血管性癡呆血清NO、sICAM-1、NLRP3 表達變化及與患者病情、預后關(guān)聯(lián)性

艾敏，高嵐

（1.河南省濮陽市人民醫(yī)院檢驗科，河南 濮陽 457000； 2.河南省人民醫(yī)院檢驗科，河南 鄭州 450000）

腦血管性癡呆（Vascular dementia，VD）主要因腦血管因素致使腦組織損傷而引起，研究指出，在中國VD 的發(fā)病率為1.1%～3.0%，且呈現(xiàn)出逐漸升高趨勢[1]。早期明確該病發(fā)病機制并據(jù)此進行針對性干預有利于延緩病程進展，提升患者生活質(zhì)量。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮損傷、炎癥反應于癡呆發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色[2,3]。一氧化氮（NO）屬血管內(nèi)皮活性物質(zhì)，含量與血管內(nèi)皮功能狀況密切相關(guān)?？扇苄约毎g黏附分子-1（sICAM-1）為內(nèi)皮細胞遭受刺激時釋放的炎性因子，可反映炎癥反應狀況，且與腦損傷密切相關(guān)[4]。核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（NLRP3）屬人體內(nèi)重要蛋白質(zhì)，含量與機體炎癥反應有關(guān)[5]。但目前臨床關(guān)于 VD 患者血清 NO、sICAM-1、NLRP3 含量及其與患者病情、預后關(guān)系的研究報道尚較為鮮見，本研究對其進行分析，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2017 年 10 月-2019 年 10 月我院94 例VD 患者為病例組，同期94 例健康體檢者為對照組。納入標準:⑴病例組符合《神經(jīng)病學》[6]中VD 有關(guān)診斷標準，存在腦血管病變證據(jù)，病情穩(wěn)定，MMSE 評分≤24 分； ⑵對照組為健康體檢者；⑶2 組文化程度均在中學及以上，知曉本研究，簽訂知情同意書。排除標準：⑴合并嚴重抑郁癥；⑵存在明顯自殘或自殺傾向；⑶合并肝、肺、腎等臟器功能嚴重障礙； ⑷合并惡性腫瘤、 急慢性感染；⑸合并其他影響血管內(nèi)皮功能、炎癥因子指標表達疾??； ⑹因其他非腦血管原因?qū)е抡J知功能障礙。其中病例組男 51 例，女 43 例；年齡 47～84歲，平均 62.90±7.06 歲；病程 3～12 年，平均 6.19±1.25 年；吸煙 25 例，飲酒 22 例，肥胖 13 例；合并高脂血癥32 例，糖尿病20 例，冠心病21 例，高血壓 44 例； 簡易精神狀態(tài)量表 （MMSE） 評分 6～24分，平均 13.28±4.19 分。對照組男 49 例，女 45 例；年齡 47～83 歲，平均 63.47±6.82 歲；吸煙 22 例，飲酒 20 例，肥胖 12 例。2 組一般資料（性別、年齡與吸煙、飲酒、肥胖人數(shù)比例等）均衡可比（P＞0.05）。本研究經(jīng)我院倫理委員會同意。

1.2 方法 采集所有受試者5ml 清晨空腹（禁食12 h）靜脈血樣，3000r/min 離心 10 min 取血清，以酶聯(lián)免疫吸附法測定血清NO、sICAM-1、NLRP3 含量，檢測試劑盒均購于南京建成生物工程研究所，有關(guān)操作嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3 觀察指標 ⑴病例組、 對照組血清 NO、sICAM-1、NLRP3 含量。⑵病例組不同病情評分（MMSE）患者血清各指標含量，病情程度應用簡易精神狀態(tài)量表（MMSE）評價，分值范圍 0～30 分，分值越高認知功能越好。⑶血清各指標與VD 患者MMSE 評分關(guān)聯(lián)性。⑷出院后對病例組患者采取6個月隨訪，參考日常生活活動能力量表（ADL）標準評估患者預后狀況，總分100 分，分值越高預后狀況越好，ADL 評分 61～99 為Ⅰ級（輕度）預后功能障礙，41～60 分為Ⅱ級（中度）預后功能障礙，≤40為Ⅲ級（重度）預后功能障礙[7]；對比病例組不同預后患者一般資料與血清各指標含量。⑸觀察VD 患者預后功能障礙分級Ⅲ級的有關(guān)影響因素。⑹分析血清各指標對VD 患者預后功能障礙分級Ⅲ級預測意義。

1.4 統(tǒng)計學分析 研究數(shù)據(jù)應用SPSS22.0 軟件進行統(tǒng)計學分析,計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，多組間比較應用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q 檢驗，兩組間比較應用獨立樣本t 檢驗；計數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗；相關(guān)性應用Pearson 相關(guān)分析； 影響因素應用Logistic 回歸分析；預測價值應用ROC 曲線分析，獲得曲線下面積（AUC）、置信區(qū)間、特異度、敏感度與截斷值，不同預測方案間AUC 比較應用DeLong 檢驗，聯(lián)合診斷采取Logistic 二元回歸擬合，返回預測概率logit(p)，將其作為獨立檢驗變量；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組血清 NO、sICAM-1、NLRP3 含量 病例組血清 NO 含量低于對照組，sICAM-1、NLRP3 含量高于對照組（P＜0.05）。見表1。

表1 2 組血清 NO、sICAM-1、NLRP3 含量對比(±s)

表1 2 組血清 NO、sICAM-1、NLRP3 含量對比(±s)

組別 例數(shù)病例組對照組94 94 t P NO（μmol/L） sICAM-1（ng/L）49.58±7.26 94.23±13.48 28.274＜0.001 432.37±108.69 319.56±93.74 7.620＜0.001 NLRP3 相對表達量8.13±1.04 1.07±0.21 64.515＜0.001

2.2 病例組不同病情評分患者血清各指標水平依據(jù)病例組MMSE 評分情況，將患者分為MMSE評分＜10 分、處于 10～19 分、處于 20～24 分 3 類患者。經(jīng)檢驗顯示，隨患者MMSE 評分降低其血清NO 含量逐漸降低，sICAM-1、NLRP3 含量逐漸增高（P＜0.05）。見表2。

表2 病例組不同病情評分患者血清各指標水平對比(±s)

表2 病例組不同病情評分患者血清各指標水平對比(±s)

組別 例數(shù)20～24 分10～19 分＜10 分24 41 29 F P NO（μmol/L） sICAM-1（ng/L）64.95±8.02 47.53±7.19 39.76±6.30 84.373＜0.001 350.52±102.94 428.03±106.12 506.24±114.76 13.690＜0.001 NLRP3 相對表達量5.63±0.96 8.07±1.04 10.28±1.35 11.967＜0.001

2.3 血清各指標與 VD 患者 MMSE 評分關(guān)系Pearson 相關(guān)性分析可知，VD 患者血清 NO （r=0.607、P＜0.001）含量與 MMSE 評分呈顯著正相關(guān)，sICAM-1（r=-0.763、P＜0.001）、NLRP3(r=-0.611、P＜0.001)含量與MMSE 評分呈顯著負相關(guān)。見圖1。

圖1 血清各指標與VD患者MMSE評分關(guān)系

2.4 病例組不同預后患者一般資料與血清各指標水平 經(jīng)隨訪，無脫落病例。病例組不同預后患者年齡、性別、吸煙、飲酒、肥胖人數(shù)比例、合并癥等一般資料相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），預后功能障礙分級Ⅲ級患者MMSE 評分與血清NO 含量低于預后功能障礙分級Ⅰ～Ⅱ級，sICAM-1、NLRP3 含量高于預后功能障礙分級Ⅰ～Ⅱ級 （P＜0.05）。見表3。

2.5 VD 患者預后功能障礙分級Ⅲ級的有關(guān)影響因素分析 以VD 患者預后功能障礙分級是否為Ⅲ級作為因變量，患者一般資料、血清NO、sICAM-1、NLRP3 為自變量，采取 Logistic 回歸分析顯示MMSE 評分、血清NO 為VD 患者預后功能障礙分級Ⅲ級重要保護因素，血清sICAM-1、NLRP3 為VD 患者預后功能障礙分級Ⅲ級重要危險因素（P＜0.05）。見表4。

表3 病例組不同預后患者一般資料與血清各指標水平對比

表4 VD患者預后功能障礙分級Ⅲ級的有關(guān)影響因素分析

2.6 血清各指標對VD 患者預后功能障礙分級Ⅲ級預測意義 血清NO、sICAM-1、NLRP3 聯(lián)合預測VD 患者預后功能障礙分級Ⅲ級AUC 高于單一指標預測，聯(lián)合預測時特異度為90.67%、 敏感度為73.68%。見表5、圖2。

圖2 血清各指標對VD患者預后功能障礙分級Ⅲ級預測ROC

3 討論

VD 發(fā)病機制較復雜，但近期研究認為可能與機體炎癥反應、 血管內(nèi)皮細胞損傷等相互作用具有密切關(guān)系[8,9]。NO 為可調(diào)節(jié)血管源性舒張因子，能起到促進血管舒張、抑制炎癥產(chǎn)生等作用[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，VD 患者血清NO 水平偏低，且與患者MMSE 評分呈正相關(guān)。提示血清NO 在VD 發(fā)病及病情進展中具有重要作用。VD 患者常會出現(xiàn)腦白質(zhì)病變，致使血液循環(huán)內(nèi)非對稱二甲基精氨酸水平增高，降低腦動脈NO 依賴性血管舒張功能，造成血管僵硬度提高，NO 水平降低。有關(guān)研究也報道，VD 患者NO 出現(xiàn)生成與釋放障礙或者活性降低時，會造成血管收縮與血壓增高[11]。而研究證實，高血壓為腦血管疾病產(chǎn)生認知功能障礙的重要危險因素[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，預后功能障礙分級Ⅲ級VD患者血清NO 含量偏低，且回歸分析仍顯示，血清NO 為VD 患者預后功能障礙分級Ⅲ級重要保護因素。表明血清NO 含量與VD 患者預后有關(guān)，通過測定其含量可能為患者預后預測提供一定參考。

表5 血清各指標對VD患者預后功能障礙分級Ⅲ級預測意義

sICAM-1 含量高低可反映內(nèi)皮細胞活化與損傷狀況，張琳等[13]研究報道，sICAM-1 可介導氧化應激反應，降低活性氮利用度，致使血管內(nèi)皮細胞再生能力受損，從而造成腦內(nèi)循環(huán)障礙與腦灌注損傷。本研究發(fā)現(xiàn)，VD 患者血清sICAM-1 含量增高，且增高程度與患者認知功能受損程度、預后有關(guān)。分析機制可能為ICAM-1 為免疫球蛋白超家族中一員，在正常生理狀態(tài)下，處于低表達狀態(tài)，當機體出現(xiàn)炎癥反應或內(nèi)皮細胞受損時,其可由內(nèi)皮細胞釋放并侵入血液循環(huán)，致使組織ICAM-1 與血清 sICAM-1 含量增高。同時，血清 sICAM-1 含量越高，機體炎癥因子水平越高，斑塊穩(wěn)定性越差，可能會加劇腦血管病病情與發(fā)作頻率,加重認知功能損傷，影響患者預后[14]。

NLRP3 為NLRP3 基因所編碼蛋白質(zhì)，本研究發(fā)現(xiàn)，VD 患者血清NLRP3 水平明顯增高，且與患者認知功能損傷程度、 預后有關(guān)。推測原因在于NLRP3 可和半胱天冬酶及凋亡相關(guān)微粒蛋白一同組成NLRP3 炎癥小體，促進促炎蛋白酶活化，提高C 反應蛋白、白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α 等多種炎性因子水平,經(jīng)由相關(guān)信號通路介導炎癥瀑布反應,進而加重局部炎癥反應，引起神經(jīng)細胞凋亡，致使VD 發(fā)病及病情進展，影響預后狀況[15]。本研究繪制ROC 曲線發(fā)現(xiàn)，采用血清NO、sICAM-1、NLRP3 聯(lián)合預測VD 患者預后功能障礙分級Ⅲ級的AUC 高于單一指標。提示應用血清各指標聯(lián)合預測可為VD 患者預后預測提供更多參考信息，提高預測效能。

綜上所述，VD 患者血清 NO、sICAM-1、NLRP3表達與患者病情、預后有關(guān)，可為臨床診治提供一定參考。參考文獻

目前，國內(nèi)外對湖泊沉積物污染狀況的評價尚缺乏統(tǒng)一的評價方法和標準，本研究采用綜合污染指數(shù)法和有機污染指數(shù)法評價洞庭湖表層沉積物的污染狀況，這兩種方法常被用于湖泊沉積物污染評價研究。

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