2016—2019年常州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者酶免和核酸平行檢測(cè)結(jié)果分析

楊愛(ài)龍，濮云峰，董珀，賀晨峰

江蘇省常州市中心血站檢測(cè)中心，江蘇常州 213004

輸血治療是救治病人的一種重要手段，但存在患者因輸血感染傳染性病原體的風(fēng)險(xiǎn)，目前公認(rèn)的病原體主要包括HBV、HCV、HIV 和TP 等。 為了保證臨床用血安全， 國(guó)家對(duì)血液制品實(shí)行強(qiáng)制性檢測(cè)， 酶免檢測(cè)即ELISA 包括HBsAg、抗HCV、抗HIV 和抗TP，核酸檢測(cè)即NAT 包括HBV DNA、HCV RNA 和HIV RNA。 從病毒進(jìn)入人體開(kāi)始直至可以檢測(cè)出病毒抗原或抗體之前的時(shí)期為病毒感染的“窗口期”。 HBV、HCV 和HIV 的ELISA 檢測(cè)“窗口期”分別為56 d、72 d 和22 d[1]。 目前，廣泛應(yīng)用的ELISA 技術(shù)已非常成熟，檢測(cè)對(duì)象為抗原或抗體，對(duì)血液傳染性病毒HBV、HCV 和HIV 的檢出能力強(qiáng)，但檢測(cè)“窗口期”相對(duì)較長(zhǎng)，經(jīng)輸血傳播病毒的風(fēng)險(xiǎn)依然存在。 核酸擴(kuò)增檢測(cè)（nucleic acid amplification testing，NAT）是通過(guò)擴(kuò)增病原體核酸進(jìn)行檢測(cè)的一系列技術(shù)總稱，技術(shù)靈敏度高，檢測(cè)“窗口期”較短[2]。 為了進(jìn)一步保證輸血安全，該血站自2012年開(kāi)始采用ELISA 和NAT 平行檢測(cè)策略。 現(xiàn)回顧性分析2016—2019年度該血站的酶免和核酸檢測(cè)情況，了解無(wú)償獻(xiàn)血人群中血液傳染病的流行狀態(tài)，為降低輸血風(fēng)險(xiǎn)提供依據(jù)。 現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源與處理方法

270215例血液標(biāo)本來(lái)自2016年1月—2019年12月常州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者。使用含惰性分離膠的真空采血管留取標(biāo)本5～8 mL，第1 管不含抗凝劑用于酶免檢測(cè)，第2 管含EDTA-K2 抗凝劑用于核酸檢測(cè)。 標(biāo)本采集后8 h 內(nèi)4℃離心，酶免管4000 rpm 離心10 min，核酸管1600 g 離心20 min， 離心結(jié)束后即保存于2～8℃冰箱待檢。

1.2 儀器與試劑

TECAN 全自動(dòng)加樣儀（長(zhǎng)沙泰肯生物技術(shù)有限公司），F(xiàn)AME 全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀（瑞士HAMILTON），Cobass 201 核酸檢測(cè)系統(tǒng)[羅氏診斷（上海）產(chǎn)品有限公司]，DL5M低速冷凍離心機(jī)（長(zhǎng)沙邁佳森儀器設(shè)備有限公司），恒溫保存箱（日本松下健康醫(yī)療器械株式會(huì)社）。ELISA 試劑盒，一檢：HBs Ag（上?？迫A生物工程股份有限公司）、抗HCV（珠海麗珠試劑股份有限公司）、抗HIV（北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司）和抗TP（上?？迫A生物工程股份有限公司），二檢：HB sAg、抗HCV、抗HIV 和抗TP均為英科新創(chuàng)（廈門）科技股份有限公司。 HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA 三聯(lián)檢核酸試劑盒為羅氏診斷（上海）產(chǎn)品有限公司。室內(nèi)質(zhì)控品（北京康徹思坦生物技術(shù)有限公司）。 以上所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法

酶免檢測(cè)[3]：按照ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)、儀器操作規(guī)程進(jìn)行HBs Ag、抗HCV、抗HIV 和抗TP 的檢測(cè)，主要步驟為加樣儀加樣、酶免儀檢測(cè)、數(shù)據(jù)接收及分析。一檢和二檢項(xiàng)目分別由不同的檢驗(yàn)人員執(zhí)行，對(duì)于一檢或二檢的單項(xiàng)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行雙孔復(fù)檢。對(duì)于同一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目，一檢和/或二檢結(jié)果為陽(yáng)性就判定為陽(yáng)性結(jié)果，一檢和二檢結(jié)果均為陰性時(shí)才判定為陰性結(jié)果。 抗HIV 陽(yáng)性標(biāo)本送常州市疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室用蛋白印跡法進(jìn)行確認(rèn)。 核酸檢測(cè)：按羅氏診斷Cobass201 核酸檢測(cè)系統(tǒng)操作說(shuō)明書(shū)對(duì)ELISA 陰性標(biāo)本進(jìn)行HBV DNA、HCV RNA 和HIVRNA 的檢測(cè)，主要步驟為樣品混合（6人份為1 個(gè)pool）、核酸提取、核酸擴(kuò)增及檢測(cè)、數(shù)據(jù)接收及分析，結(jié)果陽(yáng)性的pool 進(jìn)行拆分單檢，最終確定陽(yáng)性單個(gè)標(biāo)本及項(xiàng)目。 抗HIV 跟蹤檢測(cè)：HIVRNA 陽(yáng)性者進(jìn)行抗HIV 單項(xiàng)跟蹤檢測(cè)，間隔期為4 d。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料比較采取率表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 酶免結(jié)果

270215例無(wú)償獻(xiàn)血者HBs Ag、抗HCV、抗HIV 和抗TP 的陽(yáng)性率分別為2.58‰（697 例）、1.49‰（402例）、0.23‰（61 例）和3.06‰（827 例），酶免陰性者為268264例，見(jiàn)表1。 2017年與2019年間的HBsAg 陽(yáng)性率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），2016年與2018年間的抗HCV 陽(yáng)性率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），2018年與其他年度間的抗HIV 陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而2019年與2016、2017年間的抗TP 陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 2016—2019年度270215 例無(wú)償獻(xiàn)血者HBsAg、抗HCV、抗HIV 和抗TP 檢測(cè)結(jié)果

表2 268264 例酶免陰性者HBV DNA、HCV RNA 和HIV RNA 檢測(cè)結(jié)果

2.2 核酸結(jié)果

268264例酶免陰性無(wú)償獻(xiàn)血者HBV DNA、HCV RNA 和HIVRNA 陽(yáng)性率分別為0.86‰（230 例）、0.01‰（3 例）和0.01‰（2 例），總陽(yáng)性率為0.88‰（235 例），結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 抗HIV 跟蹤檢測(cè)

第1 例HIV RNA 陽(yáng)性者在獻(xiàn)血后第12 天抗HIV為陽(yáng)性，S/CO 值為0.469。 第2 例HIVRNA 陽(yáng)性者在獻(xiàn)血后第16 天抗HIV 為陽(yáng)性，S/CO 值為0.372。

3 討論

“窗口期”的血液病毒抗原及抗體的檢測(cè)結(jié)果為陰性，但實(shí)際上血液中含有病毒，具有復(fù)制能力和傳染性[4]。另外，病毒抗原、抗體蛋白結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生變異，以及免疫沉默，容易造成ELISA 的非“窗口期”漏檢[5]。 因此，現(xiàn)有的兩次ELISA 檢測(cè)由于技術(shù)局限性完全可能造成病毒漏檢。 NAT 敏感性相對(duì)于ELISA 更高，在病毒感染后數(shù)天即能檢出標(biāo)本中的極微量的病毒核酸，可大大縮短病毒檢測(cè)“窗口期”[6]。 Busch 等利用數(shù)學(xué)模型研究證實(shí)，NAT能將HBV、HCV 和HIV 血清學(xué)ELISA 檢測(cè)的“窗口期”分別縮短約20 d、50 d 和10 d[7]。 目前NAT 被視為降低ELISA 漏檢風(fēng)險(xiǎn)的最佳解決方法[8]。因此，ELISA 和NAT平行檢測(cè)能形成很好的互補(bǔ)作用，極大降低血液病毒的漏檢風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)保證血液安全和降低輸血感染風(fēng)險(xiǎn)具有十分重要的作用。

該血站自2012年采用ELISA 和NAT 平行檢測(cè)策略以來(lái)，取得了很好的檢測(cè)效果。 2016—2019年常州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者的ELISA 檢測(cè)結(jié)果表明，HBsAg、抗HCV、抗HIV 和抗TP 的總陽(yáng)性率分別為2.58‰、1.49‰、0.23‰和3.06‰，HBsAg、抗HCV 和抗TP 的年陽(yáng)性率總體呈逐年下降趨勢(shì)，抗HIV年陽(yáng)性率有明顯波動(dòng)但總體呈上升趨勢(shì)。 NAT 檢測(cè)結(jié)果表明，268264 例酶免陰性者HBV DNA、HCVRNA 和HIVRNA 陽(yáng)性率分別為0.86‰（230例）、0.01‰（3 例）和0.01‰（2 例），顯然，HBV DNA 陽(yáng)性率遠(yuǎn)大于HCV RNA、HIV RNA 陽(yáng)性率，HCV RNA 陽(yáng)性率和HIV RNA 陽(yáng)性率基本相等。 HBV DNA 陽(yáng)性率有波動(dòng)但總體呈下降趨勢(shì)，HCV RNA 陽(yáng)性率和HIV RNA 陽(yáng)性率呈散發(fā)狀態(tài)。以上這些結(jié)果表明，ELISA 檢測(cè)“窗口期”的病毒漏檢現(xiàn)象的確存在，且證明實(shí)施NAT 檢測(cè)的必要性。

隱匿性乙型肝炎病毒感染（Occult Hepatitis B Virus Infection, OBI）定義：在現(xiàn)有檢測(cè)條件下血清HBsAg 陰性，但血清和(或)肝臟組織中HBV DNA 陽(yáng)性的一種特殊HBV 感染狀態(tài)，此時(shí)病毒載量常<200 IU/mL[9]。 在HBV 高流行的中國(guó)，獻(xiàn)血者中OBI 流行率約為0.094%[10]，顯然常州地區(qū)獻(xiàn)血者中OBI 流行率略低于全國(guó)平均水平。 OBI 獻(xiàn)血者潛在威脅著輸血安全，已成為一個(gè)不容忽視的公共衛(wèi)生問(wèn)題，應(yīng)不斷加強(qiáng)和改進(jìn)NAT 檢測(cè)。

綜上所述，ELISA 檢測(cè)與NAT 檢測(cè)能夠組成有效互補(bǔ)的血液篩查模式，可以充分反映獻(xiàn)血者病毒感染狀況，大大降低輸血感染病毒風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)積極推廣會(huì)和應(yīng)用。NAT 檢測(cè)對(duì)標(biāo)本處理、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、實(shí)驗(yàn)操作和試劑靈敏度等都有非常嚴(yán)格的要求，其檢測(cè)結(jié)果也會(huì)存在一些假陽(yáng)性和假陰性，這對(duì)實(shí)驗(yàn)室今后工作提出了更高的要求。