狍子銅綠假單胞菌感染病理學(xué)診斷

王運(yùn)盛，國欣欣，趙素芬，朱云蕓，李祥翔，范晰琳，普天春*，張成林，*

（1.北京動(dòng)物園，北京100044；2.圈養(yǎng)野生動(dòng)物技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100044）

狍子（roe deer）又名狍，為偶蹄獸、鹿科的小型鹿類。狍子具有食量少、耐寒、抵抗力強(qiáng)等特點(diǎn)。近年來，狍子作為特種養(yǎng)殖動(dòng)物，數(shù)量不斷增加。狍子深受游客喜歡，我國動(dòng)物園圈養(yǎng)狍子數(shù)量也逐年增多。雖然狍子抗病力較強(qiáng)，但隨著飼養(yǎng)量的增加，常見多發(fā)病也隨之增多[1]。北京動(dòng)物園獸醫(yī)院收檢死亡狍子1例。該動(dòng)物生前因外傷致下頜部大面積感染，經(jīng)治療無效死亡；死后進(jìn)行致病微生物培養(yǎng)及鑒定，該狍子感染銅綠假單胞菌。本研究采用組織病理學(xué)方法觀察其主要器官組織病理學(xué)變化，以期為狍子疾病診斷和治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 病料來源

病死狍子1只。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 剖檢及病理組織學(xué)檢查

剖檢發(fā)病死亡的狍子，觀察其病理變化。采集心、肝、脾、肺、腎、腸、胰腺等組織，迅速投入10%的福爾馬林溶液，進(jìn)行病理切片前處理。

1.2.2 H.E.染色

石蠟切片分別經(jīng)二甲苯脫蠟，無水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、50%乙醇梯度復(fù)水，下行至雙蒸水中，蘇木精染色10 min，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，水洗返藍(lán)15 min；再依次通過50%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇梯度脫水，伊紅染色1 min，95%乙醇洗滌，再經(jīng)無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。切片放置于37℃溫箱內(nèi)過夜烘干后鏡檢。光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理學(xué)變化情況。

1.2.3 細(xì)菌的分離、培養(yǎng)及鑒定

無菌取狍子肺臟，分別接種于沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（LA4470）、血液瓊脂培養(yǎng)基（LA7150）、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（LA9640）、麥康凱培養(yǎng)基（M8560）、Baird-parker培養(yǎng)基（LA3690）、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（N8290）、結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基（LA0320），37℃培養(yǎng)24 h，觀察培養(yǎng)結(jié)果。試驗(yàn)所用培養(yǎng)基購自北京索萊寶科技有限公司。

2 結(jié)果與分析

2.1 狍子血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果（見表1）

狍子死亡前1周進(jìn)行外周血生化常規(guī)檢測。

由表1可知，白細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞比率降低，中性粒細(xì)胞比率升高，提示狍子生前發(fā)生細(xì)菌感染。

2.2 狍子臨床剖檢病理變化（見圖1）

由圖1可知，死亡狍子消瘦、口腔內(nèi)大面積潰爛（圖1a）。心肌呈暗紅色、心外膜有明顯壞死、呈雪花狀、心內(nèi)膜淤血、有散在出血斑（圖1b）。肺組織觸感硬實(shí)、右肺間葉呈肝變表現(xiàn)、右肺隔葉有壞死區(qū)（圖1c）、壞死區(qū)切面可見化膿灶（圖1d）。肝腫大、顏色不均、表面散在出血點(diǎn)（圖1e）。胰腺顏色為暗紅、腫大（圖1f）。脾臟皺縮（圖1g）。腎腫大，皮髓質(zhì)交界清晰、出血，腎被膜出血斑與白色壞死區(qū)相交織（圖1h）。

2.3 狍子細(xì)菌分離培養(yǎng)及鑒定結(jié)果（見圖2）

血平板中可見大量菌落，菌落呈灰色、圓形、表面光滑、邊緣規(guī)則，直徑3~3.5 mm左右，呈β溶血。麥康凱培養(yǎng)基可見菌落呈透明、圓形、表面光滑、邊緣規(guī)則，直徑3 mm左右。

由圖2可知，革蘭氏染色鏡檢為陰性桿菌。結(jié)果顯示為銅綠假單胞菌。

2.4 狍子病理學(xué)觀察結(jié)果（見圖3）

肝：低倍鏡下觀察，肝細(xì)胞呈條索狀排列、淤血。高倍鏡下觀察，肝竇內(nèi)紅細(xì)胞聚集、肝細(xì)胞出現(xiàn)不同程度腫脹、顆粒變性；肝細(xì)胞間隙內(nèi)巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞增多（圖3a）。

腎：低倍鏡下觀察，集合管大面積出血；集合管上皮細(xì)胞壞死脫落、聚集于集合管腔內(nèi)。高倍鏡下觀察，遠(yuǎn)曲小管和近曲小管部分上皮細(xì)胞顆粒變性、高度腫脹且脫離基底膜；部分脫落的上皮細(xì)胞發(fā)生壞死崩解，僅殘存細(xì)胞輪廓；腎小球毛細(xì)血管充血、出血，腎小囊可見脫落的上皮細(xì)胞（圖3b）。

脾：低倍鏡下觀察，被膜增生、脾小梁增生明顯、白髓比例增加、紅髓比例減少。高倍鏡下，紅髓細(xì)胞間隙增寬、呈水腫樣病變、漿細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增多（圖3c）。

胰腺：低倍鏡下觀察，胰腺結(jié)構(gòu)松散、淤血、出血。高倍鏡下觀察，胰腺水腫、胰腺泡形態(tài)不一、胰腺泡壞死、壞死區(qū)域纖維化、伴有大量淋巴細(xì)胞浸潤（圖3d）。

肺：低倍鏡下觀察，肺組織大面積壞死、出血、間質(zhì)增寬；病變嚴(yán)重區(qū)域肺泡內(nèi)可見大量紅染物質(zhì)、病變相對輕微處肺組織代償性肺氣腫、肺泡腔顯著增寬。高倍鏡下觀察，肺泡內(nèi)紅染物質(zhì)為漿液性，含有多量紅細(xì)胞、肺泡壁上皮細(xì)胞、炎性細(xì)胞以及細(xì)胞脆片（圖3e）。

肺組織脈管炎明顯，壞死肺組織內(nèi)可見大量多核巨細(xì)胞；漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤（圖3f）。

心臟：低倍鏡下觀察，心肌纖維水腫、排列松散、部分區(qū)域心肌細(xì)胞呈液化性壞死。高倍鏡下可見心肌細(xì)胞顆粒變性、肌細(xì)胞間有大量紅細(xì)胞、炎性細(xì)胞浸潤（圖3g）。

口腔：低倍鏡下觀察口腔內(nèi)原有組織結(jié)構(gòu)破壞、口腔內(nèi)組織大面積出血、炎性細(xì)胞大面積浸潤、血管大面積增生。高倍鏡下可見壞死組織內(nèi)纖維化明顯，多核巨細(xì)胞、漿細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤（圖3h）。

3 診斷

經(jīng)臨床剖檢特征觀察、細(xì)菌的分離、培養(yǎng)、鑒定以及組織病理學(xué)觀察，死亡狍子由于口腔外傷導(dǎo)致潰爛，銅綠假單胞菌感染，并擴(kuò)散至全身，肺、腎等重要臟器發(fā)生明顯的膿毒敗血癥癥狀，且各重要組織臟器發(fā)生炎性壞死，為典型的細(xì)菌感染引發(fā)全身性菌血癥死亡病例。

4 討論

銅綠假單胞菌為假單胞菌屬，革蘭氏染色呈陰性。首先由Gersard于1882年從傷口膿液中分離得到[3]。該菌廣泛存在于自然界中，如土壤、水和空氣中，作為人畜共患病原菌，可引起人與動(dòng)物發(fā)病。由于銅綠假單胞菌為條件致病菌，健康機(jī)體很少感染發(fā)病。銅綠假單胞菌引起的疾病常出現(xiàn)在燒傷、外科創(chuàng)傷、術(shù)后的免疫力低下宿主。當(dāng)機(jī)體免疫力降低時(shí)，其體內(nèi)的銅綠假單胞菌容易生長繁殖，引發(fā)感染[4-8]。

臨床上，銅綠假單胞菌的感染常見于禽類、反芻動(dòng)物[9-13]。近年來，有水貂感染銅綠假單胞菌的文獻(xiàn)報(bào)道[14-18]；水產(chǎn)養(yǎng)殖中，該病原造成的影響也越來越顯著[19-21]。而在野生動(dòng)物研究領(lǐng)域，銅綠假單胞菌引起疾病的報(bào)道相對較少，曾有朱鹮、大熊貓、袋鼠等發(fā)生感染的報(bào)道[22-25]。銅綠假單胞菌是呼吸系統(tǒng)疾病常見的致病菌之一，關(guān)于該菌的文獻(xiàn)研究多集中于呼吸系統(tǒng)，對該菌引發(fā)其他臟器的病變描述相對少見[17]。在本病例中，狍子由于口腔外傷導(dǎo)致口腔潰爛，銅綠假單胞菌引起繼發(fā)感染，并最終導(dǎo)致菌血癥，依靠其致死毒素、腸毒素、溶血毒素等引發(fā)死亡[26]，經(jīng)病理學(xué)診斷發(fā)現(xiàn)銅綠假單胞菌除引起肺部病變外，在狍子的腎、心、胰腺等組織均可觀察到此菌造成的組織器官損傷。

5 結(jié)論

本研究系統(tǒng)報(bào)道1例狍子因感染銅綠假單胞菌，致機(jī)體菌血癥最終死亡的病例。通過血液生理生化試驗(yàn)、病原菌分離培養(yǎng)及分子生物學(xué)技術(shù)確診致病病因，結(jié)合臨床病理變化及系統(tǒng)病理學(xué)觀察，全面闡述狍子銅綠假單胞菌病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸機(jī)制，可為圈養(yǎng)野生動(dòng)物菌血癥的病理學(xué)診斷提供參考。