲和小熊貓槽盤吸蟲。印度槽盤吸蟲的雄莖囊縱置于蟲體中部的1/3處，睪丸腎形或橢圓形，表面光滑；小熊貓槽盤吸蟲的雄莖囊呈弧形橫臥于蟲體前半部，睪丸分葉[8]。本研究采集病死小熊貓腸道內(nèi)蟲體，顯微鏡下觀察，鏡檢其雄莖囊呈弧形橫臥于蟲體前半部，生殖孔開口于蟲體亞中部，陰莖伸出孔外，睪丸具有大量分瓣，形如香腸狀、豆?fàn)罨虿灰?guī)則的長卵圓形，因此判定該病例感染的是小熊貓槽盤吸蟲。

目前對小熊貓槽盤吸蟲的確診多通過收集腸內(nèi)容物、經(jīng)水洗淘蟲等方法，缺少病理組織學(xué)的系統(tǒng)觀察及描述。本研究中，在病死小熊貓小腸內(nèi)容物中檢出大量蟲體，可見消化道是列葉吸蟲的一個(gè)重要寄生部位，但鏡檢腸道組織結(jié)構(gòu)相對完整，沒有出現(xiàn)吸蟲寄生引起的腸道病理學(xué)變化。同時(shí)，本研究在小熊貓肺泡腔內(nèi)檢測到大量槽盤吸蟲蟲體，這一現(xiàn)象國內(nèi)外鮮有資料報(bào)道，槽盤吸蟲這一寄生特性及生活史是否與小熊貓物種特殊性有關(guān)尚不清楚，槽盤吸蟲的肺內(nèi)寄生原因很難確定，還需要進(jìn)行更深入的研究。本研究中小熊貓槽盤吸蟲感染的病理組織學(xué)系統(tǒng)觀察是對小熊貓列葉吸蟲病資料的一個(gè)補(bǔ)充，特別是小熊貓肺部寄生槽盤吸蟲的病理學(xué)觀察，為該寄生蟲的生活史研究提出了新的思路。