HPLC法測(cè)定蒙成藥優(yōu)日勒-13中梔子苷的含量

李玉華　姜楠

【摘 要】 目的：建立HPLC法測(cè)定蒙成藥優(yōu)日勒-13中梔子苷的含量。方法：采用Welch Ultimate Plus C18色譜柱（250mm×4.60mm，5μm），柱溫40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)238nm。乙腈-水（9∶91）為流動(dòng)相，流速1.0mL/min。結(jié)果：梔子苷在0.0515～0.927μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，平均回收率為99.01%，RSD為0.83%。結(jié)論：該方法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，操作簡(jiǎn)單，可作為優(yōu)日勒-13中梔子苷含量測(cè)定的方法。

【關(guān)鍵詞】 優(yōu)日勒-13;HPLC法;梔子苷;含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2021）04-0049-03

Abstract：Objective To establish the high performance liquid chromatography （HPLC） method for the determination of Geniposide in Mongolian Yourile-13.Methods The HPLC was carried out with Welch Ultimate Plus C18 using acetonitrile-water （9∶91） as a mobile phase at a flow rate of 1.0mL/min.The detection wavelength was 238 nm and the column temperature was 40℃. Rseults The linear of Geniposide was in the range of 20.26-67.52μg/mL（r=0.9999）.The average recovery was 99.01%（RSD=0.83%）.Conclusion This method is simple， high accuracy and specificity. It can be used for the determination of Geniposide content.

Keywords：Yourile-13; HPLC ; Geniposide; Content determination

優(yōu)日勒-13由梔子、木香等13味藥組成，用于“寶日”病，胃腸痧癥，嘔吐，腹瀉，消化不良，蟲疾等[1]。梔子（Gardenia jasminoides Ellis）是蒙成藥常用藥材，具有解熱鎮(zhèn)痛、抗炎[2]、鎮(zhèn)靜催眠、保肝利膽、防止動(dòng)脈粥樣硬化 [3]，以及抗氧化[4] 和保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)[5]等多種藥理作用。作為臨床常用的蒙藥醫(yī)院制劑，優(yōu)日勒-13療效確切，未見(jiàn)任何不良反應(yīng)發(fā)生。但目前為止，該成藥質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)還停留在1988年版的《內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)》補(bǔ)充本階段，只有簡(jiǎn)單的外觀性狀和檢查項(xiàng)目[6]。建立優(yōu)日勒-13中主要藥效成份梔子苷含量測(cè)定的方法，能有效控制該成藥的內(nèi)在質(zhì)量，為該成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供參考[7]。

1 儀器及材料

1.1 儀器 島津LC-2030C液相色譜儀，島津LC-16A液相色譜儀，LabSolution工作，92SM-202A型電子天平，XS3DU電子天平，KQ5200DE超聲波清洗機(jī)。

1.2 材料 水為高純水，乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純。梔子苷對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110749—201718，含量97.6%;優(yōu)日勒-13樣品來(lái)源如下：樣品1由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院蒙藥制劑室提供，批號(hào)為20191028，樣品2、3由庫(kù)侖蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)分別為20170507和20171102。

2 方法學(xué)考察

2.1 色譜條件[8] Welch Ultimate Plus C18色譜柱（250mm×4.60mm，5μm），Sepax Bio C18色譜柱（250mm×4.60mm，5μm），柱溫40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)238nm。乙腈-水（9∶91）為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，進(jìn)樣量10μL。

2.2 對(duì)照品溶液與供試品溶液配制[9-10] 精密稱取梔子苷對(duì)照品6.252mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得梔子苷對(duì)照品溶液（62.52μg/mL）。

取樣品粉末（過(guò)四號(hào)篩）約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50Hz）30min，放冷，再次稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 取按處方比例制備的不含梔子藥材的陰性對(duì)照供試品，按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對(duì)照色譜圖中在與梔子苷對(duì)照品以及供試品色譜圖相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明該方法專屬性強(qiáng)，其他組分對(duì)梔子苷的測(cè)定無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系 考察精密稱取梔子苷對(duì)照品10.30mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得梔子苷對(duì)照品貯備液（0.1030mg/mL）。精密吸取該貯備液50、100、300、500、600、900μL，分別置于10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述各梯度濃度的對(duì)照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以對(duì)照品峰面積Y為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的對(duì)照的量X為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得到梔子苷回歸方程為：Y=14121X，r=0.9999。結(jié)果表明梔子苷在0.0515～0.927μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 按2.2項(xiàng)下供試品溶液配制方法，精密稱取庫(kù)侖蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)為20171102的樣品1.0218g，配制成精密度試驗(yàn)溶液，精密吸取該溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積。重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積的RSD值為1.13%，表明該方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取庫(kù)侖蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)為20171102的3號(hào)樣品1.0183g，按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法配制穩(wěn)定性試驗(yàn)溶液，室溫放置，分別在0，1，3，6，12，24hr進(jìn)樣，記錄譜圖，測(cè)得峰面積。結(jié)果24h內(nèi)峰面積的RSD值為0.93%，表明該方法提取的樣品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取庫(kù)侖蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)為20171102的3號(hào)樣品6份，每份約1.0g，精密稱定，按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法配制重復(fù)性試驗(yàn)溶液，精密吸取10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果6份平行樣的含量RSD值為1.03%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度及范圍[8] 取已知含量的樣品（庫(kù)侖蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)：20171102，含量為1.4847mg/g）9份，每份約0.05g，精密稱定，置25mL棕色量瓶中，精密加入梔子苷對(duì)照品貯備液（0.1030mg/mL）4.5、9、12mL，按2.2項(xiàng)下供試品溶液配制方法，配制成高、中、低三個(gè)濃度的加標(biāo)回收溶液，精密量取各加標(biāo)回收溶液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。三個(gè)濃度加標(biāo)回收率平均值為99.01%，RSD值為0.83%。表明梔子苷含量在0.75～1.90mg范圍內(nèi)測(cè)得結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

2.9 色譜柱、儀器設(shè)備的耐用性試驗(yàn) 換不同廠家、不同型號(hào)的色譜柱及不同的液相色譜儀，取庫(kù)侖蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)為20171102的3號(hào)樣品，精密稱定，按2.2項(xiàng)下配制樣品溶液，精密吸取該樣品溶液和2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液各10μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品中梔子苷含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

從表中數(shù)據(jù)可以看出，梔子苷的含量變化不大（RSD值0.96%），表明該方法對(duì)不同色譜柱和儀器設(shè)備耐用性良好。

3 樣品含量測(cè)定[11]

分別取3個(gè)廠家提供的優(yōu)日勒-13樣品粉末約1.0g，精密稱定，按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法提取制備樣品溶液，精密吸取10L，注入液相色譜儀，記錄峰面積，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

4 討論

參照《中國(guó)藥典》2015[6]年版一部“梔子”含量測(cè)定項(xiàng)下梔子苷的測(cè)定方法，以乙腈-水（15∶85）為流動(dòng)相，結(jié)果目標(biāo)峰梔子苷與其它干擾組分峰分不開。調(diào)整流動(dòng)相乙腈和水的比例，至乙腈-水（9∶91），此時(shí)目標(biāo)峰梔子苷與其它干擾組分分離較好，保留時(shí)間適宜，理論塔板數(shù)較高。故作為檢測(cè)流動(dòng)相。

成藥粉末以甲醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲提?。üβ?20W，頻率40kHz），為保證梔子苷成分提取完全，實(shí)驗(yàn)中考察了超聲提取15min、30min和60min，結(jié)果梔子苷的含量基本一致（RSD 0.51%），故提取時(shí)間定為30min。

通過(guò)專屬性，精密度，穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)，色譜柱及不同儀器設(shè)備的耐用性考察，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠，可作為優(yōu)日勒-13中梔子苷含量測(cè)定的方法。

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（收稿日期：2020-08-23 編輯：劉斌）