HPV1618型E6蛋白和PKRp-PKR在宮頸病變的表達(dá)及意義

王喜鳳

（盤錦市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，遼寧 盤錦124000）

宮頸癌是發(fā)病率較高的一種感染性疾病，該疾病的發(fā)生與高危型人乳頭瘤病毒感染密切相關(guān)。有研究顯示，隨著宮頸病變嚴(yán)重程度增加，人乳頭瘤病毒感染檢出率也隨之提高，宮頸癌患者人乳頭瘤病毒感染率接近100%[1]。致瘤病毒會(huì)突破機(jī)體抵抗病毒的防御機(jī)制，進(jìn)而引起病毒的持續(xù)感染，其在宮頸病變的演進(jìn)過(guò)程中具有重要作用。干擾素是機(jī)體防御的重要分子，可有效誘導(dǎo)雙鏈RNA激活蛋白酶R，其不僅在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和凋亡等具有重要作用，在抗腫瘤、抵御病毒感染中也發(fā)揮重要的生物學(xué)效應(yīng)[2]。基于此，本研究選取2018年2月至2019年10月本院收治的62例宮頸癌患者、105例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變患者以及20例宮頸健康者作為研究對(duì)象，比較HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R以及磷酸化型蛋白激酶R在宮頸病變的表達(dá)，并探討在宮頸病變發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年2月至2019年10月在本院就診的62例宮頸癌患者（甲組）、105例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變患者（CINⅠ33例、CINⅡ37例、CINⅢ35例，乙組）以及20例宮頸健康者（丙組）作為研究對(duì)象。甲組年齡22～68歲，平均（51.02±12.32）歲；腺癌11例，鱗癌51例；細(xì)胞分化程度：高分化27例，中低分化35例；國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)聯(lián)盟（FIGO）分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期32例，Ⅲ期15例，Ⅳ期4例。乙組年齡24～75歲，平均（50.63±10.20）歲；CINⅠ33例，CINⅡ37例，CINⅢ35例。丙組年齡22～72歲，平均（51.63±11.54）歲。3組年齡等臨床資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。所有研究對(duì)象均對(duì)本研究知情同意，并自愿簽署知情同意書。本研究已通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者經(jīng)術(shù)后病理診斷均確診；年齡＞18歲；意識(shí)清晰且無(wú)交流障礙；依從性高。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤疾?。话橛欣夏臧V呆等精神性疾?。蝗焉锛安溉槠谂?。

1.2 方法 取3組宮頸組織作為活檢組織標(biāo)本，將標(biāo)本連續(xù)切片，厚度為4 μm，載玻片經(jīng)APES防脫片膠處理后將其置于恒溫60℃烤箱中烘烤4～6 h。組織切片脫蠟處理后采取高溫高壓抗原修復(fù)，根據(jù)免疫組化染色試劑盒中的操作說(shuō)明書進(jìn)行操作，TBS代替一抗作為空白組對(duì)照，一抗工作液濃度為1∶100。

1.3 觀察指標(biāo) 比較3組HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R、磷酸化型蛋白激酶R表達(dá)情況。采用免疫組化法檢測(cè)，400倍光鏡下隨機(jī)選擇8個(gè)視野，各個(gè)視野均觀察100個(gè)細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性細(xì)胞并計(jì)算平均值。將陽(yáng)性細(xì)胞顯色輕度以及染色體數(shù)進(jìn)行分級(jí)：未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞不計(jì)分，陽(yáng)性細(xì)胞占比＜25%計(jì)1分，陽(yáng)性細(xì)胞占比＜50%計(jì)2分，陽(yáng)性細(xì)胞占比＜75%計(jì)3分，陽(yáng)性細(xì)胞占比≥75%計(jì)4分；無(wú)著色計(jì)0分，淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。2項(xiàng)分?jǐn)?shù)相加，0、1分為（－），2、3分為（＋），4、5分為（＋＋），6、7分為（＋＋＋），陽(yáng)性為（＋～＋＋＋）[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R以及磷酸化型蛋白激酶R表達(dá)比較 甲組HPV1618型E6蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于乙組（CINⅠ）和丙組（P＜0.05）。甲組蛋白激酶R陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于乙組（CINⅠ、CINⅡ）和丙組（P＜0.05）。3組磷酸化型蛋白激酶R陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1 3組HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R以及磷酸化型蛋白激酶R表達(dá)情況比較[n（%）]Table 1 Comparison of the expression of HPV1618 E6 protein,protein kinase R and phosphorylated protein kinase R among three groups[n(%)]

2.2 HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R以及磷酸化型蛋白激酶R表達(dá)與宮頸癌預(yù)后的關(guān)系 病情進(jìn)展與臨床分期顯著相關(guān)（P＜0.05）。甲組進(jìn)展與無(wú)進(jìn)展患者HPV1618型E6蛋白、磷酸化型蛋白激酶R陽(yáng)性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而蛋白激酶R陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，宮頸癌病情進(jìn)展與E6蛋白、磷酸化型蛋白激酶R陽(yáng)性表達(dá)率相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

人乳頭狀瘤病毒是一種常見(jiàn)致瘤病毒，具有較強(qiáng)的宿主和組織特異性，該病毒也是宮頸病變檢出率最高的病毒之一，可突破機(jī)體的抗病毒防御機(jī)制，在宮頸病變發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中具有重要意義[4-5]。有研究[6]顯示，高危型人乳頭狀瘤病毒持續(xù)感染是CINⅠ發(fā)展為CINⅢ甚至宮頸浸潤(rùn)癌的重要因素。有數(shù)據(jù)顯示，約4.3%單一高危型人乳頭狀瘤病毒感染陽(yáng)性女性可在感染的4年內(nèi)發(fā)展為CINⅢ，感染10年內(nèi)發(fā)展為CINⅢ發(fā)生率＞7%，但也不可忽視病毒感染陰性女性發(fā)展為CINⅢ的風(fēng)險(xiǎn)[7]。目前還未明確宮頸癌發(fā)生的分子機(jī)制，單一高危型人乳頭狀瘤病毒持續(xù)感染引發(fā)宮頸癌可能是通過(guò)干擾某些抑癌因子或致癌因子，導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)克隆永生化，進(jìn)而出現(xiàn)癌變[8]。本研究結(jié)果顯示，E6蛋白、蛋白激酶R陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸病變級(jí)別呈正相關(guān)（P＜0.05）。宮頸癌病情進(jìn)展與E6蛋白、磷酸化型蛋白激酶R陽(yáng)性表達(dá)率相關(guān)（P＜0.05）。蛋白激酶R對(duì)機(jī)體抵抗病毒感染具有重要意義，被激活的蛋白激酶R可通過(guò)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)完全抑制蛋白合成。誘導(dǎo)感染細(xì)胞凋亡、抑制蛋白合成是蛋白激酶R抑制病毒復(fù)制的主要機(jī)制[9-10]。

甲組蛋白激酶R陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于磷酸化型蛋白激酶R（P＜0.05），說(shuō)明高級(jí)別病變中存在蛋白激酶R激活障礙。E6蛋白可拮抗蛋白激酶R誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡以及蛋白合成的抑制，在一定程度上減弱了凋亡基因依賴于EIF2α途徑的促凋亡作用[11]。病變細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞因失去磷酸化型蛋白激酶R對(duì)其負(fù)調(diào)控作用，病變細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，使病情由低級(jí)別CIN病變轉(zhuǎn)至高級(jí)CIN，最終發(fā)展為宮頸癌[12-13]。

綜上所述，HPV1618感染可阻礙蛋白激酶R激活，突破其防御機(jī)制，在宮頸癌疾病發(fā)展過(guò)程中意義重大，不利于疾病預(yù)后，磷酸化型蛋白激酶R可抑制疾病進(jìn)展，改善預(yù)后。