支氣管肺炎患兒T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞水平與疾病嚴(yán)重程度關(guān)系

肖凌云，慕珂珂，魏曉杰

（中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊第九八八醫(yī)院檢驗科，河南 鄭州450007）

小兒支氣管肺炎是臨床兒科常見的呼吸道疾病，其病癥具有高發(fā)病率和高死亡率的特征，會嚴(yán)重影響到患兒身體健康正常發(fā)育。小兒支氣管肺炎的致病因素多與患兒自身器官尚未發(fā)育完善和免疫功能低下感染細(xì)菌、支原體等所導(dǎo)致，病情發(fā)展嚴(yán)重時會對患兒的生命安全造成嚴(yán)重威脅[1]。普通支氣管肺炎的病情較輕,在發(fā)展成重癥支氣管肺炎病情會快速進(jìn)展，累及到多個臟器，治療的療效會欠佳。對小兒支氣管肺炎的患兒在早期進(jìn)行診斷進(jìn)行及時的合理治療對患者的預(yù)后有著重要意義。根據(jù)對小兒支氣管肺炎的發(fā)病機制進(jìn)行研究，目前認(rèn)為除了外來病原體的直接侵害與患者的機體免疫所相關(guān)，患兒自身的免疫系統(tǒng)、免疫功能所發(fā)育尚未健全才是小兒支氣管肺炎發(fā)展的重要原因[2]。對機體細(xì)胞免疫水平進(jìn)行分析判斷的重要指標(biāo)就是對淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測,對當(dāng)前機體的免疫狀態(tài)、功能可進(jìn)行準(zhǔn)確反映[3]。對淋巴細(xì)胞亞群的檢測采用流式細(xì)胞術(shù)，其具有敏感、特異、高通量、單細(xì)胞分析、多參數(shù)等優(yōu)點。本研究對T 淋巴細(xì)胞亞群與NK 細(xì)胞在小兒支氣管肺炎中的變化及意義進(jìn)行探討，選取了2015 年2 月-2019 年8月我院收治的80 例支氣管肺炎患者的病例進(jìn)行回顧性研究分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2015 年 2 月-2019 年 8 月我院收治的80 例支氣管肺炎患兒作為研究對象，分別為普通肺炎組與ICU 重癥肺炎組。普通肺炎組53 例患兒，男 32 例，女 21 例，年齡為 1～8 歲，平均年齡為 4.63±2.75 歲，支氣管肺炎病程為 1～7 天，平均病程為4.73±2.64 天，臨床表現(xiàn)：發(fā)熱48 例、咳嗽 50 例、啰音 45 例、氣喘 47 例、肺部 X 線陰影51 例 。重癥肺炎組 27 例患兒,男 16 例，女 11 例，年齡為 1～8 歲，平均年齡為 4.82±2.51 歲，支氣管肺炎病程為 1～15 天，平均病程為 5.16±3.01 天，臨床表現(xiàn)：發(fā)熱 26 例、咳嗽 25 例、啰音 25 例、氣喘24 例、肺部X 線陰影27 例；一般資料經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，計算結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ⑴所有均病患符合《實用兒科學(xué)》中對小兒支氣管肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。⑵均為近兩周無感染史患兒。⑶均經(jīng)胸部X 線檢查確診。⑷家屬均簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴于1 個月內(nèi)存在免疫藥物治療史。⑵合并患有較為嚴(yán)重肝腎系統(tǒng)、 心力衰竭障礙、先天性免疫系統(tǒng)障礙的患兒。⑶合并患有其他器質(zhì)性病變及嚴(yán)重應(yīng)激狀態(tài)。

1.3 方法 兩組患者均于入院后空腹采用真空抗凝管外周抽取靜脈血。每例患者抽取的血液標(biāo)本對應(yīng)兩支流式專用管，編號A、B。將試劑CD3/CD8/CD45/CD4 20μL，與抗凝全血混勻 50μL；將 CD3／CD1 6+56／CD45／CD19 20μL 加入 B 試管中，與抗凝全血混勻50μL，均置于螺旋振蕩器上再次進(jìn)行充分混勻。放置于室溫（20～25℃）避光處反應(yīng)15 分鐘。將1X FACS 溶血素加入每根試劑管0.45ml，混勻后放置室溫避光處反應(yīng)15min, 進(jìn)行離心分離。將生理鹽水0.5ml 加入試管中混勻，放入流式細(xì)胞檢測儀即可檢測出患者NK 細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞。

1.4 觀察指標(biāo) ⑴對兩組患者進(jìn)行外周血T 淋巴細(xì)胞亞群變化檢測。⑵對兩組患者進(jìn)行外周血NK細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞變化檢測。⑶對兩組患者臨床不適癥狀發(fā)生持續(xù)時間進(jìn)行比較。

1.5 統(tǒng)計方法：本試驗采取統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS21.0 進(jìn)行統(tǒng)計分析，其中計數(shù)資料用（%）表示，技數(shù)+資料采用 χ2檢驗，計量資料采取“（±s）”表示，血糖值為計量資料，用t 檢驗，檢驗水平為0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料比較 對普通肺炎組與重癥肺炎組年齡、性別、病程一般資料進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者一般資料比較（±s）[n(%)]

表1 兩組患者一般資料比較（±s）[n(%)]

組別 n 病程（天） 年齡(歲)性別男女臨床表現(xiàn)發(fā)熱 咳嗽 氣喘 啰音 肺部X 線陰影普通肺炎組重癥肺炎組t P 53 27- -16 19 0.009 0.923 25 22 4.73±2.64 5.16±3.01 0.656 0.513 4.63±2.75 4.82±2.51 0.712 0.478 48 26 0.847 0.358 50 25 0.093 0.760 47 25 0.304 0.581 45 24 0.239 0.625 51 27 1.045 0.307

2.2 比較兩組患者T 淋巴細(xì)胞亞群比較 普通肺炎組與重癥肺炎組CD8+無顯著性變化，比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05），普通肺炎組 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表達(dá)水平均明顯高于重癥肺炎組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s，%)

表2 兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s，%)

組別普通肺炎組重癥肺炎組n 53 27 t P--CD3+68.47±5.21 54.31±7.68 9.746＜0.001 CD4+ CD8+37.55±2.13 32.36±3.41 8.356＜0.001 26.37±3.58 25.81±4.72 0.592 0.555 CD4+/CD8+1.49±0.27 1.25±0.41 3.138 0.002

2.3 兩組患者NK 細(xì)胞與B 細(xì)胞比較 普通肺炎組NK 細(xì)胞CD16+CD56+表達(dá)水平明顯高于重癥肺炎組, 普通肺炎組B 細(xì)胞CD19+表達(dá)水平明顯低于重癥肺炎組,比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

表3 兩組患者NK細(xì)胞與B細(xì)胞比較(±s，%)

表3 兩組患者NK細(xì)胞與B細(xì)胞比較(±s，%)

組別普通肺炎組重癥肺炎組CD16+CD56+53 27 n t P--14.47±5.31 8.31±7.28 4.314＜0.001 CD19+16.35±4.81 21.74±3.55 5.145＜0.001

2.4 兩組患者臨床癥狀持續(xù)時間比較 普通肺炎組患者臨床癥狀出現(xiàn)咳嗽、發(fā)熱、啰音、氣喘、肺部X 線陰影的持續(xù)時間均明顯低于重癥肺炎組患者，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

3 討論

在支氣管肺炎據(jù)病情可分為普通型及重癥型兩大類別,而重癥型肺炎是兒童最主要的死亡原因之一[5]。近年以來，臨床在抗感染治療上已取得了較大進(jìn)步,但是重癥型支氣管肺炎依舊是呼吸系統(tǒng)感染臨床治療的挑戰(zhàn)。對支氣管肺炎患兒進(jìn)行早期診斷對癥治療是對支氣管肺炎的高病死亡率進(jìn)行有效降低的關(guān)鍵,對患者預(yù)后判斷有著重要的價值[6]。據(jù)研究，支氣管重癥肺炎患者的發(fā)生與病情發(fā)展的過程中不僅有病原菌的感染參與,更與患者自身的炎癥因子過度表達(dá)有一定的關(guān)聯(lián)性，患者自身機體大量炎癥因子的釋放會引發(fā)全身性的炎癥反應(yīng)綜合征[7-9]。支氣管肺炎患者機體急性反應(yīng)是內(nèi)源性致熱源和重要的炎癥介質(zhì),均主要是由一些細(xì)胞因子進(jìn)行，其細(xì)胞因子均可由T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，會起到增強患者自身機體破壞炎癥的效用[10]。

表4 兩組患者臨床癥狀持續(xù)時間比較（±s，d）

表4 兩組患者臨床癥狀持續(xù)時間比較（±s，d）

組別 n 咳嗽 發(fā)熱 啰音 氣喘 肺部X 線陰影普通肺炎組重癥肺炎組53 27 t P- -5.27±0.73 8.64±0.54 21.189＜0.001 3.41±0.67 5.36±0.51 13.275＜0.001 6.41±0.74 7.18±0.62 4.637＜0.001 5.39±0.72 6.88±0.91 7.992＜0.001 7.42±1.33 9.02±1.61 4.734＜0.001

據(jù)研究，支氣管肺炎的發(fā)病機制除了病原體對患兒自身機體的直接侵害還和患兒的機體免疫功能所相關(guān)[11]。外周血淋巴細(xì)胞亞群與年齡有一定的關(guān)聯(lián)，特別是嬰幼兒，小兒尚未發(fā)育完全的免疫系統(tǒng)也是其容易發(fā)生呼吸道疾病感染的重要因，而支氣管肺炎是由多種病原體和其他因素所綜合導(dǎo)致的肺部炎癥[12]。在隨著人們對支氣管肺炎的病理、生理機制發(fā)病過程不斷研究中，發(fā)現(xiàn)患者會存在細(xì)胞免疫功能的異?，F(xiàn)象,在其中會對T 淋巴細(xì)胞亞群有較多的檢測報道。T 細(xì)胞在胸腺中發(fā)育成熟的淋巴細(xì)胞會進(jìn)入到外周血中，對機體免疫功能進(jìn)行參與并調(diào)節(jié)，淋巴細(xì)胞其具體可分為B 淋巴細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞、NK 細(xì)胞。機體的免疫平衡狀態(tài)是依賴于各淋巴細(xì)胞亞群間的相互制約、協(xié)調(diào)，形成適度的免疫應(yīng)答[13-15]。在機體受到病毒、細(xì)菌等感染侵害時，會導(dǎo)致免疫機制出現(xiàn)失調(diào)現(xiàn)象，淋巴細(xì)胞亞群會表現(xiàn)出異常的數(shù)量，機體免疫絮亂現(xiàn)象出現(xiàn)，會降低免疫功能從而引發(fā)一系列疾病。

CD3+細(xì)胞均為外周血成熟的 T 淋巴細(xì)胞，CD4+、CD8+不同的亞群則是據(jù) CD4、CD8不同的表達(dá)情況來區(qū)分，各群均具有特殊的免疫功能。在本研究中,采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測了支氣管重癥肺炎患兒與普通支氣管肺炎組的T 淋巴細(xì)胞亞群和B 淋巴細(xì)胞亞群及NK 細(xì)胞計數(shù)。在進(jìn)行比較時，重癥肺炎組患兒T 淋巴細(xì)胞及NK 細(xì)胞的計數(shù)均低于普通肺炎組，而B 淋巴細(xì)胞均會高于普通肺炎組。表明支氣管肺炎重癥患者的細(xì)胞免疫功能出現(xiàn)降低，B 淋巴細(xì)胞更高則表明肺炎重癥患者的細(xì)胞免疫降低與患者的疾病發(fā)展嚴(yán)重程度所相關(guān),而B 淋巴細(xì)胞會與機體一起提高抗感染的機制,代償性會升高[16]。當(dāng)支氣管肺炎發(fā)生時，T 淋巴細(xì)胞亞群會異常分布，B 細(xì)胞分泌、 表達(dá)的血清免疫球蛋白會隨T 細(xì)胞進(jìn)行調(diào)節(jié), 當(dāng) T 細(xì)胞 CD3+、CD4+功能減少低下時，會減少協(xié)助B 細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力[17]。而T 淋巴細(xì)胞 CD3+、CD8+在增加時會對 T 細(xì)胞、B 細(xì)胞和其余免疫細(xì)胞的增值和分化。支氣管重癥肺炎患者的T 淋巴細(xì)胞出現(xiàn)大量凋亡降低總數(shù)時，由亞群的變化會帶來免疫功能的絮亂,導(dǎo)致患者感染的因素會抑制機體的細(xì)胞免疫功能[18]。出現(xiàn)免疫抑制會使患者容易出現(xiàn)并發(fā)感染的癥狀,對感染難以控制，從而導(dǎo)致病情出現(xiàn)惡化的現(xiàn)象[19]。對患者T 細(xì)胞的持續(xù)降低進(jìn)行關(guān)注則可對患者疾病發(fā)展程度進(jìn)行有效評估,例如患者T 淋巴細(xì)胞CD4+水平出現(xiàn)降低且在經(jīng)過1 周的積極治療后持續(xù)下降，無上升趨勢則表明患者可能會預(yù)后不良。與本研究中重癥肺炎組患者的T 淋巴細(xì)胞亞群水平均低于對照組結(jié)果相同。NK 細(xì)胞為的主要表達(dá)為CD15+、CD16+分子，是天然免疫細(xì)胞系統(tǒng)中的重要細(xì)胞，對病毒與細(xì)菌的感染進(jìn)行主要控制，對體內(nèi)環(huán)境進(jìn)行穩(wěn)定調(diào)節(jié)，從而產(chǎn)生細(xì)胞因子，殺傷腫瘤細(xì)胞，建立獲得性免疫與先天性免疫的聯(lián)系[20]?？蓪Σ≡w和已感染細(xì)胞進(jìn)行直接殺傷，在機體免疫的調(diào)控中發(fā)揮重要作用，對其表達(dá)分子水平進(jìn)行有效測定可對機體的免疫活性細(xì)胞功能狀態(tài)進(jìn)行準(zhǔn)確反映。

綜上所述，T 淋巴細(xì)胞亞群與NK 細(xì)胞可作為對重癥肺炎患者的評價重要指標(biāo)，免疫水平的改變代表機體免疫免疫功能的改變，可對病情程度進(jìn)行反映，對疾病的預(yù)后轉(zhuǎn)歸有效判斷，對臨床治療有著指導(dǎo)效用，對免疫制劑治療的使用提供一定的理論依據(jù)，有利于縮短患者病程對疾病進(jìn)行更好的控制。