核型多角體病毒對(duì)2種夜蛾的室內(nèi)毒力試驗(yàn)

曾維愛(ài)，李昆奇，蔡海林，譚 琳

（1.湖南省煙草公司長(zhǎng)沙市公司，湖南長(zhǎng)沙 410019；2.瀏陽(yáng)市烤煙生產(chǎn)指導(dǎo)中心，湖南長(zhǎng)沙 410300；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，湖南長(zhǎng)沙 410128）

斜紋夜蛾（Spodoptera litura）、棉鈴蟲(chóng)（Helicoverpa armigera）均為鱗翅目夜蛾科昆蟲(chóng)，幼蟲(chóng)食性復(fù)雜，取食量大，寄主植物分布廣泛［1-2］。煙草是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物，其收獲物為葉片，夜蛾類(lèi)幼蟲(chóng)為害煙葉后造成葉片缺刻、破損，甚至將整張葉片完全取食光，嚴(yán)重影響煙草產(chǎn)量和質(zhì)量，給煙農(nóng)帶來(lái)直接經(jīng)濟(jì)損失。核型多角體病毒屬桿狀病毒科核型多角體病毒屬，對(duì)農(nóng)林害蟲(chóng)的侵染專(zhuān)一化程度較高，且對(duì)天敵、環(huán)境、人畜無(wú)害，國(guó)內(nèi)外在分離鑒定、毒力測(cè)定、致病機(jī)理、病毒制劑及田間應(yīng)用等方面開(kāi)展了大量研究［3-8］。基于此，研究3 種夜蛾科核型多角體病毒對(duì)斜紋夜蛾、棉鈴蟲(chóng)的室內(nèi)毒力，旨在進(jìn)一步明確核型多角體病毒殺蟲(chóng)劑對(duì)煙草主要害蟲(chóng)的作用機(jī)制，拓展夜蛾類(lèi)新的生物防治措施，為科學(xué)、綠色防控?zé)煵莺οx(chóng)提供參考和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試?yán)ハx(chóng)

斜紋夜蛾、棉鈴蟲(chóng)卵均采自長(zhǎng)沙市煙草公司瀏陽(yáng)煙田，飼養(yǎng)條件為（26±1）℃，相對(duì)濕度70%±5%，光照（L）∶暗光（D）周期為12 h ∶12 h，飼料為新鮮煙葉，于實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)5 代以上供試。

1.1.2 供試煙草

品種為云煙87，煙草種植過(guò)程中未施用任何農(nóng)藥。

1.1.3 供試藥劑

斜紋夜蛾核型多角體病毒SpliNPV 郴州株，湖南郴州煙區(qū)分離，保存于長(zhǎng)沙市煙草公司實(shí)驗(yàn)室，10 億PIB/mL；200 億PIB/mL 斜紋夜蛾核型多角體病毒（水分散粒劑）、50 億PIB/mL 棉鈴蟲(chóng)核型多角體病毒（懸浮劑）均購(gòu)自科云生物。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 核型多角體病毒對(duì)2 種夜蛾卵的毒力試驗(yàn)

將新鮮飽滿的初產(chǎn)卵分別放在濃度為2.0×107PIBs·mL-1的供試藥劑溶液中浸漬10 s 后用吸水紙將多余的藥液吸干，室溫晾干后，將卵刷到培養(yǎng)皿中，并置于溫度（26±1）℃、相 對(duì) 濕 度70%±5%、光 周 期L ∶D=12 h ∶12 h 的人工氣候箱中培養(yǎng)，記錄卵的孵化情況，以清水為對(duì)照，每處理30 粒卵，重復(fù)4 次，共120 粒卵。孵化出來(lái)的幼蟲(chóng)及時(shí)挑出轉(zhuǎn)移至透明飼養(yǎng)盒，用新鮮煙葉喂飼，記錄幼蟲(chóng)死亡情況，直至幼蟲(chóng)進(jìn)入3 齡期。

1.2.2 核型多角體病毒對(duì)2 種夜蛾2 齡幼蟲(chóng)的毒力試驗(yàn)

將煙草葉片剪成4 cm×4 cm 大小的正方形，分別放在濃度為2.0×107PIBs·mL-1的供試藥劑溶液中浸漬10 s于室溫下晾干后置于塑料盒中，挑選同批孵化的大小一致的2 齡初期幼蟲(chóng)于煙葉上，每盒1 頭蟲(chóng)，以清水為對(duì)照，每處理30 頭幼蟲(chóng)，重復(fù)4 次，并置于溫度（26±1）℃、相對(duì)濕度70%±5%、光周期L ∶D=12 h ∶12 h 的人工氣候箱中培養(yǎng)，更換新鮮的浸過(guò)病毒液的煙草葉片，感染36 h 后以無(wú)毒新鮮煙草葉片繼續(xù)飼養(yǎng)，每24 h 調(diào)查幼蟲(chóng)死亡數(shù)，并收集蟲(chóng)尸體，直至96 h，計(jì)算死亡率。

1.3 數(shù)據(jù)處理

死亡率和校正死亡率分別根據(jù)公式（1）和公式（2）計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 核型多角體病毒對(duì)2 種夜蛾卵的毒力試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)過(guò)核型多角體病毒液處理過(guò)的兩種夜蛾卵，在24 h 時(shí)陸續(xù)孵化，在48 h 達(dá)到孵化高峰期，72 h 后卵出現(xiàn)干癟，且不能正常孵化。從表1 可以看出，清水對(duì)照組的斜紋夜蛾、棉鈴蟲(chóng)卵孵化率最高，分別為95.00%、95.83%，其余經(jīng)3 種核型多角體病毒處理過(guò)的卵，其孵化率 均≥91.67%，低于清水對(duì)照，但未達(dá)到顯著水平，說(shuō)明核型多角體病毒對(duì)斜紋夜蛾、棉鈴蟲(chóng)卵的孵化沒(méi)有明顯的抑制作用。

表1 3 種核型多角體病毒對(duì)2 種夜蛾卵孵化率的影響（72 h）

經(jīng)核型多角體病毒處理過(guò)的卵孵化成幼蟲(chóng)的校正死亡率如圖1 所示，而SpliNPV（科云）浸卵處理后，對(duì)斜紋夜蛾、棉鈴蟲(chóng)的校正死亡率分別為91.41%、76.70%，HaNPV（科云）浸卵處理后，對(duì)斜紋夜蛾、棉鈴蟲(chóng)的校正死亡率分別為79.67%、93.51%，SpliNPV（郴州）浸卵處理后，對(duì)斜紋夜蛾、棉鈴蟲(chóng)的校正死亡率分別為90.70%、76.06%。

圖1 不同核型多角體病毒浸卵處理后2 種夜蛾幼蟲(chóng)校正死亡率

2.2 核型多角體病毒對(duì)2 種夜蛾2 齡幼蟲(chóng)的毒力試驗(yàn)結(jié)果

3 種核型多角體病毒對(duì)斜紋夜蛾和棉鈴蟲(chóng)2 齡幼蟲(chóng)的毒力存在一定的差異，在取食帶毒葉片24 h 后，各處理組幼蟲(chóng)陸續(xù)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，隨著取食時(shí)間的延長(zhǎng)，斜紋夜蛾和棉鈴蟲(chóng)幼蟲(chóng)的死亡率逐漸上升。由圖2 可知，斜紋夜蛾2 齡幼蟲(chóng)喂毒72 h 后，SpliNPV（科云）、SpliNPV（郴州）、HaNPV（科云）處理組校正死亡率分別為88.03%、88.89%、75.21%，其中SpliNPV（科云）、SpliNPV（郴州）兩種病毒對(duì)斜紋夜蛾低齡幼蟲(chóng)的致死率相當(dāng)。棉鈴蟲(chóng)2 齡幼蟲(chóng)喂毒72 h 后，HaNPV（科云）、SpliNPV（科云）、SpliNPV（郴州）處理組校正死亡率分別為91.00%、72.88%、77.12%，HaNPV（科云）對(duì)棉鈴蟲(chóng)低齡幼蟲(chóng)的致死率最高。

圖2 不同核型多角體病毒處理后2 種夜蛾幼蟲(chóng)校正 死亡率（72 h）

3 結(jié)論與討論

近年的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，湖南部分煙區(qū)煙田棉鈴蟲(chóng)、斜紋夜蛾的發(fā)生量呈逐年上升趨勢(shì)。常規(guī)的化學(xué)防治雖然見(jiàn)效快，但長(zhǎng)期使用易產(chǎn)生抗藥性，且可能污染環(huán)境，殺傷天敵。目前在煙草害蟲(chóng)防治上，核型多角體病毒殺蟲(chóng)劑占據(jù)了比較重要的位置。試驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)核型多角體病毒處理過(guò)的斜紋夜蛾和棉鈴蟲(chóng)的卵，因幼蟲(chóng)孵化后會(huì)取食卵殼，在這個(gè)過(guò)程中將卵殼上少量的病毒也攝入體內(nèi)，導(dǎo)致其死亡。