美國國家禽流感監(jiān)測計劃——第二部分：監(jiān)測計劃、數(shù)據(jù)管理和分析（一）

譯校│翟新驗 劉林青（中國動物疫病預(yù)防控制中心）

王慧強(qiáng)（北京市動物疫病預(yù)防控制中心）

NAISS、AI監(jiān)測是通過多種渠道進(jìn)行的，主要目標(biāo)是監(jiān)測不同種類的易感禽類。本部分主要講述不同的監(jiān)測對象和相應(yīng)的監(jiān)測類型。NAISS的組成主要分為以下四類：國家家禽改良計劃（NPIP）；活禽交易市場體系（LBMS）LPAIH5和H7的預(yù)防控制；庭院養(yǎng)殖家禽；遷徙候鳥和濱鳥。

動植物衛(wèi)生檢疫局（APHIS）主要依靠各州和一些商業(yè)項目對國內(nèi)家禽進(jìn)行監(jiān)測，努力去獲得更多的信息，這些信息是各個州對AI的監(jiān)測信息，主要是通過聯(lián)盟、合伙企業(yè)和政府機(jī)構(gòu)、私人企業(yè)合作獲得。所有這些活動都會產(chǎn)生有效的監(jiān)測數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)可能來自結(jié)構(gòu)化的群體調(diào)查或是非隨機(jī)的數(shù)據(jù)來源。

一、美國家禽改良計劃（NPIP）

1.蛋雞、肉雞和火雞。AI主動實驗室監(jiān)測是在NPIP要求下進(jìn)行的［根據(jù)聯(lián)邦行政法規(guī)（CFR），第9卷，第145部分條款規(guī)定］。這個計劃提出了一個“美國禽流感凈化方案”，分別用于蛋雞和肉雞AI凈化，對于火雞，該計劃對養(yǎng)殖戶有獎勵措施。這些主動監(jiān)測目的是為雛雞、幼禽和種蛋用于州際和出口貿(mào)易提供合格證明。這個計劃明確了各州、禽場、孵化場和經(jīng)銷商要達(dá)到計劃中所規(guī)定的疫病控制標(biāo)準(zhǔn)。因此，消費(fèi)者可以買到無特定病原體的家禽或者在適當(dāng)疫病控制條件下飼養(yǎng)的家禽。NPIP工作人員每年都會公布參與此計劃的成員，并將成員名單提交給美國動物衛(wèi)生協(xié)會（UAHA）。

對于原種家禽，在4月齡對每個禽群抽取30羽進(jìn)行檢測，然后間隔90天再檢測一次。對于擴(kuò)繁家禽，4月齡對每個禽群抽取30羽進(jìn)行檢測，并且間隔180天再檢測。達(dá)到計劃規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，實現(xiàn)禽群AI凈化或AIH5/H7凈化狀態(tài)時，政府予以獎勵。每個禽群抽取30羽家禽，是在95%置信度下，流行率未達(dá)到10%或更高情況（Cannon和Roe，1982）。假定試驗十分敏感，則隨機(jī)選取家禽采樣，病原體在家禽中分布也是隨機(jī)的，檢測方法和監(jiān)測手段將在下面數(shù)據(jù)來源部分介紹。

2.水禽、展覽禽和獵鳥群。CFR第9卷第145.53部分提及對用于放生或者展覽用途的飼養(yǎng)家禽及獵鳥LPAI監(jiān)測，同樣也屬于“H5/H7禽流感凈化方案”中的對象。對于水禽、展覽禽和獵鳥群，在4月齡時對每個禽群抽取30羽進(jìn)行檢測，間隔90天再檢測。達(dá)到計劃規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，實現(xiàn)禽群AIH5/H7凈化狀態(tài)時，政府予以獎勵。每個禽群抽取30羽家禽，是在95%置信度下，流行率未達(dá)到10%或更高情況（Cannon和Roe，1982）。假定試驗十分敏感，則在家禽中隨機(jī)采樣。

NPIP根據(jù)收到的公眾意見合理添加關(guān)于水禽、展覽禽和獵鳥群AI檢測條款，于2006年9月第38屆NPIP會議上通過補(bǔ)充此條款，給出對象定義如下。

飼養(yǎng)目的是放生的高地獵鳥：例如雉雞、鵪鶉、鷓鴣，飼養(yǎng)在一定區(qū)域，飼養(yǎng)不是為了繁殖。

飼養(yǎng)目的是放生的水禽：飼養(yǎng)在保護(hù)區(qū)內(nèi)的水禽，飼養(yǎng)不是為了繁殖。

商業(yè)水禽或高地獵鳥：例如馴化的鴨、鵝、雉雞、鵪鶉、鷓鴣等，飼養(yǎng)在一定區(qū)域，飼養(yǎng)目的是生產(chǎn)肉產(chǎn)品供人類消費(fèi)。

NPIP增加對用于放生的高地獵鳥和水禽、商業(yè)水禽和高地獵鳥實行“H5/H7禽流感監(jiān)測”策略。該策略一旦確定，將相關(guān)規(guī)定和監(jiān)測程序列入CFR第9卷第146.53部分。對于飼養(yǎng)目的是放生的養(yǎng)殖場，每90天必須對禽群抽取30羽進(jìn)行H5/H7AI檢測。對于商業(yè)水禽和高地獵鳥，屠宰場必須對該批次抽取11羽家禽進(jìn)行H5/H7AI檢測，也可在屠宰前21日內(nèi)抽取11份樣品進(jìn)行H5/H7禽流感檢測，抑或者執(zhí)行經(jīng)過州政府機(jī)構(gòu)和APHIS批準(zhǔn)的持續(xù)性主動和被動監(jiān)測計劃。

在發(fā)布這些規(guī)定之前，2006年財年（FY），APHIS和部分州政府達(dá)成協(xié)議，開始對用于放生的高地獵鳥（NPIPCA）和用于放生的水禽（LBMSCA）進(jìn)行監(jiān)測。為了能接觸到這類禽群，州農(nóng)業(yè)部門與有狩獵野鳥資格的野生動物保護(hù)機(jī)構(gòu)、獵鳥農(nóng)場及美國北部獵鳥協(xié)會將進(jìn)行廣泛而緊密合作，根據(jù)合作協(xié)議，每個季度向州官方機(jī)構(gòu)報告一次監(jiān)測結(jié)果。

3.商業(yè)肉雞和蛋雞。根據(jù)2006年9月26日公布的臨時規(guī)則，NPIP已經(jīng)修改相關(guān)規(guī)定，建立了商業(yè)家禽防控LPAIH5/H7自愿性程序，在CFR第9卷增加146條款。參加新的NPIP提倡的防控LPAIH5/H7行動的家禽行業(yè)仍然是自愿的，防控程序包含3個方面：LPAIH5/H7主動監(jiān)測、被動監(jiān)測、應(yīng)急響應(yīng)與控制方案。

計劃中提及的主動監(jiān)測（CFR第9卷第146部分，LPAIH5/H7自愿防控方案）包括對商業(yè)蛋雞、肉雞和產(chǎn)肉火雞的監(jiān)測。商業(yè)蛋雞，每12個月一次對每個禽群檢測11羽家禽或11枚雞蛋，或者對于存欄超過75000羽家禽的養(yǎng)殖場，在禽群處理前30天對每個禽群檢測11羽家禽或11枚雞蛋。商業(yè)肉雞，在屠宰時每批次檢測11羽肉雞，對于每個星期屠宰超過200000羽肉雞的屠宰場，在肉雞屠宰前21天內(nèi)檢測11份樣品。商業(yè)肉火雞，對年屠宰量超過200萬羽的聯(lián)邦檢疫的屠宰場，每月從超過10周齡的火雞群中抽取有呼吸道癥狀的60羽火雞進(jìn)行檢測。達(dá)到計劃H5/H7監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)，給予獎勵。每個禽群抽取11羽家禽，是在95%置信度下，流行率未達(dá)到25%甚至更高情況（Cannon和Roe，1982）。假定試驗十分敏感，隨機(jī)選取家禽采樣，病原體在家禽中分布也是隨機(jī)的。檢測策略和監(jiān)管將在以下數(shù)據(jù)來源討論部分介紹。

上面提到的NPIP 法規(guī)公布之前，全國肉雞理事會自愿發(fā)起了一個行動。目前，37家企業(yè)在屠宰前兩周內(nèi)采樣并檢測所有肉雞。這大約可以代表美國98%肉雞生產(chǎn)量。隨著NPIPH5/H7防控計劃的發(fā)布，公司在NPIP的指導(dǎo)下積極參與，將大大提高NPIP計劃在國際的影響力。希望至少有90%符合計劃規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)的商業(yè)養(yǎng)殖企業(yè)會參與到計劃中。種禽場參與率與此接近，其中肉雞和火雞的公司100%參與到計劃中。按照計劃的監(jiān)測要求，只要有90%的參與率就可以完成計劃目標(biāo)。

4.數(shù)據(jù)來源。48個州都建立了NPIP計劃，因為阿拉斯加和夏威夷沒有大型商業(yè)養(yǎng)殖場，所以沒有NPIP計劃。各個州對試驗數(shù)據(jù)的管理是獨(dú)立的，是自愿參與到NPIP計劃的。

所有NPIP 的檢測工作都要在NPIP官方授權(quán)的實驗室進(jìn)行，可以是州實驗室或私人/企業(yè)實驗室，所有NPIP官方授權(quán)實驗室都要向州官方授權(quán)機(jī)構(gòu)報告監(jiān)測數(shù)據(jù)。USDANVSL人員需立即向州和聯(lián)邦的監(jiān)管獸醫(yī)官員報告發(fā)現(xiàn)的NAI陽性結(jié)果。

各州收到NPIP合作資金可用于向APHIS獸醫(yī)局地方辦公室提交季度LPAI報告。這份報告匯總某一NPIP項目的監(jiān)測數(shù)據(jù)（例如：參與監(jiān)測的蛋雞數(shù)量；肉雞和火雞屠宰場；蛋用和肉用種禽群；火雞繁育群；水禽、展覽禽和高地獵鳥；采樣和檢測樣品的數(shù)量；檢疫數(shù)量）。各州官方機(jī)構(gòu)每年會向國家NPIP辦公室報告檢測數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)由APHIS數(shù)據(jù)收集系統(tǒng)保存?，F(xiàn)在，參與這一方案的州官方機(jī)構(gòu)也可通過NPIP方案保留數(shù)據(jù)。APHIS流行病學(xué)和動物衛(wèi)生中心（CEAH）人員為NPIP開發(fā)了一個模塊促進(jìn)AI監(jiān)測數(shù)據(jù)的整合。

目前，NPIP并沒有提供整個家禽養(yǎng)殖業(yè)養(yǎng)殖數(shù)量的準(zhǔn)確數(shù)字。因此，很難評估參與這個計劃的家禽數(shù)目的比例，同樣亦很難確認(rèn)這些數(shù)據(jù)在整個國內(nèi)家禽行業(yè)的代表性。另外，我們只是向國家NPIP每年報告一次數(shù)據(jù)，NPIP員工每年在當(dāng)?shù)豊PIP數(shù)據(jù)庫中輸入新數(shù)據(jù)。由于可利用資源的局限性和各州上報國家項目辦公室的數(shù)據(jù)延遲，通過這個數(shù)據(jù)收集系統(tǒng)及時評估監(jiān)測數(shù)據(jù)是比較困難的。上面提到新開發(fā)的NPIP數(shù)據(jù)收集系統(tǒng)模塊，通過改進(jìn)數(shù)據(jù)收集過程的時效性和可靠性，可實現(xiàn)NPIP報告系統(tǒng)的信息化，為授權(quán)的項目參與者、州機(jī)構(gòu)和APHIS提供在線工具。由于一些數(shù)據(jù)的敏感性將保留在NPIP項目中，選擇一些概要性數(shù)據(jù)上傳至家禽衛(wèi)生監(jiān)測數(shù)據(jù)庫（AVHS）。來自NPIP報告系統(tǒng)的其他數(shù)據(jù)經(jīng)過授權(quán)的官方機(jī)構(gòu)評估和批準(zhǔn)后才會轉(zhuǎn)發(fā)AVHS。

由NPIP 授權(quán)實驗室檢測獲得的數(shù)據(jù)會提供給AVHS作為概要數(shù)據(jù)，由NAHLN授權(quán)實驗室檢測獲得的數(shù)據(jù)是動物個體層面的，這些提供給授權(quán)參與者的特定數(shù)據(jù)是不同的，這主要取決于他們在國家禽流感監(jiān)測計劃（NAISS）中扮演的角色。

所有H5/H7亞型假定陽性的后續(xù)調(diào)查數(shù)據(jù)都會輸入到APHIS應(yīng)急管理響應(yīng)系統(tǒng)（EMRS）。任何疑似HPAI病例數(shù)據(jù)都將錄入到EMRS，而不是AVHS中。

5.數(shù)據(jù)分析和解釋。NPIP監(jiān)測策略在有限的檢測和設(shè)定樣本量的基礎(chǔ)上是有效的。然而，檢測抗原的試驗程序也只是提供禽類的排毒時間（一般是暴露后的7～14日）。檢測抗體血清學(xué)試驗可提供被檢測禽類感染后數(shù)周到數(shù)月的抗體水平，而不僅是免疫響應(yīng)發(fā)生最近的7～14天。檢測程序的局限性，可以通過以下方式解決，病毒感染家禽可循環(huán)傳播一段時間，所以血清抗體陽性和抗原陽性禽都可檢出。

實驗室監(jiān)測采樣方法對于監(jiān)測HPAI實用性不強(qiáng)，因為檢測間隔時間要幾個月，但通過觀察監(jiān)視家禽中的高死亡率和發(fā)病率一般就能發(fā)現(xiàn)HPAI的存在。低致病性NAI病毒一般不引起明顯的臨床癥狀，所以只能選擇實驗室監(jiān)測手段。通常認(rèn)為，LPAI對家禽行業(yè)和公共衛(wèi)生造成的直接影響較小，監(jiān)測策略需集中檢測家禽中有可能會突變成為HPAI的流感毒株。

表1 活禽交易市場采樣方法

對于一些只引起輕微臨床癥狀的HPAI或低致病性H5/H7病毒，實驗室檢測是惟一有效的手段。如果檢測疫病流行率高（一般禽群達(dá)到25%），實驗室主動監(jiān)測對發(fā)現(xiàn)疫病有很高的可信度。但是檢測窗口期和采樣間隔是一樣的，每180天采集一次樣品，3個月內(nèi)的時間段就不能持續(xù)檢測，因此采樣時間間隔應(yīng)少于3個月。

由于大部分小規(guī)模高價值的養(yǎng)殖場不在NPIP采樣計劃內(nèi)，很少有關(guān)于這部分養(yǎng)殖場的實驗室監(jiān)測信息。主要是通過被動監(jiān)測手段（向診斷實驗室或獸醫(yī)人員送檢死禽）和主動的觀察監(jiān)視手段，相信這些養(yǎng)殖場中大部分（不是全部）都會每天觀察禽群發(fā)病情況。因為禽群的高價值，養(yǎng)殖者很可能會主動尋求幫助，所以對HPAI發(fā)現(xiàn)窗口期和大型養(yǎng)殖企業(yè)是一樣的。但是這類養(yǎng)殖場的生物安全管理措施以及對AI預(yù)防控制就沒有大型養(yǎng)殖企業(yè)那么規(guī)范。很多時候，這些養(yǎng)殖場可能會進(jìn)行戶外飼養(yǎng)，在某些場的家禽甚至可以接觸到水禽或遷徙野鳥。盡管國家AI監(jiān)測計劃是以產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)價值為導(dǎo)向，樣品采集和病例報告都是自愿的，但檢測出陽性NAIH5/H7陽性的實驗室需將樣品遞交至NVSL做進(jìn)一步確診。

部分小規(guī)模高價值養(yǎng)殖場飼養(yǎng)水禽（例如鴨和鵝），這類家禽感染AI或亞洲HPAI后，一般不會表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，而且其死亡率也比其他家禽低（Hulse-Post等，2005；Sturm-Ramirez等，2005）。這將會增加鴨和鵝感染AI的風(fēng)險，降低了被動監(jiān)測和主動觀察監(jiān)測的有效性。所以必須要采用主動的實驗室監(jiān)測手段對這些水禽進(jìn)行監(jiān)測，以期早發(fā)現(xiàn)亞洲HPAI病毒的存在（Tumpey等，2002）。

應(yīng)用當(dāng)前的檢測手段可以發(fā)現(xiàn)小規(guī)模高價值養(yǎng)殖場中發(fā)生的HPAIH5N1，但最糟的情況是，在檢測發(fā)現(xiàn)之前，AI疫情有可能會持續(xù)幾個星期或者傳播給多種家禽。因此，加強(qiáng)監(jiān)測有利于及早發(fā)現(xiàn)疫情，減少損失。APHIS獸醫(yī)局現(xiàn)在采用的監(jiān)測，類似于飼養(yǎng)高密度小規(guī)模高價值生產(chǎn)群。當(dāng)?shù)仫曫B(yǎng)密度高的地區(qū)，一旦選定了飼養(yǎng)密度高的小型高價值養(yǎng)殖場，就將會對這些養(yǎng)殖場采取主動觀察監(jiān)測和實驗室主動監(jiān)測手段。

二、LBMSLPAIH5和H7預(yù)防控制

對LBMS的監(jiān)測主要涉及三個方面：生產(chǎn)環(huán)節(jié)、配送系統(tǒng)和活禽交易市場。多采用AGID和RRT-PCR方法檢測生產(chǎn)環(huán)節(jié)禽群。RRT-PCR或病原分離方法用于評估從配送系統(tǒng)和市場環(huán)節(jié)收集的樣品，病毒分離用于環(huán)境樣品，見表1。

環(huán)境樣品包括來自地板、排水溝、屠宰區(qū)和安置家禽地方的棉拭子。各州依據(jù)APHIS獸醫(yī)局項目標(biāo)準(zhǔn)建立采樣方案。目前，共有31個州簽訂了參與LPAI-LBMS監(jiān)測項目的合作協(xié)議。

1.數(shù)據(jù)來源。目前已有31個州建立了自愿參加的H5/H7LPAI-LBMS監(jiān)測項目，已延長至2007年財年，類似于自愿參加NPIPH5/H7監(jiān)測項目，各個州收集數(shù)據(jù)并保存檢測結(jié)果，每季度向USDAAPHIS地區(qū)辦公室提供總結(jié)性報告。隨后這些報告就會錄入到保存地方數(shù)據(jù)的主系統(tǒng)中，然后再傳入到AVHS中，USDA地區(qū)辦公室為LBMS項目保存這些數(shù)據(jù)。報告的效率有差異，有的是紙質(zhì)版報告，有的是電子版報告。最近，開發(fā)了電子監(jiān)測報告工具，并要求每個州向地區(qū)辦公室報告時使用。

2.數(shù)據(jù)分析和解釋。1987年以后，對LBMS進(jìn)行了廣泛的監(jiān)測以發(fā)現(xiàn)流行的病原，2003年對監(jiān)測行動進(jìn)行了總結(jié)（Senne等，2003）。1994年之后，每年從美國東北部活禽交易市場采集1457～8120份氣管和泄殖腔拭子進(jìn)行檢測并分離病毒。1994——2003年，美國東北部活禽市場每年可以分離到30～808株H7N2AI病毒（Senne等，2003）。另一份是關(guān)于紐約市場和新澤西市場的檢測報告，AI檢出率分別達(dá)60%（49/81）和43%（12/28）（Henzler等，2009）。

2004年美國國家動物衛(wèi)生監(jiān)測系統(tǒng)（NAHMS）關(guān)于LBMS生物安全管理措施的報告發(fā)現(xiàn)，美國北部活禽市場的監(jiān)測活動更加頻繁；2004年3月至2005年3月，98.4%的市場至少已經(jīng)檢測過一次，86.4%的市場至少檢測過4次。在美國南部，約有83.1%的市場至少已經(jīng)檢測過一次，18%的市場至少檢測過4次。那些每年只檢測一次的市場未檢出H5/H7AI病毒，美國北部市場檢測出LPAIH5/H7場點(diǎn)陽性率為14.6%，南部市場全年沒有檢測出H5/H7陽性。

活禽交易市場的監(jiān)測結(jié)果表明，通過監(jiān)測可檢測出H5/H7AI病毒，但并不是每次AI暴發(fā)都能檢測到。數(shù)據(jù)同樣表明，每年對市場進(jìn)行一次監(jiān)測很難發(fā)現(xiàn)有感染的，但每年若能進(jìn)行多次檢測則能檢測到病毒。這說明市場每年要進(jìn)行至少兩次以上的監(jiān)測，統(tǒng)一的采樣頻次標(biāo)準(zhǔn)有利于及時發(fā)現(xiàn)活禽市場LPAIH5/H7。參與州至少每3個月（甚至更頻繁）對銷售商、零售市場檢測一次，向市場供應(yīng)禽只的飼養(yǎng)場每個月都要檢測。

3.對LBMS其他方面的監(jiān)測。根據(jù)新實施的合作協(xié)議，要求每個州向USDA作一次關(guān)于整個活禽交易市場各個環(huán)節(jié)的季度報告，包括接受檢查和檢測的生產(chǎn)單位數(shù)量、銷售單位數(shù)量和市場單元數(shù)量，按檢測類別及群體，估算要檢測的場點(diǎn)。這樣的采樣策略能夠檢測到大部分存在的AI病毒，但由于當(dāng)前監(jiān)測平臺不夠完善，還未能及時評估數(shù)據(jù)。所有經(jīng)實驗室檢測為陽性的NAI，NVSL都需要立即向州和聯(lián)邦監(jiān)管官員匯報，然后由USDA上報OIE。