體金法與TPPA法在街頭獻(xiàn)血者梅毒篩查中的應(yīng)用①

李俊設(shè)

(洛陽市澗西區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，河南 洛陽 471003)

梅毒是常見的經(jīng)血傳播傳染病，嚴(yán)重危害人類健康，近年發(fā)病率逐年增高[1,2]。由于梅毒螺旋體無法在人體外進(jìn)行培養(yǎng)，且核酸擴(kuò)增技術(shù)還未大范圍應(yīng)用于臨床，故而目前臨床診斷梅毒除根據(jù)臨床癥狀外，更有賴于血清學(xué)篩查。梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)是目前國內(nèi)采血機(jī)構(gòu)進(jìn)行梅毒螺旋體檢測的常用方法之一[3,4]。膠體金法是指采用高特異性抗原抗體反應(yīng)和免疫層析分析技術(shù)來進(jìn)行梅毒螺旋體定性檢測的方法，其原理在于目標(biāo)抗原能夠?qū)ふ铱贵w并與之結(jié)合，在基層醫(yī)院中應(yīng)用廣泛[5]。本研究應(yīng)用膠體金法與TPPA對街頭獻(xiàn)血者進(jìn)行梅毒抗體檢測，旨在探討以上兩種方法的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

所有血液標(biāo)本均來源于2019-01～2020-06的6250例街頭無償獻(xiàn)血者。所有獻(xiàn)血者均體檢合格，符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》(GB18467-2001)[6]。

1.2 方法

(1)甲組：先用TPPA法行血清梅毒抗體檢測，對于陽性標(biāo)本進(jìn)一步行膠體金法復(fù)查。乙組：先用膠體金法進(jìn)行篩查，對陽性標(biāo)本再行TPPA復(fù)查。(2)選取兩種檢測方法均陽性的標(biāo)本，采用陰性血清進(jìn)行1:2-1:1024倍稀釋，再采用膠體金法、TPPA法進(jìn)行分別檢測，對兩種檢測方法的靈敏度和可檢測的寬度進(jìn)行對比。(3)TPPA診斷試劑盒為日本富士株式會社產(chǎn)品，膠體金法試劑盒為英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司產(chǎn)品，檢測嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)結(jié)果

甲組：5018例血液標(biāo)本經(jīng)TPPA檢測顯示陽性104例，膠體金法復(fù)查顯示陽性100例，陽性符合率為96.15%(100/104)；以TPPA法為“金標(biāo)準(zhǔn)”，膠體金法陽性漏診率為0.08%(4/5018)。

乙組：1232例血液標(biāo)本膠體金法檢測顯示陽性23例，1209例陰性。采用TPPA法對膠體金法檢測陽性的23例標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查，陽性符合率為86.96%(20/23)。以TPPA法為“金標(biāo)準(zhǔn)”，膠體金法檢測的假陽性率為13.04%(3/23)。

2.2 靈敏度試驗(yàn)結(jié)果

選取8例兩種檢測均陽性的標(biāo)本，按1:2-1:1024的比例對陰性血清進(jìn)行稀，采用膠體金法及TTPA法對各稀釋后的樣本作定性檢測，TTPA法自然沉降2h，下限為可疑時(shí)的稀釋倍數(shù)；膠體金法20min內(nèi)觀察結(jié)果，下限是弱陽性，即陽性線出現(xiàn)時(shí)間長，色淺。和TPPA法比較，膠體金法可檢測至TPPA法下限的1/4～1/2，靈敏度為TPPA法的2～4倍。由8號標(biāo)本可見，膠體金法有著較寬的檢測范圍，膠體金法能夠檢測到下限的1024倍甚至以上。見表1。

表1 膠體金法和TPPA法靈敏度試驗(yàn)

3 討論

隨著我國改革開放進(jìn)程的推進(jìn)，經(jīng)濟(jì)發(fā)展日益活躍，流動人口逐漸增多，我國梅毒感染病例呈增長趨勢[7]。自我國1998年實(shí)施《獻(xiàn)血法》以來，各大醫(yī)院用血基本源于無償獻(xiàn)血者。鑒于無償獻(xiàn)血者覆蓋面積廣泛、人員就業(yè)呈多樣化，加之不少獻(xiàn)血者缺乏血液相關(guān)疾病知識，給血液安全造成了隱患。因此，獻(xiàn)血機(jī)構(gòu)應(yīng)切實(shí)做好無償獻(xiàn)血者梅毒血清的篩查工作，以確保輸血安全。

TPPA是采用梅毒螺旋特異性抗原進(jìn)行血清梅毒螺旋抗體的檢測，特異性較高，常作為梅毒感染的確診手段。以TPPA作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，進(jìn)行膠體金法應(yīng)用價(jià)值的評價(jià)，具有較高可靠性。既往研究顯示，膠體金法對血清梅毒螺旋抗體檢測的敏感性要差于TPPA，存在一定的假陰性[8]，這和本研究存在差別，可能由于試劑廠家及包被的重組基因、制作材料等不同有關(guān)[9]。因?yàn)門TPA檢測對象在于螺旋體族抗體，而膠體金法則是特異性螺旋體的基因片段，前者可能檢測出其他螺旋體抗體而呈現(xiàn)出假陽性，而此種情況下膠體金法呈陰性。

因TTPA屬于直接的凝集反應(yīng)，而膠體金法屬于標(biāo)記反應(yīng)，膠體金法可使檢測敏感度得到提高，本研究靈敏度試驗(yàn)也顯示膠體金法檢測下限更低，這和梁衛(wèi)霞等[10]研究結(jié)果一致。因此當(dāng)膠體金法陽性而TPPA陰性時(shí)，不可輕易認(rèn)為膠體金法是假陽性，也可能是由感染初期產(chǎn)生的抗體量較少造成的。對于感染早期抗體量較少時(shí)，膠體金法相比于TPPA法可更早檢出，使得梅毒抗體檢出窗口期提前。因此，對于早期梅毒，應(yīng)采取膠體金法聯(lián)合TPPA檢測，以早期發(fā)現(xiàn)，減少漏診，及早治療，故針對膠體金法陽性而TPPA陰性者應(yīng)行定期隨訪，觀察癥狀變化。

本研究乙組中膠體金法篩查時(shí)和TPPA檢測的陽性符合率為86.96%。除了膠體金法有著更高敏感度外，因膠體金法步驟簡單，無法分離出與其結(jié)合的雜抗體，因而假陽性率較高，本研究中，以TPPA法為“金標(biāo)準(zhǔn)”，膠體金法檢測的假陽性率為13.04%。因此當(dāng)膠體金法為陽性時(shí)，應(yīng)同時(shí)結(jié)合臨床癥狀及既往不潔接觸史進(jìn)行判斷，必要時(shí)進(jìn)一步采用其他方法如TPPA法進(jìn)行復(fù)檢。與TPPA法相同，在治愈一定時(shí)間后仍可能有著較高陽性率，故陽性僅提示正在感染或有既往感染史，無法進(jìn)行梅毒疾病活性狀況判斷，應(yīng)同時(shí)結(jié)合臨床癥狀、既往病史等，可聯(lián)用RPP進(jìn)行療效的監(jiān)測。綜上所述，膠體金法由于敏感度高、操作簡便、試劑便于保存、可獨(dú)立包裝、易對結(jié)果作出判斷等優(yōu)勢，可作為基層醫(yī)院的梅毒篩查手段。