• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    HBV相關(guān)慢性肝病患者血清原卟啉Ⅸ檢測的臨床意義

    2021-05-17 09:56:00成若晨劉凱歌
    臨床肝膽病雜志 2021年5期
    關(guān)鍵詞:血紅素肝病肝細(xì)胞

    張 瓔,成若晨,郭 蕊,王 霞,劉凱歌

    1 西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 康復(fù)醫(yī)學(xué)科,西安 710038; 2 西安醫(yī)學(xué)院 臨床醫(yī)學(xué)院1625班,西安 710068;3 咸陽市中心醫(yī)院 老年病科,陜西 咸陽 712000; 4 西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 消化內(nèi)科,西安 710077

    慢性乙型肝炎(CHB)是常見的慢性、進(jìn)行性肝病,其發(fā)病率高,CHB可進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化(LC)甚至肝細(xì)胞癌(HCC)。我國LC和HCC 患者由HBV所致者分別為77%和84%[1],死亡率高。因此,延緩及阻斷肝病進(jìn)展對改善預(yù)后至關(guān)重要,其關(guān)鍵是肝損傷的早期預(yù)警、評估及治療。目前各臨床檢測指標(biāo)均有一定的局限性,進(jìn)一步尋找新的指標(biāo)具有重要意義。原卟啉Ⅸ(protoporphyrins Ⅸ,PPⅨ)是血紅素生物合成途徑的最終中間體,其水平變化與肝臟疾病關(guān)系密切[2]。本研究擬通過探討PPⅨ檢測在HBV相關(guān)慢性肝病患者肝損傷中的價(jià)值,以期為HBV相關(guān)慢性肝病的診治提供借鑒。

    1 資料與方法

    1.1 研究對象 本研究病例組為2018年10月—2019年10月就診于西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院診斷為HBV相關(guān)慢性肝病患者110例,其中CHB患者50例,LC患者40例,HCC患者20例。CHB患者根據(jù)轉(zhuǎn)氨酶是否升高進(jìn)一步分為靜止期(轉(zhuǎn)氨酶正常)與活動(dòng)期(轉(zhuǎn)氨酶升高),LC患者根據(jù)Child-Pugh評分分為代償期(Child-Pugh A級)與失代償期(Child-Pugh B、C級)。納入標(biāo)準(zhǔn):參照《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》[3]。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)原發(fā)性卟啉病、繼發(fā)性卟啉病非肝臟因素(如鉛中毒、巴比妥、磺胺、卡馬西平及其他非甾體類抗炎藥、雌激素等導(dǎo)致者;(2)合并嚴(yán)重心、腦、腎、肺、血液、內(nèi)分泌等原發(fā)疾病者;(3)非HBV感染的慢性肝病,如非酒精性脂肪肝、酒精性肝病、藥物性肝炎、丙型肝炎、自身免疫性肝病、血吸蟲性肝病等;(4)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征等自身免疫性疾病。對照組為同一時(shí)期在本院健康體檢人群40例,經(jīng)檢查均無HBV感染,肝功能均在正常范圍,也無其他疾病。

    1.2 檢測項(xiàng)目及方法

    1.2.1 常規(guī)檢查 常規(guī)檢查均在本院完成,包括HBV血清標(biāo)志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)、HBV DNA定量、AFP、血常規(guī)、肝功能、凝血功能等指標(biāo)。肝膽胰脾彩超、FibroScan、腹部CT、胃十二指腸鏡等檢查均由操作熟練、經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師完成。

    1.2.2 血清PPⅨ檢測 血清樣品來自于西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,禁食、禁水12 h后,清晨空腹采集5 ml外周靜脈血避光離心,取上清液分裝于1.5 ml避光EP管中-80 ℃凍存。采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography, HPLC)檢測血清PPⅨ,在西安醫(yī)學(xué)院藥物分析測試中心完成。

    (1)主要儀器及試劑:安捷倫1260 HPLC儀、配套二元泵、熒光檢測器以及數(shù)據(jù)處理軟件工作站(Agilent,美國)。PPⅨ標(biāo)準(zhǔn)品(上海源葉生物科技有限公司)。

    (2)色譜條件:美國Agilent 5 TC-C18色譜柱(250×4.6 mm,5 μm),柱溫30 ℃;流動(dòng)相 A純凈水(含0.5%冰乙酸),B甲醇∶乙腈∶DMF=45∶45∶10,以B∶A=95∶5等度洗脫。流速1 ml/min,激發(fā)波長400 nm,發(fā)射波長630 nm,增益16。

    (3)PPⅨ標(biāo)準(zhǔn)品混合液配置:精密稱取PPⅨ標(biāo)準(zhǔn)品1 mg溶于1 ml DMF溶液中配置濃度為1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液,再逐級稀釋至濃度分別為100、70、30、10、7、3、1 ng/dl,作為實(shí)驗(yàn)中測定血清中PPⅨ的校正集。

    (4)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:按上述色譜條件及稀釋濃度進(jìn)行分析,每次進(jìn)樣20 μl,連續(xù)進(jìn)樣3次取平均峰面積為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(ng/dl),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.246 4X+0.308 6,R2=0.999 8,最低檢測濃度0.1 ng/dl,標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測范圍:1~100 ng/dl。

    (5)血樣處理及檢測:解凍血漿樣品300 μl加700 μl甲醇定容至1 ml,震蕩,高速冷凍離心后取上清液進(jìn)行含量測定,每份樣品進(jìn)樣3次取平均值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算被檢者血清PPⅨ。HPLC法檢測PPⅨ標(biāo)品、血樣出峰圖像如下(圖1)。

    注:a,原卟啉Ⅸ標(biāo)準(zhǔn)品;b,對照組;c,病例組。

    1.3 倫理學(xué)審查 本研究方案經(jīng)由西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審批,批號:XYYFY2021LSK-002,所有研究對象均簽署知情同意書。

    2 結(jié)果

    2.1 基本資料的比較 CHB組、LC組、HCC組與對照組在性別、年齡上比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)(表1)。

    表1 患者基本資料的比較

    2.2 各組血清PPⅨ檢測結(jié)果 (1)Kruskal-WallisH檢驗(yàn)顯示,CHB、LC、HCC 3組肝病患者血清PPⅨ顯著高于對照組[44.29(25.99~85.36)ng/dl、72.73(48.28~90.43)ng/dl、91.79(68.34~121.52)ng/dl vs 15.43(10.87~20.16)ng/dl],差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.05)。HCC組較CHB、LC組PPⅨ顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.05)(圖2)。(2)Mann-WhitneyU檢驗(yàn)顯示,與代償期LC患者相比較,失代償期LC患者PPⅨ顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而CHB患者活動(dòng)期與靜止期PPⅨ比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

    圖2 對照組與病例組血清PPⅨ水平

    表2 CHB與LC患者組內(nèi)PPⅨ水平

    2.3 PPⅨ診斷HBV相關(guān)慢性肝病的效能 ROC曲線顯示,PPⅨ診斷CHB的曲線下面積(AUC)為0.873,95%CI:0.797~0.949,利用約登指數(shù)確定臨界值為20.325ng/dl,其敏感度為86%,特異度為77.5%;診斷LC的AUC為0.748,95%CI:0.659~0.838,臨界值為33.695 ng/dl,其敏感度為90%,特異度為61.1%;診斷HCC的AUC為0.812,95%CI:0.729~0.896,臨界值為65.26 ng/dl,其敏感度為85%,特異度為69.2%(圖3)。

    注:a,PPⅨ診斷CHB的ROC曲線;b,PPⅨ診斷LC的ROC曲線;c,PPⅨ診斷HCC的ROC曲線。

    2.4 CHB靜止期與對照組PPⅨ及肝功能比較 靜止期CHB患者肝功能指標(biāo)除ChE較健康對照組升高外(P=0.032),其余指標(biāo)與對照組相比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05);而CHB患者的PPⅨ顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

    表3 CHB患者靜止期與對照組PPⅨ及肝功能指標(biāo)比較

    2.5 PPⅨ與各肝功能評估指標(biāo)的相關(guān)性分析 CHB患者PPⅨ與各指標(biāo)均不存在相關(guān)性(P值均>0.05);LC患者PPⅨ與TBil呈中等正相關(guān)(rs=0.587,P<0.05),與Alb呈中等負(fù)相關(guān)(rs=-0.408,P<0.05);HCC患者PPⅨ與TBil呈中等正相關(guān)(rs=0.470,P<0.05),與ChE呈中等負(fù)相關(guān)(rs=-0.459,P<0.05)(表4)。

    表4 PPⅨ與各指標(biāo)的相關(guān)性分析

    3 討論

    HBV感染是全球最重大公共衛(wèi)生安全問題之一,可進(jìn)展為CHB甚至LC、HCC等終末期肝病,給患者和社會(huì)造成沉重的負(fù)擔(dān),同時(shí)擠占大量的醫(yī)療資源。而早期預(yù)防及治療,對于阻止疾病進(jìn)展及改善預(yù)后具有重要意義。CHB的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,迄今尚未完全闡明,目前認(rèn)為肝細(xì)胞損害主要是由HBV引起的免疫應(yīng)答反應(yīng)所導(dǎo)致[1]。此外,HBV誘導(dǎo)線粒體氧化應(yīng)激、線粒體自噬以及釋放炎性因子可能是肝病進(jìn)展的重要原因[4]。PPⅨ是血紅素生物合成途徑的最終中間體,起始和終末兩個(gè)關(guān)鍵步驟均在肝細(xì)胞線粒體進(jìn)行[2],遺傳性和后天性疾病以及某些外源生物可能干擾血紅素的合成和PPⅨ的體內(nèi)平衡,導(dǎo)致PPⅨ的蓄積[5]。大量的PPⅨ具有肝毒性,損害肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞,肝細(xì)胞損傷后肝臟對PPⅨ的清除作用進(jìn)一步減弱,血漿和紅細(xì)胞中PPⅨ水平可逐漸升高[5]。研究[6]表明,HBV或許影響肝細(xì)胞內(nèi)PPⅨ代謝和血紅素合成,而PPⅨ與HBV相關(guān)慢性肝病進(jìn)展的關(guān)系及其能否用于肝損傷的早期預(yù)警及病情評估鮮有報(bào)道。

    本研究利用HPLC法,高效、高靈敏的檢測了對照組和慢性肝病患者的血清PPⅨ。結(jié)果顯示,在HBV感染者疾病進(jìn)程的不同階段均存在PPⅨ表達(dá)異常。與對照組相比,肝病患者的PPⅨ顯著升高,這與以往的研究結(jié)果一致[7-9],也驗(yàn)證了該方法的有效性。Nakano等[10]研究發(fā)現(xiàn),HCV核心蛋白可以增加貓白血病病毒C亞類受體1(feline leukemia virus subgroup C receptor 1, FLVCR1)和藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體ATP結(jié)合盒G家族成員2(ATP-binding cassette subfamily G member 2, ABCG2)的mRNA表達(dá),降低ATP結(jié)合盒B家族成員6(ATP-binding cassette subfamily B member 6, ABCB6)的mRNA表達(dá),HBV核心蛋白同樣如此[6]。FLVCR1是轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白促進(jìn)因子超家族成員,可以輸出血紅素和PPⅨ[11];ABCG2主要定位于細(xì)胞外膜和線粒體膜,負(fù)責(zé)PPⅨ的外排;而ABCB6是線粒體卟啉攝取所必需的[12],其表達(dá)水平直接影響細(xì)胞內(nèi)的PPⅨ濃度[13]。HBV感染者血清中PPⅨ升高可能是HBV核心蛋白通過增加卟啉轉(zhuǎn)運(yùn)體FLVCR1和 ABCG2的表達(dá),降低ABCB6的表達(dá),使PPⅨ從肝細(xì)胞輸出增加,輸入減少,導(dǎo)致血漿中PPⅨ水平升高。同時(shí),HBV可引起線粒體功能障礙和氧化應(yīng)激[6,14],導(dǎo)致血紅素合成障礙和PPⅨ的蓄積,造成肝細(xì)胞損害。血紅素合成減少負(fù)反饋引起卟啉合成限速酶氨基 γ 酮戊酸合成酶1的增加,又加速了PPⅨ的合成。肝細(xì)胞損害也使PPⅨ的清除能力下降,肝腸循環(huán)增加,導(dǎo)致血清中PPⅨ水平進(jìn)一步升高。

    PPⅨ增減與肝病輕重,特別是肝損傷程度密切相關(guān)[7],血清PPⅨ還可能與慢性肝病進(jìn)展呈活動(dòng)度依賴性,CHB患者活動(dòng)期與靜止期PPⅨ相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可能與納入CHB患者肝損傷普遍較輕及樣本量較小有關(guān)。與代償期LC患者相比,失代償期患者肝功能嚴(yán)重受損,PPⅨ水平也顯著升高,說明PPⅨ檢測不但能反映肝損傷,還能幫助判斷病情進(jìn)展情況。本研究發(fā)現(xiàn)HCC患者PPⅨ較CHB、LC患者均顯著增加,說明HCC時(shí)卟啉代謝紊亂較慢性肝病更為突出。線粒體功能障礙已被認(rèn)為是癌癥的標(biāo)志[15],肝癌患者PPⅨ顯著升高可能是因?yàn)榫€粒體功能障礙引起氧化應(yīng)激從而干擾卟啉代謝和血紅素的生成。也有學(xué)者[9]認(rèn)為可能是惡性腫瘤刺激機(jī)體卟啉代謝的某個(gè)限速酶,使其活性增強(qiáng),產(chǎn)生大量PPⅨ超過了機(jī)體對其的利用,導(dǎo)致血中PPⅨ水平顯著升高。

    研究[7,16]證實(shí)HBV感染者PPⅨ水平與肝病進(jìn)展相關(guān),但目前僅有一項(xiàng)研究[9]調(diào)查了PPⅨ在HCC患者中的診斷價(jià)值,PPⅨ能否作為CHB、LC和HCC鑒別診斷的潛在標(biāo)志物,目前尚未闡明。本研究通過ROC曲線分析顯示,當(dāng)PPⅨ取最佳臨界值20.325、33.695、65.26 ng/dl時(shí),采用PPⅨ診斷CHB、LC和HCC的敏感度均在85%以上,特異度均在60%以上,說明PPⅨ對HBV相關(guān)慢性肝病診斷的敏感度較高,但特異度特差,因此PPⅨ不具備診斷價(jià)值。進(jìn)一步對靜止期CHB患者和對照組的PPⅨ水平和肝功能指標(biāo)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),靜止期CHB患者肝功能指標(biāo)與對照組相比,無明顯變化,而PPⅨ水平顯著高于健康對照組,提示PPⅨ是肝損傷的早期事件。在慢性HBV感染時(shí),HBV最早損傷肝細(xì)胞線粒體,作為PPⅨ代謝的主要細(xì)胞器,線粒體的損傷影響了PPⅨ的正常代謝,此時(shí)肝細(xì)胞的其他亞細(xì)胞器未損傷,表現(xiàn)為膽紅素、轉(zhuǎn)氨酶等反映肝損傷的指標(biāo)均正常,而血清PPⅨ異常。因此PPⅨ是反映肝臟早期輕微損傷的敏感指標(biāo),具有作為HBV肝損傷的早期預(yù)警潛質(zhì),可能用于急性、活動(dòng)性、慢加急性肝損傷或肝衰竭等的預(yù)警、轉(zhuǎn)歸及預(yù)后評估。

    Spearman相關(guān)性分析表明PPⅨ水平可能與肝功能障礙和膽汁淤積的程度有關(guān),這與國外學(xué)者的報(bào)道相一致[8,17]。HBV損傷肝細(xì)胞,使膽紅素和PPⅨ攝取、代謝和排泄能力降低,血清中膽紅素和PPⅨ水平升高。血清中的PPⅨ既有游離態(tài)的,又存在和蛋白質(zhì)結(jié)合形式的,血清白蛋白能夠作為PPⅨ的載體參與物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)[18]。卟啉轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白FLVCR1輸出血紅素受到細(xì)胞外血紅素結(jié)合蛋白和Alb的嚴(yán)格控制,在缺乏載體蛋白的情況下FLVCR不能輸出血紅素[11]。本研究LC和HCC組PPⅨ顯著升高,可能與患者Alb合成減少,輸出血紅素亦減少導(dǎo)致PPⅨ的蓄積有關(guān),也說明PPⅨ可作為肝損傷的評估指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)HBV感染者PPⅨ不與ALT、AST呈顯著的相關(guān)性,這可能與ALT、AST僅在肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯炎癥及壞死時(shí)才升高有關(guān),也可能是反映肝損傷的不同發(fā)病機(jī)理或不同分子通路。

    綜上所述,HBV相關(guān)慢性肝病患者血清PPⅨ顯著升高,且與慢性肝病進(jìn)展呈活動(dòng)度依賴性,可作為肝損傷的早期預(yù)警和病情評估的潛在臨床指標(biāo),對評價(jià)肝損傷程度、判斷肝臟儲(chǔ)備功能、協(xié)助慢性肝病診治具有一定的臨床意義。同時(shí),由于本研究樣本量較小和樣本的局限性,其結(jié)果推廣應(yīng)用有待進(jìn)一步研究。

    利益沖突聲明:本研究不存在研究者、倫理委員會(huì)成員、受試者監(jiān)護(hù)人以及與公開研究成果有關(guān)的利益沖突。

    作者貢獻(xiàn)聲明:張瓔、成若晨負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì),資料分析,撰寫論文;郭蕊、王霞參與收集數(shù)據(jù)與樣本檢測;劉凱歌負(fù)責(zé)擬定寫作思路,指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。

    猜你喜歡
    血紅素肝病肝細(xì)胞
    非酒精性脂肪性肝病的中醫(yī)治療
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:49:06
    外泌體miRNA在肝細(xì)胞癌中的研究進(jìn)展
    你還在把“肝病” 當(dāng)“胃病”在治嗎?
    肝博士(2020年4期)2020-09-24 09:21:30
    一種基于LBP 特征提取和稀疏表示的肝病識(shí)別算法
    肝細(xì)胞程序性壞死的研究進(jìn)展
    肝細(xì)胞癌診斷中CT灌注成像的應(yīng)用探析
    血紅素氧合酶-1與急性腎損傷研究新進(jìn)展
    血紅素加氧酶-1對TNF-α引起內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷的保護(hù)作用
    肝病很復(fù)雜,久患肝病未必成良醫(yī)
    肝博士(2015年2期)2015-02-27 10:49:42
    SIAh2與Sprouty2在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義
    久久久久久久久大av| 超碰av人人做人人爽久久| 91久久精品国产一区二区成人| 国精品久久久久久国模美| 97热精品久久久久久| 干丝袜人妻中文字幕| 免费人成在线观看视频色| 看免费成人av毛片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 2018国产大陆天天弄谢| 日本欧美国产在线视频| 少妇精品久久久久久久| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 欧美性感艳星| 热re99久久精品国产66热6| 国产精品国产av在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 国产成人免费观看mmmm| 能在线免费看毛片的网站| 欧美极品一区二区三区四区| 一个人看的www免费观看视频| 中文欧美无线码| 一级毛片电影观看| 亚洲精品第二区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品av视频在线免费观看| 黄色怎么调成土黄色| 韩国高清视频一区二区三区| 十八禁网站网址无遮挡 | 日韩强制内射视频| 水蜜桃什么品种好| 欧美老熟妇乱子伦牲交| av免费观看日本| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 激情五月婷婷亚洲| 美女高潮的动态| 久久亚洲国产成人精品v| 中文字幕av成人在线电影| 久久久国产一区二区| 国产精品久久久久成人av| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 永久网站在线| 日韩三级伦理在线观看| 午夜老司机福利剧场| 欧美成人午夜免费资源| 啦啦啦啦在线视频资源| 免费大片黄手机在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 深爱激情五月婷婷| 亚洲精品成人av观看孕妇| av视频免费观看在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 午夜激情久久久久久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产午夜精品一二区理论片| av播播在线观看一区| 我要看日韩黄色一级片| 色视频www国产| 色5月婷婷丁香| 久久久亚洲精品成人影院| 一级a做视频免费观看| 国产片特级美女逼逼视频| 国产色婷婷99| 中文天堂在线官网| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 精品久久国产蜜桃| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲久久久国产精品| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品爽爽va在线观看网站| 久久人人爽人人片av| 国产精品不卡视频一区二区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 美女福利国产在线 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 天天躁日日操中文字幕| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产精品一区二区在线观看99| 久久久成人免费电影| 欧美成人一区二区免费高清观看| 青春草视频在线免费观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲内射少妇av| 97精品久久久久久久久久精品| 免费看不卡的av| 这个男人来自地球电影免费观看 | 男女边吃奶边做爰视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 在线播放无遮挡| 免费观看av网站的网址| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 一边亲一边摸免费视频| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美精品亚洲一区二区| 国产精品久久久久久精品古装| av在线app专区| 欧美+日韩+精品| 身体一侧抽搐| 日日撸夜夜添| 亚洲精品久久午夜乱码| 在线免费观看不下载黄p国产| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美人与善性xxx| h日本视频在线播放| 亚洲av中文av极速乱| 成人特级av手机在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 精品亚洲成a人片在线观看 | 欧美区成人在线视频| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美最新免费一区二区三区| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品福利在线免费观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 在线免费观看不下载黄p国产| 好男人视频免费观看在线| 三级国产精品片| 超碰97精品在线观看| 国产91av在线免费观看| 另类亚洲欧美激情| 国产成人精品久久久久久| 午夜福利高清视频| 亚洲欧美精品专区久久| 精品国产三级普通话版| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 青青草视频在线视频观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产成人aa在线观看| 成人综合一区亚洲| 日本黄大片高清| 高清av免费在线| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久韩国三级中文字幕| 内地一区二区视频在线| 精品视频人人做人人爽| 国产高清不卡午夜福利| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产亚洲精品久久久com| 国产淫语在线视频| 一个人看的www免费观看视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 在线观看国产h片| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲不卡免费看| 乱码一卡2卡4卡精品| 岛国毛片在线播放| av国产免费在线观看| av在线播放精品| 晚上一个人看的免费电影| 国产91av在线免费观看| 免费看不卡的av| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 多毛熟女@视频| 欧美精品亚洲一区二区| a级毛色黄片| 99久久精品一区二区三区| 国产av一区二区精品久久 | 少妇人妻精品综合一区二区| 国产美女午夜福利| 成人午夜精彩视频在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产美女午夜福利| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲欧美日韩东京热| 国产精品无大码| 高清av免费在线| 97超视频在线观看视频| 在线观看一区二区三区| 亚洲精品视频女| 七月丁香在线播放| 国内精品宾馆在线| av专区在线播放| 国产精品偷伦视频观看了| 久久 成人 亚洲| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 免费观看在线日韩| 99久久中文字幕三级久久日本| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲av免费高清在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 成人午夜精彩视频在线观看| 老司机影院毛片| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美一区二区亚洲| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 午夜日本视频在线| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲av免费高清在线观看| 成人美女网站在线观看视频| 性高湖久久久久久久久免费观看| 在线观看免费日韩欧美大片 | 国内精品宾馆在线| 日日啪夜夜爽| 国产毛片在线视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 少妇的逼好多水| 麻豆成人午夜福利视频| 日本欧美视频一区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 伦精品一区二区三区| 永久免费av网站大全| 成人国产麻豆网| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久人人爽人人片av| 欧美日本视频| 一区二区三区精品91| 国产高清国产精品国产三级 | 2022亚洲国产成人精品| 成人影院久久| 久久精品久久久久久久性| 国产伦理片在线播放av一区| 国产精品成人在线| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 99热这里只有精品一区| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产一区二区在线观看日韩| 最后的刺客免费高清国语| kizo精华| 亚州av有码| 在线免费十八禁| 中文字幕久久专区| 亚洲第一区二区三区不卡| 一区在线观看完整版| 一级二级三级毛片免费看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲欧美日韩无卡精品| 天天躁日日操中文字幕| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲色图av天堂| 日日撸夜夜添| 国内精品宾馆在线| 成人一区二区视频在线观看| 91久久精品电影网| 国国产精品蜜臀av免费| 51国产日韩欧美| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久99精品国语久久久| 精品少妇久久久久久888优播| 成年免费大片在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 一级毛片电影观看| 丝袜喷水一区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产乱来视频区| 日本免费在线观看一区| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 久久久久视频综合| av线在线观看网站| 亚洲精品日韩av片在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 男女免费视频国产| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 成人午夜精彩视频在线观看| 欧美三级亚洲精品| 久久久久视频综合| 下体分泌物呈黄色| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日本av免费视频播放| av国产精品久久久久影院| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲成色77777| 国产亚洲91精品色在线| 久久精品夜色国产| 日韩国内少妇激情av| 日本vs欧美在线观看视频 | 在线免费观看不下载黄p国产| 麻豆成人av视频| 最新中文字幕久久久久| 春色校园在线视频观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产一区二区三区av在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产免费一级a男人的天堂| 舔av片在线| 久久久久久人妻| 制服丝袜香蕉在线| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 晚上一个人看的免费电影| 在线观看av片永久免费下载| 成人无遮挡网站| 国产精品99久久久久久久久| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 观看av在线不卡| 麻豆成人午夜福利视频| 我的老师免费观看完整版| 丰满少妇做爰视频| 国产在线免费精品| 欧美一区二区亚洲| 午夜视频国产福利| 精品午夜福利在线看| 亚洲国产精品国产精品| 久久精品国产自在天天线| 国产乱来视频区| 男的添女的下面高潮视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 黄色日韩在线| 美女内射精品一级片tv| 免费av不卡在线播放| av国产精品久久久久影院| 熟女av电影| 黑人猛操日本美女一级片| 国产免费又黄又爽又色| 日韩中文字幕视频在线看片 | 国产精品三级大全| 免费黄频网站在线观看国产| 97超视频在线观看视频| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲图色成人| 亚洲av成人精品一二三区| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲精品,欧美精品| 少妇 在线观看| 边亲边吃奶的免费视频| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲国产高清在线一区二区三| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产av精品麻豆| 天天躁日日操中文字幕| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产成人免费无遮挡视频| 97超碰精品成人国产| 少妇的逼好多水| 精品久久久噜噜| 色吧在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 99热网站在线观看| 一个人免费看片子| 亚洲av福利一区| av在线老鸭窝| 大片电影免费在线观看免费| 久久这里有精品视频免费| 久久久久视频综合| 青春草视频在线免费观看| 亚洲国产欧美在线一区| 丝袜喷水一区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 精品熟女少妇av免费看| 亚洲四区av| 全区人妻精品视频| 亚洲欧美清纯卡通| 国产精品一区二区性色av| 亚洲欧美清纯卡通| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲国产色片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久精品夜色国产| 久久99精品国语久久久| 亚洲精品456在线播放app| 婷婷色麻豆天堂久久| 午夜激情福利司机影院| 国产精品福利在线免费观看| 色视频www国产| 街头女战士在线观看网站| 99热6这里只有精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久精品国产亚洲网站| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 人人妻人人看人人澡| 亚洲国产欧美人成| 熟女av电影| 欧美性感艳星| 看免费成人av毛片| 欧美成人a在线观看| 国产精品.久久久| 一二三四中文在线观看免费高清| 成人亚洲精品一区在线观看 | 亚洲性久久影院| 舔av片在线| 日韩成人伦理影院| 观看美女的网站| 亚洲国产精品999| 国产高清国产精品国产三级 | 国产成人a∨麻豆精品| 国产精品.久久久| 国产成人免费无遮挡视频| 九草在线视频观看| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品一区二区在线观看99| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 一区二区三区四区激情视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费大片18禁| 国产欧美亚洲国产| 亚洲国产精品一区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 女人久久www免费人成看片| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产探花极品一区二区| 91在线精品国自产拍蜜月| 黄色一级大片看看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 免费观看av网站的网址| 国产成人aa在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲av二区三区四区| 青青草视频在线视频观看| 日韩中字成人| 久久影院123| 99热这里只有是精品50| 亚洲精品aⅴ在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 日本wwww免费看| 国产精品一二三区在线看| 久久久久久九九精品二区国产| 我要看日韩黄色一级片| 中文字幕久久专区| 精品久久久久久电影网| 韩国高清视频一区二区三区| 22中文网久久字幕| 久久精品久久精品一区二区三区| 联通29元200g的流量卡| 男女下面进入的视频免费午夜| 99久国产av精品国产电影| 蜜桃在线观看..| 久久久久视频综合| 美女高潮的动态| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲综合精品二区| 日韩国内少妇激情av| 亚洲精品国产成人久久av| 国产成人a区在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 嘟嘟电影网在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 久久婷婷青草| 美女国产视频在线观看| 国产精品伦人一区二区| 久久精品人妻少妇| a 毛片基地| 我的老师免费观看完整版| 最近手机中文字幕大全| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产视频首页在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 性色avwww在线观看| 国产高潮美女av| 99热全是精品| 视频区图区小说| 亚洲av成人精品一区久久| 免费av中文字幕在线| 精品熟女少妇av免费看| 久久国内精品自在自线图片| 午夜福利在线在线| 国产91av在线免费观看| 欧美精品国产亚洲| 亚洲,欧美,日韩| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 超碰av人人做人人爽久久| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 丰满少妇做爰视频| 中文天堂在线官网| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲综合色惰| h视频一区二区三区| 视频中文字幕在线观看| 久久国产精品大桥未久av | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 一本一本综合久久| 街头女战士在线观看网站| 99久久人妻综合| 2018国产大陆天天弄谢| 免费看光身美女| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 免费观看的影片在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久人妻熟女aⅴ| 性色avwww在线观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲久久久国产精品| 国产精品女同一区二区软件| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产亚洲最大av| 亚洲欧美成人精品一区二区| 青春草亚洲视频在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 激情 狠狠 欧美| 久久亚洲国产成人精品v| 国产精品爽爽va在线观看网站| 久久久欧美国产精品| 97在线视频观看| a级一级毛片免费在线观看| 精品久久国产蜜桃| 久久婷婷青草| av一本久久久久| 国产精品不卡视频一区二区| 天堂8中文在线网| 人妻一区二区av| 日本爱情动作片www.在线观看| 人妻一区二区av| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲av国产av综合av卡| 欧美成人午夜免费资源| 黑人猛操日本美女一级片| 性高湖久久久久久久久免费观看| 乱系列少妇在线播放| 日韩中字成人| h视频一区二区三区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 永久免费av网站大全| 久热久热在线精品观看| 国产亚洲91精品色在线| 九草在线视频观看| 人妻少妇偷人精品九色| 日韩不卡一区二区三区视频在线| a级一级毛片免费在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲最大成人中文| 久久久色成人| 26uuu在线亚洲综合色| 免费人成在线观看视频色| 久久6这里有精品| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲精品国产av蜜桃| 精品久久国产蜜桃| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久人人爽人人片av| 亚洲av.av天堂| 久久av网站| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品人妻视频免费看| 夜夜爽夜夜爽视频| 久久 成人 亚洲| 久久久亚洲精品成人影院| 老熟女久久久| 国产精品精品国产色婷婷| 国产有黄有色有爽视频| 国产亚洲一区二区精品| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 欧美人与善性xxx| 女性被躁到高潮视频| 一区在线观看完整版| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久精品人妻少妇| 涩涩av久久男人的天堂| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 丰满少妇做爰视频| 中文欧美无线码| 成人综合一区亚洲| 在线观看免费高清a一片| 午夜日本视频在线| 免费黄频网站在线观看国产| 嫩草影院新地址| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久久久人妻精品一区果冻| 天堂中文最新版在线下载| 晚上一个人看的免费电影| 欧美国产精品一级二级三级 | 日韩中文字幕视频在线看片 | 男人爽女人下面视频在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲国产最新在线播放| 国产 一区精品| 日韩电影二区| 六月丁香七月| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产av码专区亚洲av| 国产成人aa在线观看| 日本色播在线视频| 午夜福利视频精品| 午夜免费观看性视频| 国产av码专区亚洲av| 国产黄色视频一区二区在线观看| 99久国产av精品国产电影| 黑丝袜美女国产一区| 一本一本综合久久| av在线观看视频网站免费| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 欧美成人a在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 韩国av在线不卡| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产乱来视频区| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产日韩欧美亚洲二区| 精品久久国产蜜桃| 久久婷婷青草| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产精品一区二区在线观看99| 国产淫片久久久久久久久| 久久99精品国语久久久| 国产久久久一区二区三区|