葡萄枝屑栽培靈芝菌株篩選

丁李春

（福建省寧德市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，福安寧德 355003）

靈芝（Ganoderma lucidum）是擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬真菌[1]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明靈芝含有多種藥理活性物質(zhì)，是我國傳統(tǒng)名貴中藥，也是目前研究和開發(fā)較多的藥用菌[2-3]。段木栽培靈芝是我國傳統(tǒng)栽培靈芝方法[4]，但易出現(xiàn)菌林矛盾問題，制約了靈芝產(chǎn)業(yè)發(fā)展。農(nóng)業(yè)循環(huán)經(jīng)濟(jì)，就是要在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中減少資源與物質(zhì)投入，減少廢棄物排放，將“廢物”轉(zhuǎn)化為“資源”，實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益的“雙贏”[5]。目前，桃樹屑、棉籽殼、桑枝屑、菌草都被用作栽培靈芝培養(yǎng)料[6]。福建省福安市是我國葡萄主產(chǎn)區(qū)之一，每年葡萄園都會產(chǎn)生大量的廢棄物，主要包括夏季與冬季修剪的葡萄新梢（枝條）、葉片以及秋冬的落葉，其中枝條約占30%，其自身物理性狀和基本成分均適合栽培食用菌[7-8]。為此筆者進(jìn)行葡萄枝屑栽培靈芝比較試驗(yàn)，以期為葡萄枝屑栽培靈芝提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試靈芝菌株

試驗(yàn)靈芝菌株及來源見表1。

表1 靈芝菌株名稱及來源

1.2 試驗(yàn)培養(yǎng)基配方

（1）母種培養(yǎng)基配方：葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀1.5 g，瓊脂18 g，10%葡萄枝屑浸出液1 L。

（2）原種培養(yǎng)基、栽培培養(yǎng)基配方：葡萄枝屑63%，木屑27%，麩皮8%，紅糖1%，石膏1%。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 10%葡萄枝浸出液的制備

稱取100 g葡萄枝屑加水1 L，加熱至100℃，煮30 min，取其濾液并用水定容至1 L，標(biāo)記為10%葡萄枝浸出液。

1.3.2 母種培養(yǎng)

按1.2配方稱取葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀1.5 g，瓊脂18 g，10%葡萄枝浸出液1 L。分裝18 mm×180 mm試管，在0.11 MPa滅菌20 min后，擺成斜面，冷卻到室溫后，接入供試靈芝菌株。接種后置于25℃恒溫培養(yǎng)。每個靈芝菌株接10管。

1.3.3 原種的制備

按1.2配方稱取葡萄枝屑10.08 kg，木屑4.32 kg，麩皮1.28 kg，紅糖0.16 kg，石膏0.16 kg，料水比為1∶1.5，攪拌均勻后，用容積為750 mL玻璃瓶裝料，每瓶裝料折干0.2 kg，于126℃滅菌2 h，冷卻后分別接入供試靈芝菌株母種，于25℃恒溫培養(yǎng)。每個靈芝菌株接10瓶。

1.3.4 出芝試驗(yàn)

按1.2配方配料，攪拌均勻，料水比為1∶1.5，用17 cm×35 cm×0.005 cm的聚丙烯袋裝料（每袋料折干350 g），于126℃滅菌2 h，待料溫降至28℃以下時，接入1.3.3原種后置于25℃恒溫培養(yǎng)，當(dāng)菌絲滿袋后，培養(yǎng)料表面有黃色或白色小突起時，按常規(guī)方法進(jìn)行出芝管理[9]。當(dāng)靈芝邊緣變?yōu)辄S色或棕褐色，有少量孢子彈出時，即可采收。采收后烘干至恒重，統(tǒng)計兩潮靈芝產(chǎn)量，并記錄子實(shí)體形態(tài)特征。每個靈芝菌株30袋，3次重復(fù)。

1.4 活性成分檢測方法

委托福建省農(nóng)科院生態(tài)所測定靈芝活性成分，多糖測定采用蒽酮-硫酸檢測法，香草醛-高氯酸比色法測定靈芝三萜。多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)計算公式如下：

其中，m為直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀得的葡萄糖質(zhì)量（μg）；W為靈芝取樣量（g）。

1.5 優(yōu)良菌株的綜合分析

根據(jù)靈芝多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)、總?cè)瀑|(zhì)量分?jǐn)?shù)、生物轉(zhuǎn)化率進(jìn)行綜合分析[10]

綜合評價指數(shù)=（多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)+總?cè)瀑|(zhì)量分?jǐn)?shù)）×生物轉(zhuǎn)化率

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄枝屑栽培的供試靈芝子實(shí)體形態(tài)特征及產(chǎn)量比較

由表2可知，GH8菌株產(chǎn)量最高、生物轉(zhuǎn)化率最高，與其他菌株產(chǎn)量差異極顯著；韓芝H生物轉(zhuǎn)化率最低，產(chǎn)量與其他供試靈芝菌株差異顯著。

表2 供試靈芝形態(tài)特征及產(chǎn)量

2.2 葡萄枝屑栽培的供試靈芝子實(shí)體多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)比較

由表3可知，供試靈芝菌株多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)均達(dá)到2015藥典規(guī)定（不低于0.9%）要求。圓8菌株多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，與武芝、日赤菌株無顯著差異，與紅靈（CK）差異極顯著；GH8菌株多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)與紅靈（CK）無顯著差異，與圓8、美芝菌株差異極顯著；美芝菌株多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)與韓芝H、紅芝（CK）無顯著差異，與其他供試靈芝菌株差異極顯著。

表3 供試靈芝菌株子實(shí)體多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)

2.3 葡萄枝屑栽培的供試靈芝子實(shí)體三萜質(zhì)量分?jǐn)?shù)比較

由表4可知，供試靈芝子實(shí)體三萜質(zhì)量分?jǐn)?shù)均符合藥典2015規(guī)定（不低于0.5%）要求。GH8菌株三萜質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，與紅芝（CK）、韓芝H無顯著差異，與其他供試靈芝菌株差異極顯著；圓8、武芝、盆芝、美芝、日赤與紅芝（CK）三萜質(zhì)量分?jǐn)?shù)差異極顯著；日赤三萜質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低，與其他供試靈芝菌株差異極顯著。

表4 供試靈芝子實(shí)體三萜質(zhì)量分?jǐn)?shù)

2.4 供試靈芝菌株的綜合評價結(jié)果

由表5可以看出，以三萜、多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)，生物轉(zhuǎn)化率等指標(biāo)綜合評價，GH菌株8綜合評價指數(shù)最高，為25.7，與其他7個靈芝菌株差異極顯著，比紅芝（CK）高出51.2%；日赤綜合評價指數(shù)最低，為14.2，與其他7個靈芝菌株差異極顯著，比紅芝（CK）低16.5%；美芝、盆芝、韓芝H與紅芝（CK）差異不顯著。

表5 供試靈芝菌株綜合評分

3 小結(jié)與討論

一個好的靈芝品種（菌株）不能只看單一性狀而要綜合考慮各項(xiàng)指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果表明，GH8菌株產(chǎn)量、生物轉(zhuǎn)化率最高，與紅芝（CK）差異極顯著；圓8菌株子實(shí)體多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，與紅芝（CK）差異極顯著；GH8菌株子實(shí)體三萜質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，與紅芝（CK）差異不顯著。GH8菌株綜合評價指數(shù)與其他7個供試靈芝菌株差異極顯著，且活性成分多糖和三萜質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別超出國家藥典標(biāo)準(zhǔn)75.6%、174%，可作為葡萄枝屑栽培的優(yōu)良靈芝菌株。

葡萄枝屑中含有白藜蘆醇[11]，用葡萄枝屑栽培的靈芝是否也含有該活性成分有待進(jìn)一步研究。

靈芝菌株對葡萄枝浸出液的耐受力有差異，須不斷地馴化培養(yǎng)以提高其適應(yīng)性，降低栽培靈芝對對木屑的依賴。