不同濕度下高海拔死亡雄性大鼠玻璃體液內(nèi)膽堿酯酶、乳酸脫氫酶和鈉離子的濃度與死亡時間※

于 聰，吳 岳&，趙洪乾，趙 海，李 婷

(1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院，青海 西寧 810001；2.青海省刑事警察總隊，青海 西寧 810001)

運用玻璃體液內(nèi)物質(zhì)濃度的變化推斷死亡時間(postmortem interval，PMI)的難點在于其受多種條件影響，尤其在高原。本課題就濕度(H)對PMI推斷的影響進行了相關(guān)研究。

1.材料與方法

1.1 實驗動物及分組

成年SD雄性大鼠(105只，體重200±20g)由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心生產(chǎn)，生產(chǎn)許可證號：SCXK(陜)2018-001。在2 260米海拔處飼養(yǎng)一周。將大鼠以心臟空氣栓塞法處死后，分為A、B、C 3個大組，A組置恒溫(15℃)恒濕(45%)箱；B組置恒溫(15℃)恒濕(75%)箱；C組置恒溫(15℃)雙蒸水浴箱(100%H)。A、B、C組分別于0(死亡即刻)、3、6、9、12、18、24 h提取玻璃體液。用無菌去離子水以1：8比例稀釋，離心(4℃，12000r·min-1，3min)取上清液，編號入EP管中，置-80 ℃冰箱凍存。

1.2 樣本檢測

將待測樣本常溫解凍，取玻璃體液150 μL于檢測瓶中，應(yīng)用美國貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析檢測儀檢測CHE、LDH、Na+濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件處理，結(jié)果以均數(shù)±標準差表達，顯著性檢驗采用單因素方差法分析，并行Pearson和一元、多元線性回歸分析，檢驗水準α=0.05。

2.結(jié)果

2.1 玻璃體液內(nèi)的CHE濃度

大鼠死亡后在不同H與PMI下，玻璃體液中CHE濃度結(jié)果如表1所示，折線圖如圖1所示。隨著PMI的延長，CHE濃度呈下降趨勢(P<0.05)。在死亡0、12、18 h時，隨著H的增加CHE濃度增大。在死亡3、6、9、24 h時，在H為45%～75%條件下，CHE濃度在同一時間減小，在H為75%～100%條件下，CHE濃度增大，隨著H增加，濃度呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢。死亡0～3 h內(nèi)CHE濃度下降最快，可見圖1中該時間段傾斜度最大。死亡12～24 h內(nèi)CHE濃度波動很小，可見圖1中該時間段趨于平緩。

表1 大鼠不同H、PMI時的玻璃體液CHE濃度

圖1 大鼠不同H、PMI時的玻璃體液CHE濃度變化圖

2.2 玻璃體液內(nèi)的LDH濃度

大鼠在不同H與PMI下，玻璃體液中LDH濃度結(jié)果如表2所示，折線圖如圖2所示。隨著PMI的延長，LDH濃度呈下降趨勢(P<0.05)。在死亡0、9、12、18、24 h時，隨著H的增加LDH濃度增大。在死亡3、6 h時，H在45%～75%條件下，LDH濃度在同一時間增大，H在75%～100%條件下，LDH濃度減小，隨著H增加，濃度呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。在死亡0～3 h內(nèi)H在100%條件下，LDH濃度下降最快；在死亡0～6 h內(nèi)H在45%與75%條件下，LDH濃度下降最快，可見圖2中該時間段傾斜度最大。在H為45%條件下LDH的濃度波動幅度較大；在H為75%、100%條件下，死亡12～24 h內(nèi)LDH的濃度波動很小，可見圖2中該時間段趨于平緩。

表2 大鼠不同H、PMI時的玻璃體液LDH濃度

圖2 大鼠不同H、PMI時的玻璃體液LDH濃度變化圖

2.3 玻璃體液內(nèi)的Na+濃度

大鼠死亡后在不同H與PMI下，玻璃體液內(nèi)的Na+濃度結(jié)果如表3所示，折線圖如圖3所示。隨著PMI的增加，Na+濃度呈下降趨勢(P<0.05)。在H為45%～75%條件下，Na+濃度在同一時間增大，在H為75%～100%條件下，Na+濃度減小，隨著H增加，Na+濃度呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。在死亡0～3 h內(nèi)，Na+濃度下降最快，可見圖3中該時間段傾斜度最大。在H為75%條件下，Na+濃度波動幅度較大；在H為45%條件下，在死亡3～24 h內(nèi)Na+濃度波動很??；在H為100%條件下，在死亡9～24 h內(nèi)Na+濃度波動很小，可見圖3中該時間段趨于平緩，18 h與24 h濃度相等。

表3 大鼠不同H、PMI時的玻璃體液Na+濃度

圖3 大鼠不同H、PMI時的玻璃體液Na+濃度變化圖

2.4 相關(guān)分析結(jié)果

Pearson分析結(jié)果見表4，CHE、LDH、Na+濃度在不同H下與PMI呈負相關(guān)，P<0.01。

表4 PMI與濃度值的Pearson分析結(jié)果

2.5 線性回歸分析結(jié)果

對不同H條件下的CHE、LDH、Na+濃度值與 PMI進行回歸分析，其中PMI作為自變量x，濃度值作為因變量y，作一次、二次及三次曲線估計分別得到三條回歸模型，如表5所示。H在45%時LDH的r2值較高，說明其與PMI相關(guān)性高；在75%時CHE與PMI相關(guān)性高；在100%時Na+與PMI相關(guān)性高。綜上所述，三種H條件下，H為100%的三次回歸方程r2值較高，對推斷PMI影響較大，Na+在100%H下推斷PMI更準確。

表5 PMI與濃度值的回歸分析結(jié)果

3.討論

西寧海拔2 261 m，屬高原高山寒溫性氣候[1]。西寧年平均氣溫15 ℃，冬春季H介于40%～50%；夏秋季H介于55%～75%。本實驗分組設(shè)定了45%H代表西寧冬春季節(jié)，75%H代表西寧夏秋季節(jié)，100%H模擬死后拋尸入水的情況，可與溺死進行比較。

到目前為止，探究環(huán)境溫度[2]、海拔[3]對死后推斷PMI的報道多見，但在高海拔下研究環(huán)境H對推斷PMI影響的研究未見報道。玻璃體液的組成約99%為水、1%為蛋白質(zhì)，其余為無機鹽、糖、乳酸、尿素、維生素、氨基酸、脂質(zhì)等，目前僅對其中少部分物質(zhì)進行了研究[4]。王偉平[5]等用光度法檢測不同溫度下玻璃體液中CHE的活性，死后即刻至54 h之間，CHE的活性逐步降解趨于零，與PMI呈顯著負相關(guān)。劉承泉[6]等用比色法研究發(fā)現(xiàn)LDH在死后穩(wěn)定一段時間后迅速下降，與PMI呈負相關(guān)。眾多法醫(yī)學(xué)者[7-10]研究證明玻璃體液中的Na+可以用于推斷PMI，其與PMI呈負相關(guān)。

本實驗結(jié)果顯示，CHE、LDH、Na+濃度與PMI呈負相關(guān)。CHE、LDH、Na+的回歸方程系數(shù)在100%H條件下比較大，說明在100%H條件下，物質(zhì)濃度變化與PMI相關(guān)性高。將所測CHE、LDH、Na+濃度分別帶入不同H下的線性回歸方程進行驗證，求得預(yù)測PMI的平均值。隨著PMI的延長，預(yù)測的PMI值偏離越大，死亡即刻的預(yù)測時間最接近實際PMI，死后6 h內(nèi)使用不同H下線性回歸方程推斷PMI最準確。實驗檢測發(fā)現(xiàn)LDH的濃度很高，我們認為，LDH是參與糖酵解和糖異生工程中催化乳酸和丙酮酸之間氧化還原反應(yīng)的重要酶類。死亡后玻璃體液中的葡萄糖含量迅速下降，導(dǎo)致LDH無法進行糖酵解，所以濃度很高。在100%H下，外周低滲透壓可致水分滲入玻璃體液造成誤差。

龔志強[7]等做了玻璃體液內(nèi)的13種元素與PMI的回歸方程， 并指出離子的r2>0.9時，其方程可用于推斷PMI。許小明[11]等建立了48 h內(nèi)玻璃體液內(nèi)物質(zhì)與PMI的二項回歸方程。劉茜等[12]提出，建立多指標多元回歸方程要將推斷 PMI時產(chǎn)生的預(yù)測偏離時間考慮在內(nèi)。Sun等[13]提出利用插值函數(shù)進行分析更符合實際情況。楊明真等[14]將環(huán)境溫度作為參數(shù)，應(yīng)用插值函數(shù)在溫度變化條件下實現(xiàn)了對PMI準確推斷。楊明真等[15]還應(yīng)用混合效應(yīng)模型和雙參數(shù)擬合分析方法準確推斷出PMI。本實驗只有在100%H條件下LDH與Na+的r2>0.9，因此可能存在誤差，可以考慮應(yīng)用插值函數(shù)模型或者混合效應(yīng)模型再進行分析。

綜上所述，高海拔環(huán)境下，H對推斷死亡雄性大鼠PMI有影響，Na+更適用于100%H下的PMI推斷。死亡雄性大鼠玻璃體液內(nèi)的CHE、LDH、Na+濃度隨PMI的延長呈遞減趨勢，可作為推斷PMI的指標。