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    急性腦梗死患者血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP的變化特點及臨床意義

    2021-05-19 03:52:16李崇祎
    實驗與檢驗醫(yī)學(xué) 2021年2期
    關(guān)鍵詞:腦組織入院炎癥

    李崇祎

    (中國平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科,河南 平頂山 467000)

    急性腦梗死患者在短期內(nèi)病情進(jìn)展的概率較高,病死率及遠(yuǎn)期致殘率等生存預(yù)后較差。流行病學(xué)研究提示,ACI 的發(fā)病率維持在(344~456)/10 萬人[1],同時在具有高血壓或腦血管動脈粥樣硬化人群中,ACI 發(fā)病率有進(jìn)一步上升的趨勢。

    研究ACI 發(fā)病機(jī)制發(fā)現(xiàn),不同的生物學(xué)因子能夠?qū)е履X組織缺血性損傷、加劇氧化應(yīng)激障礙等,進(jìn)而促進(jìn)ACI 患者的生存預(yù)后惡化。miR-151a-3p作為非編碼RNA,能夠通過誘導(dǎo)下游炎癥因子的分泌,促進(jìn)單核細(xì)胞對于腦組織神經(jīng)元細(xì)胞的毒性作用,參與到 ACI 的病情進(jìn)展過程中[2]; MMP-9 的高水平則能夠通過誘導(dǎo)間質(zhì)成分的分解,擴(kuò)大缺血性梗死的病灶范圍[3];而hs-CRP 的水平能夠誘導(dǎo)下游炎癥信號通路的激活,加劇炎癥反應(yīng)對腦組織神經(jīng)元完整性的破壞[4]。三者可能對ACI 的發(fā)生發(fā)展有重要作用[5,6]。為了分析 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 與ACI 病情間的關(guān)系,本研究選取我院收治的ACI 患者140 例,探討相關(guān)指標(biāo)的水平及其與患者NIHSS 評分間的關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取 2016 年 8 月至 2017 年 8 月間我院收治的 140 例 ACI 患者(ACI 組),另選取70 名同期的健康體檢者作為對照組。

    140 例 ACI 患者中,男性 82 例,女性 58 例;年齡為 55~83 歲,平均年齡為 62.35±10.62 歲;腦梗死部位為,基底節(jié)71 例,腦橋32 例,小腦20 例、顳葉17 例;98 例患者合并有高血壓,50 例合并糖尿病,41 例合并高血脂。根據(jù) NIHSS 評分[5],140 例ACI 患者可分為輕型 (NIHSS 評分<4 分)65 例,中型(4 分≤NIHSS 評分<15 分)50 例,重型(NIHSS評分>15 分)25 例。70 名健康對照者中,男性 44 例,女性 26 例;年齡為 52~82 歲,平均年齡為 63.51±10.94 歲。兩組患者的年齡、性別比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

    納入標(biāo)準(zhǔn):ACI 患者的納入標(biāo)準(zhǔn)為, ⑴ACI 診斷符合神經(jīng)內(nèi)科疾病診療指南(第3 版)中的相應(yīng)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6];⑵患者起病后24h 內(nèi)入院,經(jīng)頭顱CT、MRI 檢查確診為ACI; ⑶入院后未采取手術(shù)治療,在我院神經(jīng)內(nèi)科接受保守治療; ⑷治療前獲得患者家屬的知情同意。

    排除標(biāo)準(zhǔn):排除標(biāo)準(zhǔn)為,⑴有顱內(nèi)占位性病變、動脈瘤者;⑵出血性腦卒中患者;⑶合并肺部感染、嚴(yán)重的冠心病、肝腎功能疾病者;⑷對治療藥物具有嚴(yán)重的不耐受者。

    1.2 方法 miR-151a-3p 檢測:ACI 組患者均于入院24 小時內(nèi),對照組體檢時,采集靜脈血2 ml,加入 0.3ml 氯仿,室溫下震蕩 30s,放置 30min,取上層清亮液體移入另一EP 管,加入等體積的異丙嗪溶液,室溫放置 30min,1000r/min 離心 10min,取沉淀物為RNA,加入75%乙醇溶液1ml,溶解后1000r/min 離心 10min,取上清液,加入 20μlDEPC 水, 紫外可見分光光度計(賽默飛公司)上測OD 值,計算RNA 濃度,單位為:ug/ul。采用 Invitrogen oligo(賽默飛公司)進(jìn)行引物設(shè)計,采用SuperScript IV 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Invitrogen SuperScript IV 反轉(zhuǎn)錄酶 賽默飛公司) 進(jìn)行 cDNA 合成,β-actin 作為內(nèi)參,miR-151a-3p 引物上游:CTTTGAGGTGCGTGTTT 下游:CAGTGCTCGCTTAGTGC 。設(shè)置 3 組復(fù)孔,取平均值,采用相對定量 2~(-ΔΔCt)法計算結(jié)果,PCR 儀器購自賽默飛公司。

    MMP-9、hs-CRP 檢測:ACI 組患者均于入院24 小時內(nèi),對照組體檢時,采集外周靜脈血3~5ml,室溫下放置自然分層后抽取上層清亮液體待測。采用電化學(xué)發(fā)光全自動免疫分析儀 (羅氏E170)及試劑盒(羅氏公司)進(jìn)行檢測。

    NIHSS 評分標(biāo)準(zhǔn): 該量表主要包括了意識水平、凝視、視野、面癱、上肢運動、下肢運動、肢體共濟(jì)失調(diào)、感覺、語言、構(gòu)音障礙、消退和不注意11個項目,總分0~42 分,評分越高,患者的神經(jīng)缺損功能越嚴(yán)重。對患者入院時、入院24h、入院48h 三個時間點分別進(jìn)行評價,取三個時間點中的最高分作為患者分組的依據(jù)。由我院神經(jīng)內(nèi)科具有10 年臨床經(jīng)驗的2 位副主任醫(yī)師對患者進(jìn)行評分,在實施評分之前,均經(jīng)過對NIHSS 量表的培訓(xùn),兩位醫(yī)師評分后取平均值作為患者的最終評分。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 16.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 等計量數(shù)據(jù)表述采用(±s)表示,數(shù)據(jù)正態(tài)分布檢驗采用pp圖或者qq 圖。兩組間計量數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用t 檢驗,三組間比較單因素方差分析(如組間有差異,再采用LSD-t 檢驗進(jìn)行兩兩比較),計數(shù)資料的組間比較采用χ2 檢驗,多因素分析法采用多元線性回歸模型;血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 診斷 ACI 的效能采用 ROC 分析,P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組的血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平比較 ACI 組的血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平均顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    表1 ACI組與對照組的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平比較(±s)

    表1 ACI組與對照組的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平比較(±s)

    組別 例數(shù)ACI 組對照組t 值P 值140 70 miR-151a-3p(2-△△ct) MMP-9(μg/L)2.29±0.68 1.26±0.44 11.51<0.01 192.62±44.11 78.23±18.56 20.78<0.01 hs-CRP(mg/L)5.04±2.11 1.39±0.40 14.33<0.01

    2.2 不同NIHSS 評分ACI 患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平比較 重型 ACI 組的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平均顯著高于輕型組、中型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);中型ACI 組的血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平均顯著高于輕型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    表2 不同NIHSS評分ACI患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平比較(±s)

    表2 不同NIHSS評分ACI患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平比較(±s)

    注:a):與輕型組比較,P<0.05;b) :與中型組比較,P<0.05

    病情分組 例數(shù)miR-151a-3p(2-△△ct)MMP-9(μg/L)輕型中型重型F 值P 值65 50 25 1.66±0.62 2.30±0.66a)2.81±0.54a),b)35.17<0.01 130.52±35.83 211.44±40.07a)240.12±39.66a),b)103.06<0.01 hs-CRP(mg/L)3.26±2.00 5.51±1.98a)6.53±1.84a),b)32.47<0.01

    2.3 NIHSS 評分與 ACI 患者血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平間的相關(guān)性分析 ACI 組患者的血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平與其NIHSS 評分間均呈顯著正相關(guān)(P<0.05),見表3。

    表3 ACI患者NIHSS評分與血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平間相關(guān)性分析

    2.4 NIHSS 評分與 ACI 患者血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平的多元線性回歸分析 采用多元性線性模型進(jìn)行分析,NIHSS 評分作為因變量,血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平作為自變量,回歸模型顯示,miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平升高是ACI 患者NIHSS 評分增高的獨立危險因素(P<0.05),見表4。

    表4 多元線性回歸分析結(jié)果

    3 討論

    腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的病變或動脈粥樣硬化等,能夠通過促進(jìn)血栓的形成,促進(jìn)ACI 的發(fā)生。ACI 是指腦血供突然中斷后導(dǎo)致的腦組織壞死。通常主要是由于供應(yīng)腦部血液的動脈出現(xiàn)粥樣硬化和血栓形成,使管腔狹窄甚至閉塞,導(dǎo)致局灶性急性腦供血不足而發(fā)??;也有因異常物體(固體、液體、氣體)沿血液循環(huán)進(jìn)入腦動脈或供應(yīng)腦血液循環(huán)的頸部動脈,造成血流阻斷或血流量驟減而產(chǎn)生相應(yīng)支配區(qū)域的腦組織軟化、壞死。miRNA 是基因水平調(diào)控主要因子之一,參與生物體細(xì)胞增殖、分化、凋亡、代謝等生物學(xué)過程。外周血miRNA 具有不易降解且檢測方法敏感、準(zhǔn)確等特點,成為臨床疾病潛在的診斷、 病情鑒別的新型標(biāo)志物。miR-151a-3p 能夠調(diào)控血脂的代謝,增加低密度脂蛋白水平,促進(jìn)泡沫細(xì)胞等的沉積,增加血管內(nèi)皮下組織的增生及脂肪化等病理改變,促進(jìn)粥樣硬化斑塊的形成及ACI 的發(fā)生; 而miR-151a-3p 對于氧化應(yīng)激過程的調(diào)控作用,能夠增加氧化自由基對于腦血管內(nèi)皮的損傷,增加局部血流灌注障礙的發(fā)生風(fēng)險[8]。MMP-9MMP-9 參與了腦組織基質(zhì)的分解代謝過程中,MMP-9 主要功能是降解和重塑細(xì)胞外基質(zhì)的動態(tài)平衡,另外,MMP-9 可通過釋放血管內(nèi)皮生長因子以參與血管生成,其高水平能夠?qū)е禄颊呔植磕X組織炎癥反應(yīng)范圍的擴(kuò)散,增加缺血再灌注損傷的嚴(yán)重程度[9]。hs-CRP 是反映患者體內(nèi)炎癥反應(yīng)的重要指標(biāo),同時是機(jī)體受到微生物入侵或組織損傷等炎癥性刺激時肝細(xì)胞合成的急性相蛋白,在炎癥開始數(shù)小時hs-CRP 就升高,48 小時即可達(dá)峰值,隨著病變消退、組織、結(jié)構(gòu)和功能的恢復(fù)降至正常水平,hs-CRP 水平上升能夠?qū)е禄颊唧w內(nèi)的單核細(xì)胞或中性粒細(xì)胞浸潤腦組織的風(fēng)險增加[10]。部分研究結(jié)果揭示了ACI 患者體內(nèi)MMP-9、hs-CRP 水平的變化情況,認(rèn)為 MMP-9、hs-CRP的高水平是促進(jìn)病死率升高、 生存預(yù)后惡化的重要因素[11,12],但對于二者與患者 NIHSS 評分間關(guān)系的研究尚不足,同時對于miR-151a-3p 的分析也不足。

    血清學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果可見, 血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 在 ACI 患者中水平較高,提示了血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 均影響著ACI 的病情進(jìn)展過程,相關(guān)指標(biāo)的高水平能夠通過影響炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激障礙、缺血再灌注損傷等,加劇 ACI 的病情進(jìn)展[13,14]。miR-151a-3p 的高水平能夠加劇炎癥信號通路NOTCH 的激活對激活下游炎癥因子起到促進(jìn)作用,從而從而可以間接判斷評估腦組織的損傷程度; MMP-9 的高表水平則能夠通過影響到腦組織基質(zhì)成分的代謝,加劇膠原纖維分解,促進(jìn)基質(zhì)蛋白降解,從而促進(jìn)梗死病灶組織的蔓延; hs-CRP 的高水平能夠加劇中性粒細(xì)胞對于腦組織神經(jīng)元細(xì)胞的浸潤,促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡,導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙[15,16]。曹紅元等[17]分析了621 例ACI 患者的臨床預(yù)后,認(rèn)為hs-CRP高水平與患者的神經(jīng)功能預(yù)后密切相關(guān),同時hs-CRP 水平上升越明顯,ACI 患者的病死率越高。分析血清中 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 等指標(biāo)與ACI 患者病情嚴(yán)重程度間關(guān)系顯示,患者的病情越重,血清中 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 等的水平越高,該趨勢較為明顯。楊泳、江鈺等學(xué)者的研究表明[18,19],這種關(guān)系可能與miR-151a-3p、MM P-9、hs-CRP 指標(biāo)能反應(yīng)患者腦組織缺血再灌注損傷過程中側(cè)支循環(huán)的建立、 血流恢復(fù)速度或炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激障礙有關(guān)。本研究結(jié)果可知,NIHSS 評分與 ACI 患者血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平間的相關(guān)關(guān)系較為顯著,同時危險因素分析也可見,miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平上升是ACI 患者NIHSS 評分增高的獨立危險因素,進(jìn)一步提示了 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CR P 水平與ACI 患者病情間有著密切的關(guān)系。

    總之,ACI 患者的血清 miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP 水平顯著高于健康人群,且與ACI 患者神經(jīng)功能受損程度有一定的相關(guān)性。

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