P504s、CK-HMW、p63、S-100 蛋白與前列腺癌病理分級的關(guān)系

段凱軍 李青

（河南省商丘市第四人民醫(yī)院病理科 商丘476100）

前列腺癌是我國發(fā)病率位居前二的男性惡性腫瘤，由于發(fā)病隱匿、早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時已為晚期。 隨著直腸超聲前列腺穿刺活檢技術(shù)及血清前列腺特異性抗原（PSA）的應(yīng)用，前列腺癌的早期檢出率已顯著提升[1]。 前列腺穿刺活檢是診斷前列腺癌的可靠手段， 但活檢獲得的樣本量有限，且在病變不典型的情況下，單憑光鏡鏡檢、蘇木精-伊紅染色（HE 染色），很難對微小病灶做出明確診斷[2]。前列腺癌病理診斷強(qiáng)調(diào)腫瘤細(xì)胞異形性、 浸潤現(xiàn)象及腺體結(jié)構(gòu)異常，而前列腺癌的病理形態(tài)差別不大，光鏡下進(jìn)行病理診斷較為困難，故需要免疫組化協(xié)助診斷[3]。 本研究分析免疫組化指標(biāo)α-甲?；o酶A- 消旋酶（P504s）、 人高分子量細(xì)胞角蛋白（CK-HMW）、p63 蛋白、S-100 蛋白與前列腺癌病理分級的關(guān)系，探討其對前列腺癌診斷的意義。 現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2017 年1 月～2020 年10 月前列腺穿刺活檢標(biāo)本，前列腺癌標(biāo)本92 例，納入PCa 組； 良性前列腺增生標(biāo)本80 例， 納入BPH組。 納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)組織形態(tài)學(xué)檢查，參考免疫組化結(jié)果最終確診為前列腺癌或良性前列腺增生；首次就診病例。 PCa 組年齡46～79 歲，平均（66.21±7.62）歲；Gleason 分級評分[4]：≤7 分44 例，＞7 分48 例。BPH 組年齡47～82 歲，平均（65.73±7.79）歲。 兩組年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 檢測方法 所有標(biāo)本行免疫組化檢測P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白的表達(dá)，光鏡下觀察PCa組標(biāo)本病理組織學(xué)形態(tài)，進(jìn)行Gleason 分級評分。

1.2.1 常規(guī)病理觀察 將獲取的標(biāo)本采用體積分?jǐn)?shù)為10%的甲醛液固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，行常規(guī)HE 染色。 根據(jù)HE 染色切片中腫瘤組織學(xué)形態(tài)，觀察切片中組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、排列方式及腫瘤浸潤情況、間質(zhì)變化。

1.2.2 免疫組織化學(xué)檢測 采用免疫組化實(shí)驗(yàn)（SP）法進(jìn)行檢測。試劑盒：鏈霉菌抗生素蛋白-過氧化物酶與生物素標(biāo)記的第二抗體與底物色素混合液；抗體：小鼠抗CK-HMW 單克隆抗體、DAK-p63抗體、 兔抗人P504s 單克隆抗體（13H4）、 兔抗人S-100 多克隆抗體，均來自Dako 公司。染色步驟：石蠟切片進(jìn)行脫蠟、水化，并采用自來水沖洗；按照第一抗體相關(guān)要求，對組織進(jìn)行抗原修復(fù)；去除磷酸緩沖鹽溶液，過氧化物酶阻斷試劑滴于切片，孵育10 min（室溫）；去除血清，第一抗體滴加在切片上，孵育60 min（室溫）或過夜（4℃），磷酸緩沖鹽溶液沖洗3 min，反復(fù)沖洗3 次；去除磷酸緩沖鹽溶液，將生物素標(biāo)記的第二抗體滴加于切片上，孵育10 min（室溫），再采用磷酸緩沖鹽溶液沖洗3 min，反復(fù)沖洗3 次；去除磷酸緩沖鹽溶液，鏈霉菌抗生素蛋白-過氧化物酶滴加于切片，孵育10 min（室溫），磷酸緩沖鹽溶液沖洗3 min，反復(fù)沖洗3 次；去除磷酸緩沖鹽溶液， 將新鮮配制的DAB 顯色試劑滴加于切片上；采用自來水沖洗，終止顯色，再以蘇木素復(fù)染，磷酸緩沖鹽溶液返藍(lán)；對切片進(jìn)行梯度乙醇脫水處理，二甲苯透明化，并采用中性樹膠封固。

1.2.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果評估[5]由2 名病理醫(yī)師對免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行判斷。 顯微鏡下隨機(jī)選擇5 個視野， 計算各視野中陽性細(xì)胞數(shù)占上皮細(xì)胞總數(shù)百分比， 并結(jié)合染色強(qiáng)度進(jìn)行評分。 陽性細(xì)胞占比＜1%記0 分， 陽性細(xì)胞占比2%～25%記1 分，陽性細(xì)胞占比26%～50%記2 分， 陽性細(xì)胞占比51%～75%記3 分，陽性細(xì)胞占比＞75%記4 分。 染色強(qiáng)度：無染色記0 分，弱染色記1 分，中等染色記2 分，強(qiáng)染色記3 分。 陽性細(xì)胞占比評分與染色強(qiáng)度評分相乘為總分，根據(jù)總分分為：-，0～1 分；+，2～4 分；++，5～8 分；+++，9～12 分。

1.3 觀察指標(biāo) 比較P504s，CK-HMW、p63、S-100蛋白在PCa 組、BPH 組中的表達(dá)陽性率， 及P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白在不同Gleason 分級中的表達(dá)強(qiáng)度； 采用Spearman 相關(guān)性分析P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白表達(dá)強(qiáng)度與Gleason 分級的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 以SPSS20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件及Origin 8.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及繪圖。計數(shù)資料采用頻數(shù)表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；等級資料比較采用秩和檢驗(yàn)；相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman 分析。 所有檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P504s、CK-HMW、p63、S-100 蛋白表達(dá)情況比較 P504s 在PCa 組中表達(dá)陽性率高于BPH 組，CK-HMW、p63、S-100 蛋白在PCa 組中表達(dá)陽性率低于BPH 組（P均＜0.05）。 見表1。

表1 P504s、CK-HMW、p63、S-100 蛋白表達(dá)情況比較[例（%）]

2.2 P504s 在PCa 組不同Gleason 分級中的表達(dá)強(qiáng)度比較 PCa 組中，Gleason 評分≤7 分者P504s 表達(dá)強(qiáng)度低于Gleason 評分＞7 分者（P＜0.05）。 見表2。

表2 P504s 在PCa 組不同Gleason 分級中的表達(dá)強(qiáng)度比較[例（%）]

2.3 CK-HMW 蛋白在PCa 組不同Gleason 分級中的表達(dá)強(qiáng)度比較 CK-HMW 蛋白在PCa 組不同Gleason 分級中表達(dá)強(qiáng)度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 見表3。

表3 CK-HMW 蛋白在PCa 組不同Gleason 分級中的表達(dá)強(qiáng)度比較[例（%）]

2.4 p63 蛋白在PCa 組不同Gleason 分級中的表達(dá)強(qiáng)度比較 p63 蛋白在PCa 組不同Gleason 分級中表達(dá)強(qiáng)度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 見表4。

表4 p63 蛋白在PCa 組不同Gleason 分級中的表達(dá)強(qiáng)度比較[例（%）]

2.5 S-100 蛋白在PCa 組不同Gleason 分級中的表達(dá)強(qiáng)度比較 S-100 蛋白在PCa 組不同Gleason 分級中表達(dá)強(qiáng)度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 見表5。

表5 S-100 蛋白在PCa 組不同Gleason 分級中的表達(dá)強(qiáng)度比較[例（%）]

2.6 P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白表達(dá)強(qiáng)度與Gleason 分級的相關(guān)性 Spearman 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，Gleason 分級與P504s 表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)性（P＜0.05）， 與CK-HMW、p63、S-100 蛋白表達(dá)強(qiáng)度無顯著相關(guān)性（P＞0.05）。 見表6。

表6 P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白表達(dá)強(qiáng)度與Gleason 分級的相關(guān)性

3 討論

前列腺穿刺活檢技術(shù)是診斷前列腺癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但前列腺癌區(qū)別于其他臟器腺癌，其生物學(xué)行為及形態(tài)結(jié)構(gòu)較為獨(dú)特。 前列腺癌較少出現(xiàn)單核、多核瘤巨細(xì)胞，也少見顯著的核異型，主要表現(xiàn)為核仁增大，故傳統(tǒng)的惡性指標(biāo)如核分裂、核異型、血管淋巴管及包膜侵犯對其診斷價值不高[6]。前列腺癌病理診斷主要觀察腫瘤細(xì)胞異型性、 浸潤情況及腺體結(jié)構(gòu)異常改變，由于其病理形態(tài)復(fù)雜、差別微小，故在光鏡下診斷較為困難，需結(jié)合免疫組化進(jìn)行判斷[7]。

P504s 是一種前列腺癌細(xì)胞標(biāo)志物， 存在于胞質(zhì)過氧化物中。 既往研究采用基因芯片篩選發(fā)現(xiàn)，P504s 與正常前列腺上皮組織無反應(yīng)， 而在前列腺癌中過表達(dá)[8]。 P504s 在前列腺癌免疫組化染色后，可在低倍鏡下區(qū)分于正常組織。據(jù)文獻(xiàn)報道，前列腺癌88%以上胞質(zhì)內(nèi)P504s 彌漫性強(qiáng)陽性表達(dá)[9]。 本研究中，P504s 在PCa 組中表達(dá)陽性率為96.74%，顯著高于BPH 組的12.50%，與既往研究一致[10]。 且有充分研究證實(shí)，P504s 的表達(dá)與前列腺癌的生物學(xué)行為有密切關(guān)系，P504s 高表達(dá)可在一定程度上提示惡性程度高、預(yù)后不佳[11]。 Gleason 分級系統(tǒng)是目前應(yīng)用最廣泛的前列腺癌組織病理學(xué)分級系統(tǒng)，是根據(jù)低倍鏡下觀察到的腺體生長方式、分化程度、間質(zhì)浸潤狀態(tài)來評分，可作為前列腺癌診斷、預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)，與前列腺癌患者病情發(fā)展、轉(zhuǎn)歸、預(yù)后有密切關(guān)系[12]。 本研究結(jié)果顯示，P504s 在Gleason 評分≤7 分的患者中表達(dá)強(qiáng)度小于Gleason 評分＞7分的患者；Spearman 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，Gleason分級與P504s 表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)性， 表明P504s 與前列腺癌病理分級密切相關(guān)，P504s 的表達(dá)可能在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

基底細(xì)胞缺失是前列腺癌診斷的重要形態(tài)學(xué)依據(jù)[13]。 CK-HMW 是基底細(xì)胞的重要標(biāo)志物，在前列腺腺體基底細(xì)胞中存在， 故CK-HMW 高表達(dá)提示基底細(xì)胞完好未被侵犯，可作為前列腺癌診斷、分期的輔助指標(biāo)[14]。 p63 是一種核蛋白，可在具有增殖功能的基底細(xì)胞層中選擇性表達(dá)， 故通常只在前列腺良性病變或正常前列腺組織中表達(dá)， 而在前列腺癌中不表達(dá)或低表達(dá)， 其診斷意義與CK-HMW 基本類似[15]。 S-100 蛋白是一種酸性鈣離子結(jié)合蛋白，是病理診斷中較為常見的免疫組化標(biāo)志物。 研究顯示，S-100 蛋白具有廣泛的細(xì)胞內(nèi)外生物學(xué)作用，在細(xì)胞外具有巨噬細(xì)胞激活、白細(xì)胞趨化、細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)作用，這一功能使其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。 S-100 蛋白可與p53 蛋白相互作用，促進(jìn)p53 蛋白依賴的細(xì)胞凋亡， 因此是一種腫瘤抑制因子[16～18]。本研究結(jié)果顯示，CK-HMW、p63、S-100 蛋白在PCa組中表達(dá)陽性率分別為4.35%、4.35%、48.91%，在BPH 組 表 達(dá) 陽 性 率 則 為100.00% 、100.00% 、87.50%， 表明CK-HMW、p63、S-100 蛋白均可作為鑒別前列腺良惡性病變的指標(biāo)。 CK-HMW、p63、S-100 蛋白在不同Gleason 分級中的表達(dá)強(qiáng)度差異無統(tǒng)計學(xué)意義， 且Spearman 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，Gleason 分級與三者表達(dá)強(qiáng)度均無顯著相關(guān)性， 表明CK-HMW、p63、S-100 蛋白并非可有效預(yù)測前列腺癌病情發(fā)展、預(yù)后的生物標(biāo)志。

綜上所述，P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白在前列腺癌的鑒別診斷中有重要的應(yīng)用價值，P504s可作為評價前列腺癌病情與預(yù)后的重要參考指標(biāo)。