敵敵畏合并乙醇中毒死亡毒物分析鑒定1例

李標(biāo)，韓雷鳴

摘要：目的：通過敵敵畏合并乙醇中毒死亡案例分析，為司法鑒定人在其他案件檢材鑒定過程中提供幫助。方法：通過頂空氣相色譜儀檢測血液中乙醇含量，利用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測出血液和胃內(nèi)容物中敵敵畏，提供了相應(yīng)的檢測方法，此方法準(zhǔn)確、快捷，以供法醫(yī)毒物鑒定人員交流使用。結(jié)果：本文在送檢檢材中檢出乙醇和敵敵畏成分。結(jié)論：死者的死亡原因符合飲酒后口服敵敵畏殺蟲劑合并乙醇中毒死亡。

關(guān)鍵詞：敵敵畏;乙醇;液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀;頂空氣相色譜儀

1案例資料

1.1 簡要案情

李某，男。2021年1月18日被發(fā)現(xiàn)死于其出租屋內(nèi)，現(xiàn)場有一空白藥瓶，瓶內(nèi)有刺激性農(nóng)藥氣味。經(jīng)法醫(yī)現(xiàn)場分別提取死者胃內(nèi)容物及心血送檢我中心進(jìn)行毒物分析。

1.2 材料與方法

1.2.1 儀器與試劑

AB SCIEX TRIPLE QUAD 4500質(zhì)譜儀，美國AB SCIEX公司;Agilent 7697A-7890B頂空氣相色譜儀，美國Agilent Technologies公司;單道可調(diào)移液器，德國BRANG;TG1850-WS高速離心機，上海盧湘儀離心機儀器有限公司。

SKF525A（25mg）、地西泮-d5（1.0mg/mL）采購于北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司;敵敵畏（100μg/mL）采購于壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。

1.2.2 儀器條件

質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧電壓（ESI+）;離子源溫度：600℃;電噴霧電壓：5.5kV;碰撞氣（CAD）9psi;氣簾氣（CUR）30psi;霧化氣（GS1）55psi;輔助加熱氣（GS2）60psi;以上氣體均為高純氮氣。碰撞能量（CE）、去簇電壓（DP）及檢測特征離子對見表一。

液相條件：色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18（100×2.1mm，1.7μm），進(jìn)樣體積5μL;流速0.3mL/min。流動相及洗脫條件見表二。

頂空氣相色譜儀條件：色譜柱為安捷倫123-9234（30m×1.2μm×0.32mm;30m×1.8μm×0.32mm）;進(jìn)樣體積：1mL，分流比：12：1，進(jìn)樣口溫度：200℃，檢測器溫度：280℃;載氣流速：4.0mL/min;尾吹：20mL/min;H2流量：30mL/min;空氣流量：300mL/min;柱箱溫度：45℃;頂空進(jìn)樣器加熱箱溫度：65℃，定量環(huán)溫度：90℃，傳輸管線溫度：110℃，樣品瓶加熱平衡時間：10min。

1.2.3 檢材處理與檢驗

檢材中毒藥物提取分析：分別取1mL胃內(nèi)容物和心血于玻璃離心管中，各離心管中加入SKF525A、地西泮-d5內(nèi)標(biāo)工作液，加入3mLpH=9.2的硼砂緩沖溶液，另加入4mL乙醚后依次渦旋、8000r/min離心5min。靜置3分鐘后取上層有機溶劑于潔凈離心管中，50℃水浴揮干。用初始流動相復(fù)溶，過0.22μm濾膜。通過LC—MS/MS進(jìn)樣分析。分別取1mL空白血液和水同上述實驗處理過程作為空白對照。

檢材中乙醇提取分析：取500μL的4mg/100mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作溶液及100μL待測心血加入頂空瓶中，并用橡膠墊鋁帽密封、搖勻后置于安捷倫7697A頂空進(jìn)樣器中加熱10 min，取1.0mL液上氣體進(jìn)樣。取取蒸餾水100μL、80mg/100mL乙醇陽性對照樣品100μL分別加入取500μL的4mg/100mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作溶液同上述過程操作，作為空白樣品和陽性對照品。

1.3 結(jié)果分析

死者胃內(nèi)容物及心血均檢出敵敵畏特征離子對，通過陽性添加敵敵畏進(jìn)行比對，證實檢材中檢出毒物為敵敵畏。同時死者心血中檢出乙醇，其質(zhì)量濃度為7.8mg/100mL。死者的死亡原因符合飲酒后口服敵敵畏殺蟲劑合并乙醇中毒死亡。

2討論

有機磷農(nóng)藥給我們的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來了諸多便利，也會帶來食物和環(huán)境的污染，此外有機磷農(nóng)藥中毒事件頻發(fā)，也是困擾世界各國的社會性問題。世界各國每年有數(shù)百萬件有機磷農(nóng)藥中毒案例[1]，這些中毒案件中包含家畜中毒、他人投毒或自殺。發(fā)展中國家發(fā)生中毒案件的比例明顯高于發(fā)達(dá)國家，并且在全球范圍內(nèi)30%的自殺者是通過服用農(nóng)藥中毒死亡。因我國的農(nóng)藥生產(chǎn)及使用量較大，且多數(shù)為高毒性有機磷農(nóng)藥，又因其價格便宜容易獲得，最終導(dǎo)致在近些年的農(nóng)藥中毒案件中有機磷農(nóng)藥中毒或投毒案件占比較高[2]。

敵敵畏是一種常用的有機磷殺蟲劑。其中毒機理為磷酸根通過與體內(nèi)的乙酰膽堿酯酶組合，形成磷酸化的膽堿酯酶，達(dá)到抑制乙酰膽堿酯酶的活性作用。失活的乙酰膽堿酯酶使生物體喪失分解乙酰膽堿的能力，乙酰膽堿在體內(nèi)大量聚集，導(dǎo)致神經(jīng)功能紊亂，生物體中毒癥狀顯現(xiàn)[3]。另據(jù)文獻(xiàn)報道敵敵畏中毒致死量為成人口服10—14g[4]。

乙醇在尸體中可以從一個器官向附近組織擴散。人若在大量飲酒后突發(fā)死亡，胃內(nèi)仍有乙醇未被消化吸收，因心臟與胃距離較近，乙醇能通過向周圍組織擴散的方式進(jìn)入心臟，進(jìn)而導(dǎo)致心血中乙醇的檢測值較高。為了保證檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，尸體中血液乙醇含量檢測所用檢材應(yīng)首選尸體中靜脈血部位，鎖骨下靜脈血和股靜脈血是尸體中血液乙醇含量檢測常選擇的取材部位，在兩者都可以取材的情況下股靜脈是乙醇含量檢測的最佳選擇部位。在實際案件中如果尸體的盆骨或者肩部受損比較嚴(yán)重，無法抽取鎖骨下靜脈血和股靜脈血，這時就需要選擇死者心血作為檢材。抽取心血時有一點需要注意，鑒定人員需要讓心臟內(nèi)的血液進(jìn)行充分混合，避免檢材中紅細(xì)胞比容過多影響鑒定結(jié)論。

尸體中的血液若發(fā)生腐敗也會有乙醇產(chǎn)生。尸體中存在有大量微生物，在適宜的溫度條件下尸體內(nèi)血液及其他機體組織會發(fā)生腐敗，導(dǎo)致尸體內(nèi)產(chǎn)生正丁醇、乙醇、正丙醇等有機物。如果在較低冷凍溫度條件下保存尸體，在一天內(nèi)不會生成乙醇。但微生物在尸體內(nèi)的含量是會隨著死亡時間的延長而增加。在大量微生物的作用下會有乙醇等物質(zhì)的產(chǎn)生，若沒有進(jìn)行進(jìn)一步的驗證容易誤判為生前飲酒。所以在處理尸體中血液乙醇檢測時，若尸體死亡時間超過一天，鑒定人員需對乙醇是否為腐敗產(chǎn)生進(jìn)行分析。結(jié)合案件檢材，尸體中血液乙醇含量會出現(xiàn)丟失、下降或升高的現(xiàn)象。微生物降解、酶降解以及隨著水分蒸發(fā)都會使尸體中血液乙醇含量會出現(xiàn)丟失或下降。即使在低溫下保存檢材也會有上述情況發(fā)生。

生物體腐敗后不僅能產(chǎn)生乙醇，還能產(chǎn)生正丙醇等醇類物質(zhì)。所以在檢測長時間存放后的尸體血液中乙醇含量時，鑒定人員應(yīng)考慮檢出的乙醇是否由檢材腐敗產(chǎn)生的。具體運用到實驗過程中就是鑒定人員需要對尸體中尿液或者血液中的乙醇和正丙醇成分進(jìn)行定量檢測。如果檢材中能同時檢測到乙醇和正丙醇，表示尸體中的乙醇含量已經(jīng)受到外界環(huán)境等其他因素的影響，鑒定人員需要扣除檢材腐敗產(chǎn)生乙醇的份額，進(jìn)而得出死者生前體內(nèi)乙醇含量。

對于腐敗檢材產(chǎn)生的代謝物進(jìn)行檢測時一些方面需要注意，就是不同種類的微生物腐敗代謝，其代謝產(chǎn)物和代謝途徑都有一定的變異性，并且不同種類檢材在不同環(huán)境條件下其代謝產(chǎn)物的種類以及相應(yīng)的數(shù)量有稍微差別。尸體腐敗可產(chǎn)生正丁醇和正丙醇并伴隨有乙醇生成，若生物檢材中有正丁醇和正丙醇含量異常升高的情況，并且血液中乙醇的含量與正丙醇的含量比值小于20時，就可初步判定此檢材中的乙醇是腐敗產(chǎn)生的。因有些飲料中也會含有少量正丙醇，若飲用此類飲料后生物檢材中有檢出正丙醇的情況，這也會影響生物檢材中乙醇含量的判定。而正丁醇逐漸被認(rèn)為是尸體腐敗后生成乙醇的標(biāo)志物，其和乙醇的比值關(guān)系有待進(jìn)一步研究。在腐敗檢材中2-甲基丙酸也被發(fā)現(xiàn)伴隨乙醇同時生成，具體以哪種有機物作為腐敗檢材中生成乙醇的標(biāo)志物還未達(dá)成共識，它們之間的構(gòu)效關(guān)系需廣大鑒定人員不斷探索。

敵敵畏合并乙醇中毒機制中，敵敵畏的作用是抑制膽堿酯酶活性，進(jìn)而引起中樞抑制癥狀。乙醇作為常見有機溶劑，其可以使生物體內(nèi)血管擴張，造成血液流速加快，進(jìn)而促進(jìn)敵敵畏在體內(nèi)的分布和吸收，使敵敵畏中毒癥狀進(jìn)一步惡化，出現(xiàn)呼吸困難到多器官衰竭死亡。服用農(nóng)藥自殺案件近年來在司法鑒定中并不少見，但市場上流通的農(nóng)藥大多為多種制劑混合而成，伴隨的中毒機制也十分復(fù)雜，對司法鑒定和臨床治療都有不小的挑戰(zhàn)，所以在實際鑒定工作中需要多方面考慮，避免出現(xiàn)誤鑒或漏檢的情況發(fā)生。

本次采用頂空氣相色譜儀對死者心血中乙醇進(jìn)行定量檢測，利用AB SCIEX TRIPLE QUAD 4500質(zhì)譜儀對中毒者的胃內(nèi)容物及心血進(jìn)行毒藥物快速定性分析，此方法準(zhǔn)確、快捷。因乙醚沸點較低、易揮發(fā)，用乙醚提取毒物可減少濃縮時間，提高鑒定效率。死者心血中檢測出乙醇含量為7.8mg/100mL，本例中對死者胃內(nèi)容物及心血進(jìn)行毒物提取、濃縮、復(fù)溶。因提取物刺激性農(nóng)藥味較大，對死者胃內(nèi)容物及心血提取后的復(fù)溶液體分別稀釋100萬倍和1萬倍，進(jìn)樣分析仍可檢測到敵敵畏特征離子對。與陽性添加敵敵畏進(jìn)行比對定性分析，李某生前服入大量敵敵畏。因李某心血中乙醇含量相對較低，推測為李某生前飲酒一段時間后大量服用敵敵畏。根據(jù)李某體內(nèi)同時檢出乙醇和敵敵畏成分，符合敵敵畏合并乙醇中毒導(dǎo)致死亡的結(jié)論。

參考文獻(xiàn)

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