新生仔豬丁型冠狀病毒腹瀉病例診斷報(bào)告

陳慧婷，徐翠，黎家祥，花象柏

（南昌德?tīng)査锛夹g(shù)有限公司，江西南昌330013)

豬丁型冠狀病毒又稱δ（德?tīng)査┕跔畈《荆≒DCoV),該病毒于2012年由香港大學(xué)Woo等從169份豬糞樣品中檢出，檢出率約為10.1%,美國(guó)于2014年檢出[1]。2015年，從江西暴發(fā)的新生仔豬腹瀉中，也檢出了PDCoV[2]。2021年2月，從江西省南昌市新建區(qū)西山鎮(zhèn)某養(yǎng)豬戶所送的新生仔豬腹瀉病料檢測(cè)出PDCoV為陽(yáng)性，豬流行性腹瀉病毒（PEDV)呈陰性，從而確定該養(yǎng)豬戶新生仔豬腹瀉由PDCoV引起，現(xiàn)診療情況報(bào)告如下。

1 發(fā)病情況

該養(yǎng)豬戶飼養(yǎng)母豬100頭左右，其中生產(chǎn)母豬60余頭。從2020年7月份開(kāi)始，持續(xù)出現(xiàn)新生仔豬腹瀉，先后30窩仔豬發(fā)病。新生仔豬腹瀉多從產(chǎn)后3～4日齡開(kāi)始，7d以內(nèi)仔豬發(fā)生腹瀉的多以死亡為轉(zhuǎn)歸，耐過(guò)7d不死的則可存活下來(lái)，每窩殘存仔豬數(shù)0～4頭不等。當(dāng)時(shí)未作實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，認(rèn)為由PEDV引起，先后給母豬免疫過(guò)豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活苗和豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉和豬輪狀病毒三聯(lián)活疫苗各2次，新生仔豬腹瀉發(fā)病沒(méi)有減少。

2 臨床癥狀

新生仔豬于3～4日齡突然發(fā)病，先嘔吐，后水樣腹瀉，發(fā)病豬經(jīng)過(guò)3～4d脫水死亡。前期體溫不升高，后期有些下降。

3 剖檢變化

剖檢2頭死亡仔豬，胃內(nèi)有大量新鮮乳白色凝固乳汁，腸壁變薄，腸內(nèi)有多量淡黃色米湯樣內(nèi)容物，其余臟器無(wú)肉眼可見(jiàn)變化。

4 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

4.1 檢測(cè)樣品采集

2頭剖檢仔豬均取下列病料。一是內(nèi)臟病料，包括扁桃體、肺、脾、肝、腎、和肺門(mén)、肝門(mén)、腹股溝和腸系膜等部位的淋巴結(jié)等組織少許，用作發(fā)病誘因檢測(cè)；由于剖檢病例看不到豬瘟和豬偽狂犬病的病變，故只作豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）的檢測(cè)。二是結(jié)扎5～10cm的小腸一段，用作新生豬最常見(jiàn)的兩個(gè)發(fā)病原因PEDV和PDCoV的檢測(cè)。

4.2 實(shí)驗(yàn)試劑

RNA提取試劑盒來(lái)自TAKARA公司，反轉(zhuǎn)錄試劑盒及其他試劑來(lái)自天根生化科技（北京）有限公司。

4.3 實(shí)驗(yàn)方法

按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，先從采集的樣品提取RNA，再以RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增cDNA，然后以cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最后用PCR產(chǎn)物進(jìn)行核酸電泳，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

內(nèi)臟病料相關(guān)病原PRRSV和腸道病料相關(guān)病原PEDV及PDCoV的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1：

表1 內(nèi)臟病料檢測(cè)結(jié)果

5 討論

我國(guó)自2010年暴發(fā)新生仔豬腹瀉以來(lái)，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。關(guān)于引起新生仔豬腹瀉的病原研究，已確定主要病原為PEDV,其次為PDCoV。但是，由PEDV和PDCoV這兩種病原引起的新生仔豬腹瀉，在流行病學(xué)、臨床癥狀和剖檢病變等方面都極為相似，無(wú)法在臨床上對(duì)兩者進(jìn)行鑒別。本次發(fā)病的新生仔豬腹瀉，一直當(dāng)作PED來(lái)處理，發(fā)現(xiàn)不奏效后，才送病料至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)所送兩個(gè)病例的檢測(cè)結(jié)果表明，PEDV均為陰性，PDCoV均為陽(yáng)性；在發(fā)病誘因上，PRRSV的檢測(cè)結(jié)果也為陰性；故可確定本次新生仔豬腹瀉，由單一PDCoV病原引起。

美國(guó)于2014年暴發(fā)新生仔豬腹瀉，在腹瀉樣品中PDCoV的檢出率達(dá)30%[2]。賀冬生等報(bào)道[3]，華南某豬場(chǎng)有母豬2 000頭，3～7日齡新生豬發(fā)生腹瀉，發(fā)病率90%,死淘率90%以上，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒、PEDV和豬輪狀病毒等均為陰性，PDCoV為陽(yáng)性，從而確定該豬場(chǎng)的新生仔豬腹瀉由PDCoV引起。D.Song等報(bào)道[2]，在中國(guó)江西暴發(fā)的新生仔豬腹瀉中檢出PDCoV,從2012年11月到2015年3月，所收集的新生仔豬腹瀉樣品中，PDCoV的單一感染率為33.71%。逄鳳嬌等報(bào)道[4]，華東地區(qū)豬場(chǎng)2014～2015年收集的43份腹瀉樣品檢測(cè)，PDCoV陽(yáng)性率為18.60%。陳建飛等分離出國(guó)內(nèi)首株丁型冠狀病毒[5]。由此看來(lái)，PDCoV確成為引起新生仔豬腹瀉的重要病原之一。鑒于目前尚無(wú)控制PDCoV的疫苗，故開(kāi)發(fā)防控PDCoV所致新生仔豬腹瀉的疫苗迫在眉睫。