注射用腺苷鈷胺配制后顏色異常原因分析*

江小四，方先駿，程 鋼

（安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥劑科·國家中醫(yī)藥管理局中藥化學三級實驗室，安徽 合肥 230022）

腺苷鈷胺又稱腺苷輔酶維生素B12，是維生素B12的活性輔酶形式之一，臨床主要用于治療多發(fā)性神經(jīng)炎、三叉神經(jīng)痛、神經(jīng)麻痹等［1］，也常與其他藥物聯(lián)用，治療糖尿病周圍神經(jīng)病變、帶狀皰疹、多發(fā)性神經(jīng)炎、老年性聾等疾?。?-5］。腺苷鈷胺的化學性質(zhì)不穩(wěn)定，對光敏感，對酸、堿、熱和氧亦不穩(wěn)定［6］，易分解產(chǎn)生腺苷、羥鈷胺素等雜質(zhì)［7-8］。因此，注射用腺苷鈷胺溶解后須立即使用，同時注意避光。其一般選用注射用水或0.9%氯化鈉注射液，肌肉注射或靜脈注射給藥。2019年7月9日，某三甲醫(yī)院內(nèi)分泌病區(qū)護士配制注射用腺苷鈷胺時常規(guī)抽取維生素B1注射液2 mL溶解，溶解后溶液呈無色透明，與此前得到的紅色澄清液不符，且同時配制的其他腺苷鈷胺溶液的顏色也均為紅色澄清液體，懷疑該支藥品質(zhì)量存在問題。藥學人員依據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供的質(zhì)量標準，首先抽樣檢驗該批次其他藥品，再從光照、pH、溶劑及與其他藥品配伍等因素入手，考察注射用腺苷鈷胺溶解后顏色異常的原因，為臨床安全用藥提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1200型高效液相色譜儀，包括G1310A四元泵、G1314BVWD型紫外檢測器、手動進樣器、色譜工作站、DT-230A型柱溫箱（美國Agilent公司）；TU-1810型紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；PHS-3E型酸度計（上海儀電科學儀器股份有限公司）；BT25S型電子天平（賽多利斯科學儀器＜北京＞有限公司，精度為0.01 mg）；BiosaferSB-3200 DT-6L型超聲清洗機（南京賽飛生物科技有限公司）。

1.2 試藥

腺苷鈷胺對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為14658-201803，規(guī)格為每瓶100 mg，含量為99.0%）；注射用腺苷鈷胺（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司，批號為1903171P2122，規(guī)格為每支1 mg）；維生素B1注射液（石藥銀湖制藥有限公司，批號為3719061910，規(guī)格為每瓶2 mL∶100 mg）；維生素C注射液（山東新華制藥股份有限公司，批號為1901151，規(guī)格為每瓶5 mL∶0.1 g）；維生素B6注射液（山東方明藥業(yè)集團股份有限公司，批號為19071242，規(guī)格為每瓶2 mL∶0.1 g）；硫辛酸注射液（亞寶藥業(yè)集團股份有限公司，批號為190604，規(guī)格為每瓶6 mL∶0.15 g）；10%氯化鉀注射液（中國大冢制藥有限公司，批號為9196K5，規(guī)格為每瓶10 mL∶0.1 g）；50%葡萄糖注射液（中國大冢制藥股份有限公司，批號為9I80J1，規(guī)格為每瓶20 mL∶10 g）；滅菌注射用水（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號為M19031905-2，規(guī)格為每瓶500 mL）；0.9%氯化鈉注射液（安徽豐原藥業(yè)股份有限公司，批號為118030606，規(guī)格為每瓶500 mL）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 注射用腺苷鈷胺質(zhì)量考察

含量測定：色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相為甲醇-水（30∶70，V／V）；流速為0.8 mL／min；檢測波長為260 nm；柱溫為30℃；進樣量為10μL。取腺苷鈷胺對照品5.41 mg，精密稱定，置50 mL棕色容量瓶中，加滅菌注射用水溶解并定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.107 1 mg／mL的對照品溶液。取樣品1支，加2 mL 0.9%氯化鈉注射液溶解、搖勻，移至10 mL棕色容量瓶中，用滅菌注射用水反復洗滌西林瓶，直至瓶中無紅色液體，洗液一并置容量瓶中，加滅菌注射用水定容，搖勻，即得供試品溶液。分別取對照品溶液和供試品溶液各10μL，進樣測定（以上操作均在室溫避光條件下操作）。記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算樣品含量，結果樣品中腺苷鈷胺的含量為標示量的105.0%，符合標準（90.0%～110.0%）［9］。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

其他項目檢查：根據(jù)藥品質(zhì)量標準［9］對樣品進行性狀、pH、羥鈷胺素測定，結果均符合要求，說明該批藥品質(zhì)量合格。

2.2 腺苷鈷胺溶液光穩(wěn)定性考察

取樣品14支，分別加入2 mL 0.9%氯化鈉注射液溶解，搖勻，于室溫見光條件下放置14 d內(nèi)，逐日觀察溶液顏色、褪色、渾濁沉淀情況。結果溶液顏色和澄清度未見明顯變化。并取放置0，1，3，5，9，14 d的樣品，依法配制供試品溶液，分別進樣測定，色譜圖見圖2。以0 d的含量為100%計算，結果第1，3，5，9，14天的相對百分含量分別為44.0%，10.0%，8.4%，3.4%，2.9%。可見，腺苷鈷胺見光極易分解。

2.3 配伍溶液外觀性狀考察

取樣品8支，分別注入維生素B1注射液、維生素B6注射液、維生素C注射液、硫辛酸注射液、50%葡萄糖注射液、10%氯化鉀注射液、0.05 mol／L硫酸溶液、0.1 mol／L氫氧化鈉溶液各2 mL，搖勻，各移至5 mL燒杯中，在室溫下放置0，1，2，3，24 h時觀察，結果各配伍溶液各時點均呈紅色，均未產(chǎn)生渾濁沉淀。其中，前六種配伍藥品均為該病區(qū)當日配制過的藥品，在室溫放置24 h內(nèi)顏色無異常，說明導致病區(qū)配制液顏色異常的原因不是樣品與以上藥品配伍所致。后兩種配伍藥品屬強酸、強堿溶液，樣品與之配伍后均呈紅色澄清，故排除病區(qū)配制液顏色異常為pH變化所致。

圖2 光穩(wěn)定性考察高效液相色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of the photostability test

2.4 病區(qū)樣品與維生素B1的鑒別對比

以移液槍精密量取病區(qū)配置樣品溶液、維生素B1注射液各0.1 mL，分別置2 mL EP塑料離心管中，加滅菌注射用水1 mL，超聲，搖勻，分別得相應供試品溶液。取2種供試品溶液各10μL，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖（見圖3）并比較。

圖3 鑒別對比高效液相色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of the identification and comparison

由圖3可見，病區(qū)樣品供試品溶液與維生素B1供試品溶液色譜峰的保留時間、峰高、峰面積、色譜峰個數(shù)基本一致，說明病區(qū)樣品供試品溶液中含有維生素B1，且2種供試品溶液中維生素B1濃度一致；病區(qū)樣品供試品溶液在腺苷鈷胺的保留時間（2.90 min左右）未出現(xiàn)色譜峰，說明病區(qū)樣品中不含腺苷鈷胺。

3 討論

3.1 該批次藥品是否存在質(zhì)量問題

對注射用腺苷鈷胺（批號為1903171P2122）的質(zhì)量檢驗結果表明，該批次藥品含量測定、性狀、pH、羥鈷胺素等項目均符合藥品質(zhì)量標準，質(zhì)量合格。

3.2 樣品光穩(wěn)定性考察的目的和結果

有文獻報道，0.5 mg／mL的腺苷鈷胺水溶液置透明容量瓶中，于（55±5）lx光照強度、25℃條件下放置，60 min后含量降至70.35%～73.48%［10-11］，若在日光下放置，照射30 min含量僅剩0.73%［6］。本試驗中腺苷鈷胺配制液置藥品原包裝棕色西林瓶中，有標簽遮擋，相當于采取了一定的遮光措施，故含量下降較文獻報道慢，且在14 d時仍能檢測出腺苷鈷胺。病區(qū)注射用腺苷鈷胺配制后顏色異常事件發(fā)生于7月9日，同日反映問題后及時送至藥檢室，置冰箱冷藏避光保存，直至7月22日獲得生產(chǎn)企業(yè)提供的腺苷鈷胺對照品后開始試驗。考慮腺苷鈷胺見光極易分解，故檢測14 d室溫不避光貯存條件下腺苷鈷胺的含量變化，考察其配制液見光穩(wěn)定性。結果表明，室溫不避光放置14 d后，腺苷鈷胺配制液在2.9 min保留時間處仍能檢測到色譜峰。峰面積測定結果顯示，腺苷鈷胺相對含量為2.9%，而供試品溶液在腺苷鈷胺保留時間處未見色譜峰，說明病區(qū)樣品中不含腺苷鈷胺。

此外，還可結合質(zhì)譜，通過檢測腺苷鈷胺主要分解產(chǎn)物腺苷、羥鈷胺素等［7-8］，進一步驗證病區(qū)樣品中是否含有腺苷鈷胺，結果會更嚴謹。

3.3 病區(qū)樣品配制液顏色異常原因分析與建議

試驗結果顯示，病區(qū)樣品中不含腺苷鈷胺。推測原因可能有，該藥品生產(chǎn)廠家在生產(chǎn)過程中漏灌了藥液（粉），導致該支藥品為空瓶，燈檢及相關質(zhì)檢人員未能將空瓶檢出，致使該次品流入市場；藥房藥師調(diào)配及發(fā)藥時未核查到藥品最小包裝；病區(qū)護士配制前未仔細查看瓶內(nèi)是否有藥物，直接將維生素B1注射液作為溶劑注入，而維生素B1注射液為無色透明，故“配好”的藥液呈無色透明。

建議藥品生產(chǎn)廠家加強對生產(chǎn)機件的保養(yǎng)維護，減少因灌裝瓶傾斜、移位等造成瓶口對不準灌裝口，使藥液（粉）漏出，可積極應用藥液灌裝機在線稱重系統(tǒng)，有效剔除不合格裝量藥瓶，保證每支藥品劑量精準；燈檢和質(zhì)檢人員須嚴把質(zhì)量關，避免漏篩；藥師要嚴謹對待針劑調(diào)劑工作，嚴格遵循“四查十對”，認真細致地核查到藥品最小包裝，杜絕不合格藥品進入臨床。