• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    西北某市地下水源真菌種群及多樣性特征分析

    2021-05-21 03:07:00黃廷林
    關(guān)鍵詞:種屬相似性條帶

    任 崴,黃廷林

    (1.西安建筑科技大學(xué) 環(huán)境與市政工程學(xué)院 陜西省環(huán)境工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,陜西 西安 710055;2.河南科技大學(xué) 建筑學(xué)院,河南 洛陽(yáng) 471023)

    飲用水安全問題關(guān)系到人類生命健康[1-2],近年來,隨著檢測(cè)技術(shù)的提高和改進(jìn),飲用水中微生物的安全性受到更多的關(guān)注[3],其中由真菌的繁殖帶來的飲用水污染問題日趨普遍,逐漸受到重視[4].真菌在水源水中的生長(zhǎng)不僅影響到了水體嗅覺[5]和味覺[6]上的不適,使水處理工藝變得復(fù)雜,而且其中致病性及潛在致病性菌的積累容易導(dǎo)致流行性疾病的發(fā)生[7].目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)真菌群落多樣性及其潛在致病性研究多集中于土壤[8]、地表水[9]、自來水[10]、醫(yī)院供水系統(tǒng)[11]等環(huán)境中,而對(duì)地下水源水中真菌污染的研究相對(duì)較少[12].

    可培養(yǎng)微生物通常只占環(huán)境微生物總數(shù)的極小部分,傳統(tǒng)的培養(yǎng)分離方法只能反映出部分的微生物信息[13],很難反映出環(huán)境中微生物多樣性的原始狀態(tài)[14].目前利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-變性梯度凝膠電泳(polymerase chain reaction-denature gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)這一分子生物學(xué)方法[15]對(duì)水環(huán)境中的真菌多樣性研究已有報(bào)道,邸詩(shī)雨等[9]對(duì)西安市典型景觀水體水質(zhì)與微生物種群結(jié)構(gòu)多樣性研究發(fā)現(xiàn)不同水體真菌菌群結(jié)構(gòu)存在明顯差異,莖點(diǎn)霉屬(Phomasp.)真菌是分布在城市景觀水體中的優(yōu)勢(shì)種群.王風(fēng)芹等[16]對(duì)賈魯河水體微生物菌群結(jié)構(gòu)季節(jié)動(dòng)態(tài)變遷研究發(fā)現(xiàn)賈魯河水體和底泥中細(xì)菌數(shù)量顯著高于真菌和放線菌數(shù)量,水體中各類群微生物數(shù)量夏秋季高于冬春季,而底泥中細(xì)菌、真菌和放線菌數(shù)量春夏季略高于秋冬季.宣淮翔等[17]研究了太湖不同湖區(qū)水生真菌多樣性發(fā)現(xiàn)子囊菌門(Ascomycota)和擔(dān)子菌門(Basidiomycota)為優(yōu)勢(shì)種群,聚類及典型相關(guān)分析表明,太湖不同湖區(qū)水生真菌多樣性存在差異,這與湖區(qū)間不同的營(yíng)養(yǎng)水平、風(fēng)浪擾動(dòng)狀況等因素有關(guān).張利蘭[18]對(duì)豫北黃河故道、山東黃河三角洲和河北白洋淀三個(gè)不同類型的濕地水體研究發(fā)現(xiàn)真菌主要分布?jí)鼐V(Chytridiomycetes 16.2%),黑粉菌綱(Ustilaginomycetes 5.4%),接合菌綱(Zygomycetes 2.7%)和繡菌綱(Urediniomycetes 21.6%),三個(gè)濕地共有類群為Urediniomycetes,但分布在其不同的種屬.

    西北某市屬暖溫帶半濕潤(rùn)大陸性季風(fēng)氣候,夏季炎熱多雨,每到夏季高溫時(shí)節(jié),其常規(guī)水廠的地下水源水中真菌會(huì)大量繁殖,形成以絲狀菌、放線菌等為主的微生物絮體,堵塞管道,增大水處理設(shè)施的負(fù)荷.本研究利用PCR-DGGE分子指紋圖譜技術(shù)探究供水系統(tǒng)中真菌種屬多樣性、變化規(guī)律、優(yōu)勢(shì)種屬等進(jìn)行了對(duì)比分析,為進(jìn)一步研究地下水源井中真菌污染控制等方面提供依據(jù).

    1 材料與方法

    1.1 采樣點(diǎn)概況

    課題組研究對(duì)象西北某市北郊地下水源地共有54口井,常態(tài)化運(yùn)行的有32口井[19].本研究在選取其中12個(gè)具有代表性的地下水源井為研究對(duì)象(表1).

    表1 12個(gè)水源井概況

    1.2 樣品采集

    2014年6月采集12個(gè)地下水樣品,每個(gè)水樣均取5 L用于水質(zhì)分析和微生物群落結(jié)構(gòu)分析,全程無菌操作.

    1.3 水質(zhì)指標(biāo)測(cè)定

    水質(zhì)指標(biāo)測(cè)定參照環(huán)保部出版的《水與廢水監(jiān)測(cè)方法》第四版中的標(biāo)準(zhǔn)方法,詳見表2.

    表2 水質(zhì)分析方法及所用儀器

    1.4 水體微生物總DNA提取

    所用試劑盒為E.Z.N.A.?water DNA Kit(D5525),美國(guó)OMEGA生物公司.主要步驟參考試劑盒使用說明書及王帥[20]論文中的方法

    1.5 巢式PCR擴(kuò)增和DGGE分析

    實(shí)驗(yàn)中所用引物設(shè)計(jì)及擴(kuò)增程序參考文獻(xiàn)[9, 21],詳見表3.DGGE圖譜采用Quantity One軟件分析.

    表3 真菌巢式PCR引物及條件

    1.6 克隆測(cè)序

    參照WU等的方法[22].

    1.7 數(shù)據(jù)分析

    Quantity One分析軟件(Version 4.3.1,美國(guó)Bio-Rad公司)分析指紋圖譜.軟件分析所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行真菌多樣性分析.

    真菌的多樣性水平采用如下指數(shù)考查:

    Shannon多樣性指數(shù)

    H=-∑PilnPi

    在盾構(gòu)完成穿越橋梁樁基后,對(duì)穿越高鐵影響范圍內(nèi)的管片,利用管片上的注漿孔自下而上進(jìn)行二次注漿,漿液采取快速凝結(jié)的雙液漿,注漿壓力不大于0.4MPa,以確保管片壁后空隙填充飽滿。

    Pielou均勻度指數(shù)

    J=H/lnS

    2 結(jié)果與分析

    2.1 水質(zhì)特征

    12個(gè)地下水水質(zhì)檢測(cè)數(shù)據(jù)見表4.由數(shù)據(jù)可以看出,12個(gè)水樣的水溫在18.4~20.8之間,整體變化不大.pH值顯示水體呈弱堿性(8.38~8.78),溶解氧濃度在8.0~10.5 mg/L之間,均在水環(huán)境正常范圍內(nèi).

    表4 12個(gè)水體水質(zhì)指標(biāo)分析

    根據(jù)地下水環(huán)境質(zhì)量(GB/T 14848-9)標(biāo)準(zhǔn)值(Ⅲ類)分析,12個(gè)水樣中Fe(7,34號(hào)井)和Mn(16,37,39號(hào)井)水樣超標(biāo).

    2.2 DGGE 指紋圖譜分析

    如圖1所示,DGGE圖譜中的條帶清晰,說明所選擇的生物樣本合適,樣本的稀釋梯度及DNA濃度滿足檢測(cè)的要求.在DGGE圖譜中,每個(gè)泳道對(duì)應(yīng)一個(gè)環(huán)境樣本,每個(gè)泳道中不同位置的光亮條帶代表一種真菌種屬,位置不同真菌種屬不同.多個(gè)泳道的同一位置的條帶可說明該位置的真菌種屬存在于每個(gè)環(huán)境樣本中,通過上述分析以及相關(guān)軟件根據(jù)條帶亮度和數(shù)量所賦值計(jì)算相應(yīng)的多樣性指數(shù).

    圖1泳道比較圖中的百分?jǐn)?shù)(%)是其余泳道與第7泳道結(jié)構(gòu)的相似百分比.

    如圖1所示:12個(gè)樣品通過巢式PCR-DGGE共分離出25個(gè)條帶,12個(gè)環(huán)境樣本的特征有相同點(diǎn),也有不同,例如條帶6、14和16是12個(gè)樣品共有條帶,條帶23是第10(1)樣品的特有條帶.這說明真菌種屬分布有一定的規(guī)律,DGGE圖譜中,不同環(huán)境樣本所得的條帶數(shù)目并不相同,但對(duì)應(yīng)的真菌種屬有相同之處,說明一些真菌是多個(gè)環(huán)境樣本所共有的,而一些環(huán)境樣本中的某一條帶有唯一性,說明這個(gè)條帶對(duì)應(yīng)的真菌種屬是別的環(huán)境樣本中所沒有的.

    圖1 不同樣品真菌DGGE圖譜及泳道比較圖

    2.3 真菌群落結(jié)構(gòu)相似性(Cs)分析

    真菌群落結(jié)構(gòu)相似性分析可以得出,34號(hào)井和36A號(hào)井樣品的相似度最高,達(dá)63.3%,說明這兩個(gè)樣品的微生物群落結(jié)構(gòu)相似程度比較高,而7號(hào)井和16號(hào)井樣品的相似度最低,為20.4%.通過UPGMA算法對(duì)不同樣點(diǎn)真菌菌群落結(jié)構(gòu)相似性進(jìn)行聚類分析,結(jié)果如表4所示,由圖可知當(dāng)Cs小于0.4時(shí),樣品分為4大族:7號(hào)井樣品單獨(dú)為一族,10(1)、41A、43和46號(hào)井樣品為第二族,其余樣品為第三族.不同樣品比較,相鄰樣品真菌群落相似性較高,聚類位置相近.

    表6 樣品的相似性系數(shù)分析

    2.4 真菌DGGE 條帶基因片段測(cè)序分析

    通過圖譜分析,選擇環(huán)境樣本中的真菌種屬最多作為目標(biāo)條帶,編號(hào),然后進(jìn)行割膠、測(cè)序.通過測(cè)序,將所測(cè)序結(jié)果與NCBI庫(kù)進(jìn)行表,相似度最高的已知真菌種屬極大可能就是該條帶對(duì)應(yīng)的真菌種屬[8],詳見表7.

    圖2 不同取樣點(diǎn)真菌群落結(jié)構(gòu)相似性的聚類分析

    表7 DGGE條帶的序列比對(duì)分析

    由表7可以看出,6條序列與GenBank中序列的最大相似度都在97%以上.

    其中尖刀鏈胞菌(Fusarium oxysporum)和暗球腔菌(Phaeosphaeria fuckelii)為12個(gè)水樣中共同存在的真菌種屬.

    2.5 真菌與環(huán)境變量之間的相關(guān)關(guān)系

    地下水體中的絲狀真菌來源及生長(zhǎng)繁殖是一個(gè)復(fù)雜的過程,可能受到來至于氣候、降水、溫度、地表環(huán)境及人類活動(dòng)等方面的影響.但從另一方面分析,水體中的某些水質(zhì)指標(biāo)及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可能是影響其在水體中生長(zhǎng)繁殖的重要方面.

    利用Excel 2003、Canaco 4.5等軟件分析地下水源井中的真菌與常規(guī)水質(zhì)指標(biāo)之間的相關(guān)關(guān)系,結(jié)果如圖3所示.從圖3我們可以看出,真菌的生長(zhǎng)和常規(guī)水質(zhì)指標(biāo)DO、pH、溫度、濁度、鐵、錳、TN、TP、氨氮、堿度、COD、TOC存在一定的相關(guān)性.不同種屬的真菌與環(huán)境變量的相關(guān)性并不相同.pH值和溫度和對(duì)鐮刀菌屬(Fusarium.sp)、青霉屬(Penicillium.sp)的生長(zhǎng)相關(guān)性較大.

    圖3 真菌與環(huán)境變量之間的相關(guān)關(guān)系

    3 討論

    據(jù)推測(cè),全世界的真菌種類約150萬(wàn)種,目前已經(jīng)得到鑒定的(包括陸生、水生等約80 000 種)僅占其全部種類的5%左右[23].其中絕大部分不能用傳統(tǒng)培養(yǎng)分離的方法進(jìn)行研究.本文利用PCR-DGGE這一無需分離培養(yǎng)微生物的技術(shù),來研究西北某市地下水源井水中真菌種群的分布特征.但該方法對(duì)于優(yōu)勢(shì)類群的一般只能鑒定到目或科,缺乏更為詳細(xì)的分類學(xué)信息,有一定的局限性[17].

    西北某市地下不同的水源井中真菌多樣性指數(shù)、豐富度指數(shù)和均勻度指數(shù)分別為0.89~1.33、9~25 和0.405~0.460,表明該地區(qū)地真菌種類較為豐富,這與Elke等[24]人在對(duì)德國(guó)地下飲用水源的研究結(jié)論類似.影響水體中的真菌繁殖的因素很多,如溫度及碳、氮[25]等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[17]有關(guān).地下水是一個(gè)相對(duì)封閉的環(huán)境,水源的補(bǔ)給相對(duì)復(fù)雜,由圖1 DGGE圖譜可以看出,不同的水源井水中既存在著共同的真菌種屬也有各自特異的種屬,說明不同的位置對(duì)其真菌種屬有一定的影響,張利蘭[18]對(duì)自然濕地水體真菌群落結(jié)構(gòu)研究表明地理位置對(duì)其真細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的分布是有明顯的影響的.

    通過PCR-DGGE技術(shù)得出各樣品間的真菌群落相似性系數(shù)不盡相同,34號(hào)井和36A號(hào)井樣品的相似度最高,達(dá)63.3%,說明這兩個(gè)樣品的微生物群落結(jié)構(gòu)相似程度比較高,而7號(hào)井和16號(hào)井樣品的相似度最低,為20.4%.地下水的補(bǔ)給、循環(huán)和流動(dòng)是一個(gè)非常復(fù)雜的過程,不同水樣之間的差異可能和其所處的不同的含水層有關(guān).

    同時(shí),通過克隆測(cè)序得出的6條序列與GenBank中序列的最大相似度都在97%以上.其中尖刀鏈胞菌(Fusarium oxysporum)和暗球腔菌(Phaeosphaeria fuckelii)為12個(gè)樣品中共同存在的真菌種屬,另外,有相當(dāng)一部分不可培養(yǎng)真菌存在于不同的水樣中,并且尖刀鏈胞菌(Fusarium oxysporum)和暗球腔菌(Phaeosphaeria fuckelii)在純培養(yǎng)試驗(yàn)中并未培養(yǎng)出(文中未列出純培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果).這也從另一方面佐證了PCR-DGGE技術(shù)作為研究微生物菌落組成及演化規(guī)律的有效方法[26].

    地下水體中的絲狀真菌來源及生長(zhǎng)繁殖是一個(gè)復(fù)雜的過程,可能受到來至于氣候、降水、溫度、地表環(huán)境及人類活動(dòng)等方面的影響.但從另一方面分析,水體中的某些水質(zhì)指標(biāo)及營(yíng)養(yǎng)條件可能是影響其在水體中生長(zhǎng)繁殖的重要方面[25].

    利用Excel 2003、Canaco 4.5等軟件分析地下水源井中的真菌與常規(guī)水質(zhì)指標(biāo)之間的相關(guān)關(guān)系,結(jié)果如圖3所示.從圖3可以看出,真菌的生長(zhǎng)和常規(guī)水質(zhì)指標(biāo)DO、pH、溫度、濁度、鐵、錳、TN、TP、氨氮、堿度、COD、TOC存在一定的相關(guān)性.不同種屬的真菌與環(huán)境變量的相關(guān)性并不相同.pH值和溫度和對(duì)鐮刀菌屬(Fusarium.sp)、青霉屬(Penicillium.sp)的生長(zhǎng)相關(guān)性較大.Hamid Moh等人[25]的研究發(fā)現(xiàn),真菌在C∶N比為1∶1時(shí)生長(zhǎng)最為迅速,此外,pH值為5.5~6.5與其他pH值相比,顯示出最佳的真菌生長(zhǎng)條件.

    盡管PCR-DGGE技術(shù)對(duì)水處理系統(tǒng)微生物群落結(jié)構(gòu)演替規(guī)律的研究有重要意義.但PCR-DGGE技術(shù)檢測(cè)的DNA片段受片段長(zhǎng)度的限制,對(duì)較長(zhǎng)的片段分離率下降,限制了用于系統(tǒng)發(fā)育分析和探針的序列信息量[27].不同類型真菌種群的rDNA有著相同的遷移行為,一條DGGE帶可能代表幾種菌,也可能不同的幾條DGGE帶代表同一種菌.另一方面,由于PCR、DGGE方法的靈敏度所造成的不能確定代謝活性、細(xì)菌數(shù)量和基因表達(dá)的水平等也是該技術(shù)的局限性.

    4 結(jié)論

    (1)西北某市地下水中真菌種類較為豐富,不同的水源井中既存在著共同的真菌種屬也有各自特異的種屬,真菌多樣性指數(shù)、豐富度指數(shù)和均勻度指數(shù)分別為0.89~1.33、9~25 和0.405~0.460.

    (2)對(duì)不同樣點(diǎn)真菌群落相似性進(jìn)行比較研究得出其相似性系數(shù)存在著一定的關(guān)系,相鄰樣點(diǎn)間相似性較高.顯示優(yōu)勢(shì)類群主要分布于隱球菌屬(Cryptococcussp.)、暗球腔菌屬(Pluteussp.)、鐮刀菌屬(Fusariumsp.)、青霉屬(Penicilliumsp.)四種類型真菌普遍存在于地下水源井中,同時(shí)也是地下水真菌中的優(yōu)勢(shì)種類.

    (3)真菌的生長(zhǎng)和常規(guī)水質(zhì)指標(biāo)DO、pH、溫度、濁度、鐵、錳、TN、TP、氨氮、堿度、COD、TOC存在一定的相關(guān)性.不同種屬的真菌與環(huán)境變量的相關(guān)性并不相同.pH值和溫度和對(duì)鐮刀菌屬(Fusariumsp.)、青霉屬(Penicilliumsp.)的生長(zhǎng)相關(guān)性較大.

    (4)研究為地下水真菌污染控制提供了一定的理論依據(jù).

    猜你喜歡
    種屬相似性條帶
    一類上三角算子矩陣的相似性與酉相似性
    淺析當(dāng)代中西方繪畫的相似性
    石斛堿在體外肝微粒體代謝的種屬差異研究
    平衡透析法考察豆腐果苷血漿蛋白結(jié)合率:種屬差異研究
    低滲透黏土中氯離子彌散作用離心模擬相似性
    厚樸提取物HK-1在5個(gè)種屬肝微粒體中的代謝
    中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:07:30
    基于條帶模式GEOSAR-TOPS模式UAVSAR的雙基成像算法
    基于 Savitzky-Golay 加權(quán)擬合的紅外圖像非均勻性條帶校正方法
    基于深層神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(DNN)的漢語(yǔ)方言種屬語(yǔ)音識(shí)別
    一種基于MATLAB的聲吶條帶圖像自動(dòng)拼接算法
    海岸工程(2014年4期)2014-02-27 12:51:28
    一本色道久久久久久精品综合| 国产精品av视频在线免费观看| 久久99热6这里只有精品| 一本色道久久久久久精品综合| 国产免费一级a男人的天堂| 精品人妻一区二区三区麻豆| 一区二区三区免费毛片| 五月伊人婷婷丁香| 伦精品一区二区三区| 一级av片app| 青青草视频在线视频观看| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲,欧美,日韩| 一级黄片播放器| 亚洲伊人久久精品综合| 在线精品无人区一区二区三 | 少妇高潮的动态图| 精品一区二区三区视频在线| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美另类一区| 黄色一级大片看看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 嫩草影院新地址| 国产精品一区二区性色av| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 老司机影院成人| 亚洲国产欧美人成| 久久久久久九九精品二区国产| 联通29元200g的流量卡| 男人和女人高潮做爰伦理| 深爱激情五月婷婷| 国产精品偷伦视频观看了| 国产午夜精品一二区理论片| 国产中年淑女户外野战色| 欧美一区二区亚洲| 成人国产av品久久久| 亚洲精品第二区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 偷拍熟女少妇极品色| 中文欧美无线码| 蜜臀久久99精品久久宅男| 一个人看的www免费观看视频| 欧美 日韩 精品 国产| 国精品久久久久久国模美| 精品久久久久久电影网| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲天堂国产精品一区在线| 婷婷色综合www| 干丝袜人妻中文字幕| 九色成人免费人妻av| 欧美日韩视频精品一区| 欧美三级亚洲精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品人妻一区二区三区麻豆| 韩国高清视频一区二区三区| 最后的刺客免费高清国语| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产一区二区三区综合在线观看 | 美女主播在线视频| 国产成人精品久久久久久| 国产欧美日韩精品一区二区| 热re99久久精品国产66热6| 欧美zozozo另类| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲av男天堂| 亚洲熟女精品中文字幕| 免费观看在线日韩| 搞女人的毛片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 91精品国产九色| 国模一区二区三区四区视频| 国产男女内射视频| 日本午夜av视频| 在线看a的网站| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 日本一二三区视频观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 国产乱人视频| 欧美最新免费一区二区三区| 波多野结衣巨乳人妻| 99久久人妻综合| 五月天丁香电影| 在线观看美女被高潮喷水网站| 日韩伦理黄色片| 国产精品福利在线免费观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产精品人妻久久久久久| 高清在线视频一区二区三区| 国产精品国产三级国产专区5o| 嫩草影院入口| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲精品,欧美精品| av福利片在线观看| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲va在线va天堂va国产| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产精品久久久久久久电影| 99re6热这里在线精品视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美丝袜亚洲另类| 日本欧美国产在线视频| 少妇的逼好多水| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲精品aⅴ在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲人成网站在线播| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲国产精品成人综合色| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲国产精品专区欧美| 2022亚洲国产成人精品| 成人亚洲精品一区在线观看 | 精品久久久久久久久av| 精品一区二区免费观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 麻豆久久精品国产亚洲av| 大陆偷拍与自拍| 免费av观看视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 成年av动漫网址| 干丝袜人妻中文字幕| 国产v大片淫在线免费观看| 性色av一级| 美女cb高潮喷水在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产男女内射视频| 日韩精品有码人妻一区| 交换朋友夫妻互换小说| 午夜福利网站1000一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 国产精品人妻久久久久久| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 大片免费播放器 马上看| 91在线精品国自产拍蜜月| 久久久久久国产a免费观看| 精品久久久久久电影网| 亚洲欧洲国产日韩| 国产精品成人在线| 边亲边吃奶的免费视频| 99久久九九国产精品国产免费| 久久久欧美国产精品| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲国产色片| 欧美激情在线99| 国产高清三级在线| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美zozozo另类| 超碰av人人做人人爽久久| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 美女高潮的动态| 丝袜脚勾引网站| 国模一区二区三区四区视频| 色视频在线一区二区三区| 搡老乐熟女国产| 成人国产av品久久久| 国产男女超爽视频在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 青春草视频在线免费观看| 成年av动漫网址| 97精品久久久久久久久久精品| 午夜福利视频1000在线观看| 成人无遮挡网站| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 九色成人免费人妻av| 亚洲欧洲国产日韩| 国内精品美女久久久久久| 国产大屁股一区二区在线视频| 99热这里只有精品一区| 热re99久久精品国产66热6| 国产亚洲一区二区精品| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 成人二区视频| 九九爱精品视频在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 久久久久性生活片| 久久精品国产亚洲网站| 18禁动态无遮挡网站| 中文字幕亚洲精品专区| 极品教师在线视频| 晚上一个人看的免费电影| 国产 精品1| 久久精品国产亚洲网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 天堂俺去俺来也www色官网| 最近的中文字幕免费完整| 欧美3d第一页| 国产亚洲一区二区精品| 高清毛片免费看| 国产综合懂色| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品国产av在线观看| 九草在线视频观看| 大陆偷拍与自拍| 日本黄大片高清| 久久国产乱子免费精品| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 日本黄色片子视频| 欧美 日韩 精品 国产| 久久久a久久爽久久v久久| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲欧美日韩东京热| 一个人看的www免费观看视频| 精品熟女少妇av免费看| 大话2 男鬼变身卡| 伦精品一区二区三区| 日韩视频在线欧美| 亚洲丝袜综合中文字幕| 欧美人与善性xxx| 国产黄片美女视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久99精品国语久久久| 国产精品人妻久久久影院| 听说在线观看完整版免费高清| 久久国内精品自在自线图片| 天堂俺去俺来也www色官网| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲人成网站高清观看| 国产伦在线观看视频一区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| freevideosex欧美| 亚洲美女视频黄频| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久97久久精品| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 超碰97精品在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 99精国产麻豆久久婷婷| 日韩人妻高清精品专区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 少妇人妻久久综合中文| 九色成人免费人妻av| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产精品熟女久久久久浪| 99久国产av精品国产电影| 干丝袜人妻中文字幕| 乱码一卡2卡4卡精品| 成人美女网站在线观看视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 内射极品少妇av片p| 在线看a的网站| 欧美bdsm另类| 国产av不卡久久| 毛片一级片免费看久久久久| 少妇熟女欧美另类| 乱码一卡2卡4卡精品| 尾随美女入室| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 五月玫瑰六月丁香| 一区二区三区四区激情视频| 成人无遮挡网站| 成年免费大片在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| av天堂中文字幕网| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 午夜福利在线在线| 大码成人一级视频| 嫩草影院入口| 色视频www国产| 成人午夜精彩视频在线观看| 免费av不卡在线播放| 一区二区三区精品91| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 欧美一区二区亚洲| 国产黄色视频一区二区在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 伦精品一区二区三区| 欧美精品一区二区大全| 国产一区亚洲一区在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 97精品久久久久久久久久精品| 国产综合懂色| 内射极品少妇av片p| 亚洲欧美日韩东京热| 久久久亚洲精品成人影院| 国产av不卡久久| av国产久精品久网站免费入址| 香蕉精品网在线| 久久久欧美国产精品| 色网站视频免费| 男女啪啪激烈高潮av片| 日韩制服骚丝袜av| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日韩亚洲欧美综合| 伊人久久国产一区二区| 国产毛片在线视频| 中文天堂在线官网| 99久久中文字幕三级久久日本| 午夜福利视频精品| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 中文字幕久久专区| 国产伦理片在线播放av一区| 身体一侧抽搐| 亚洲成人中文字幕在线播放| 丰满乱子伦码专区| 毛片女人毛片| 久久久久久久国产电影| 国产毛片在线视频| 日韩人妻高清精品专区| 五月玫瑰六月丁香| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲av不卡在线观看| 色网站视频免费| 一区二区三区精品91| 一级毛片久久久久久久久女| 一级毛片我不卡| 国产一级毛片在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产成人精品久久久久久| 日韩制服骚丝袜av| av卡一久久| 中文字幕免费在线视频6| kizo精华| 男人舔奶头视频| 一级毛片电影观看| 亚洲国产欧美在线一区| 一区二区三区四区激情视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 黄色配什么色好看| 亚洲av中文av极速乱| 最近最新中文字幕免费大全7| 校园人妻丝袜中文字幕| a级毛色黄片| av专区在线播放| 中文字幕av成人在线电影| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 亚洲国产精品999| 男人舔奶头视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久久久性生活片| 久久久精品免费免费高清| 亚洲av欧美aⅴ国产| 97超视频在线观看视频| 成人无遮挡网站| av黄色大香蕉| 国产精品久久久久久久电影| 五月玫瑰六月丁香| 春色校园在线视频观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 三级经典国产精品| 少妇被粗大猛烈的视频| 天天躁日日操中文字幕| 国产在线一区二区三区精| av.在线天堂| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲精品日本国产第一区| 国产一区有黄有色的免费视频| 永久免费av网站大全| 激情五月婷婷亚洲| 日本黄色片子视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 精华霜和精华液先用哪个| 综合色丁香网| 国产一级毛片在线| 国产欧美亚洲国产| 久久久久久伊人网av| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲美女搞黄在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 国产一区二区三区综合在线观看 | 欧美高清性xxxxhd video| 内射极品少妇av片p| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 97热精品久久久久久| 涩涩av久久男人的天堂| 身体一侧抽搐| 国产高清国产精品国产三级 | 韩国av在线不卡| 内射极品少妇av片p| 美女主播在线视频| 性色avwww在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 只有这里有精品99| 亚洲色图综合在线观看| 在线观看人妻少妇| 午夜福利高清视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产爽快片一区二区三区| av天堂中文字幕网| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲欧美日韩东京热| 日本午夜av视频| 国产在视频线精品| 日韩视频在线欧美| 日日啪夜夜撸| 精品少妇久久久久久888优播| 国产精品久久久久久精品古装| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲av在线观看美女高潮| 国产av码专区亚洲av| xxx大片免费视频| 水蜜桃什么品种好| 天天一区二区日本电影三级| www.色视频.com| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲欧美精品专区久久| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产91av在线免费观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲精品色激情综合| 最近的中文字幕免费完整| 日韩,欧美,国产一区二区三区| av免费在线看不卡| 下体分泌物呈黄色| 尾随美女入室| 亚洲欧洲国产日韩| 下体分泌物呈黄色| 欧美高清成人免费视频www| 哪个播放器可以免费观看大片| 一个人观看的视频www高清免费观看| videos熟女内射| 交换朋友夫妻互换小说| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 中文字幕制服av| 两个人的视频大全免费| 午夜免费鲁丝| 国产免费又黄又爽又色| 欧美日韩在线观看h| 国产在视频线精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 日韩av免费高清视频| 日本三级黄在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产高清三级在线| 2021天堂中文幕一二区在线观| 日韩欧美精品免费久久| 美女被艹到高潮喷水动态| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日韩欧美精品免费久久| 久久久精品免费免费高清| av国产免费在线观看| 禁无遮挡网站| 亚洲国产精品999| 亚州av有码| 成人二区视频| 身体一侧抽搐| 久久久久久伊人网av| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美人与善性xxx| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 又爽又黄a免费视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 插阴视频在线观看视频| 亚洲国产精品999| av免费在线看不卡| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 视频区图区小说| 最近的中文字幕免费完整| 高清午夜精品一区二区三区| 久久久久久久精品精品| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99热国产这里只有精品6| 久久久色成人| 久久亚洲国产成人精品v| 男女啪啪激烈高潮av片| 91久久精品国产一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 欧美xxⅹ黑人| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 搞女人的毛片| 国国产精品蜜臀av免费| 高清毛片免费看| 国产精品成人在线| 热99国产精品久久久久久7| 白带黄色成豆腐渣| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 男女那种视频在线观看| 精品久久久久久久久亚洲| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产精品一区二区在线观看99| 欧美性感艳星| 日韩一区二区视频免费看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲国产成人一精品久久久| 日韩av不卡免费在线播放| 禁无遮挡网站| 欧美最新免费一区二区三区| 免费大片18禁| 波多野结衣巨乳人妻| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产精品一二三区在线看| 国产有黄有色有爽视频| 国产黄片视频在线免费观看| 国产在线男女| 亚洲国产精品专区欧美| 欧美日韩亚洲高清精品| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产片特级美女逼逼视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 午夜免费鲁丝| 国产午夜精品一二区理论片| 在线观看三级黄色| 国产大屁股一区二区在线视频| 99热国产这里只有精品6| 麻豆乱淫一区二区| 中文字幕av成人在线电影| 免费观看的影片在线观看| 女人久久www免费人成看片| 超碰av人人做人人爽久久| 国产又色又爽无遮挡免| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产亚洲5aaaaa淫片| 熟女人妻精品中文字幕| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 91精品伊人久久大香线蕉| 不卡视频在线观看欧美| 嫩草影院精品99| 一级毛片aaaaaa免费看小| 中国三级夫妇交换| 亚洲美女搞黄在线观看| av国产免费在线观看| 少妇熟女欧美另类| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲欧美清纯卡通| 成年版毛片免费区| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美日本视频| 丰满乱子伦码专区| 联通29元200g的流量卡| 国产成年人精品一区二区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久精品国产自在天天线| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 水蜜桃什么品种好| 麻豆久久精品国产亚洲av| 日本一二三区视频观看| 国产高清不卡午夜福利| 欧美zozozo另类| 国产探花极品一区二区| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲人成网站在线观看播放| 日韩av免费高清视频| 国产高清三级在线| 精品久久久久久电影网| 中文字幕亚洲精品专区| av免费观看日本| 国产一级毛片在线| 国产精品无大码| 女人被狂操c到高潮| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 22中文网久久字幕| 国产美女午夜福利| 男女啪啪激烈高潮av片| 婷婷色综合大香蕉| 欧美成人精品欧美一级黄| 日本色播在线视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 国产免费视频播放在线视频| 国产探花极品一区二区| 一区二区三区四区激情视频| 不卡视频在线观看欧美| 观看美女的网站| 久久久久久久久久成人| 天美传媒精品一区二区| 在线精品无人区一区二区三 | 精品午夜福利在线看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲欧洲国产日韩| 免费黄网站久久成人精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 18禁动态无遮挡网站| 免费看a级黄色片| 韩国av在线不卡| 日韩人妻高清精品专区| 国产 精品1| 边亲边吃奶的免费视频| 国产精品一区www在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 在现免费观看毛片| 我的老师免费观看完整版| 日韩亚洲欧美综合| 男的添女的下面高潮视频| 少妇 在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 午夜激情福利司机影院| 男人舔奶头视频| 国产乱来视频区| 久久国产乱子免费精品| 久久久久久久大尺度免费视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产精品av视频在线免费观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 精品久久久久久电影网| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 免费黄频网站在线观看国产| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产探花在线观看一区二区| 激情五月婷婷亚洲| 尾随美女入室| 国产高清有码在线观看视频| 少妇高潮的动态图|