改良隔日禁食干預(yù)對(duì)大鼠減脂效果的影響及Irisin調(diào)控作用

付悅 于亮 高揚(yáng)

1 北京體育大學(xué)運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)學(xué)院（北京100084）

2 蘇州市體育科學(xué)研究所（江蘇蘇州215131）

間歇性禁食（intermittent fasting，IF）是指機(jī)體周期性的保持禁食與攝食交替進(jìn)行的一種方法[1]，其中，隔日禁食（alternate-day fasting，ADF）是IF 的主要形式，由24 h 禁食與24 h 自由攝食交替進(jìn)行組成。前期對(duì)ADF 的研究發(fā)現(xiàn)，4 周ADF 具有控制體重、降低體脂的作用[2]，但長(zhǎng)期ADF不僅會(huì)由于能量尤其是蛋白質(zhì)攝入不足造成骨骼肌質(zhì)量下降[3]，還可因?yàn)榻硶r(shí)間過(guò)長(zhǎng)造成人體實(shí)驗(yàn)中受試者消化系統(tǒng)問(wèn)題及心理壓力過(guò)大無(wú)法堅(jiān)持實(shí)驗(yàn)等情況[4]。因此有學(xué)者提出更容易被接受的改良隔日禁食（alternate-day modified fasting，ADMF）方法，即指在ADF 基礎(chǔ)上，于禁食日給予25%的基礎(chǔ)能量食物，期間飲水自由，這種方法不良反應(yīng)少[5]，且與中等強(qiáng)度有氧運(yùn)動(dòng)的效果近似，都可以引起機(jī)體能量代謝狀態(tài)發(fā)生變化。已經(jīng)證明IF可以通過(guò)改變腸道菌群促進(jìn)白色脂肪棕色化，同時(shí)上調(diào)解偶聯(lián)蛋白1（uncoupling protein-1，UCP1）促進(jìn)脂肪產(chǎn)熱[6]，而鳶尾素（Irisin）這一肌肉因子可與脂肪組織交互作用（crosstalk），增加機(jī)體能量消耗[7]，引發(fā)白色脂肪棕色化[8]，受能量代謝狀態(tài)變化調(diào)控。ADMF 可否達(dá)到與運(yùn)動(dòng)近似的減脂效果，其減脂的主要機(jī)制是否通過(guò)改變能量代謝狀態(tài)，調(diào)控Irisin促使白色脂肪棕色化尚需證實(shí)。Irisin 的前體蛋白為含Ⅲ型纖連蛋白域蛋白5（fibronectin type Ⅲdomain containing，F(xiàn)NDC5），也是研究Irisin 的重要蛋白。本研究通過(guò)建立4 周ADMF 模型，與ADF模型、中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)模型相比較，觀(guān)察4 周ADMF 干預(yù)對(duì)大鼠減脂效果的影響，探討白色脂肪棕色化FNDC5-Irisin-UCP1 信號(hào)通路在ADMF 干預(yù)過(guò)程中的表達(dá)情況，為“禁食減脂”方法的不斷優(yōu)化提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

40 只8 周齡SPF 級(jí)雄性SD 大鼠，體重300 ± 20 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，在北京體育大學(xué)SPF 級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)、訓(xùn)練，溫度20℃～24℃，晝夜明暗交替各12 小時(shí)，大鼠3 天預(yù)適應(yīng)后隨機(jī)分為4組，分別為對(duì)照組（C組）、運(yùn)動(dòng)組（E組）、隔日禁食組（ADF組）、改良隔日禁食組（ADMF組），每組10只。

1.2 方法

1.2.1 干預(yù)方法

（1）禁食方法：ADF 組和ADMF 組單籠飼養(yǎng)，預(yù)適應(yīng)期間每天稱(chēng)量大鼠的飼料量，計(jì)算得出大鼠平均每日進(jìn)食量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，為26.28 ± 1.95 g/天，正式實(shí)驗(yàn)期間，ADF 組大鼠24 h 禁食和24 h 攝食循環(huán)進(jìn)行，ADMF 組在Krista 等[9]制定的ADMF 方案基礎(chǔ)上，根據(jù)Parvaresh 等[10]提出的建議修改Krista 等制定的ADMF方案，即大鼠24 h 部分禁食和24 h 自由攝食循環(huán)進(jìn)行，禁食日給予25%基礎(chǔ)能量飼料。6.6 g/只/天，在1 h內(nèi)吃完，兩組飲水自由。以上禁食和稱(chēng)量均在每天同一時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行。見(jiàn)圖1。

圖1 ADF與ADMF模型（1周）示意圖

（2）運(yùn)動(dòng)模型：運(yùn)動(dòng)組進(jìn)行65% VO2max強(qiáng)度的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，預(yù)適應(yīng)期間前兩天進(jìn)行5 min，10 m/min 的訓(xùn)練，后兩天進(jìn)行15 min，15 m/min 的訓(xùn)練。正式實(shí)驗(yàn)時(shí)60 min/天，5天/周，第1周坡度為0°，15 m/min，從第2周開(kāi)始坡度5°，18 m/min。

1.2.2 雙能X線(xiàn)吸收測(cè)量法（DEXA）

在實(shí)驗(yàn)干預(yù)前后對(duì)大鼠進(jìn)行DEXA 掃描，校準(zhǔn)儀器，將麻醉的大鼠放于掃描床上的指定位置，錄入身長(zhǎng)、體重后開(kāi)始掃描，掃描結(jié)束后保存、分析數(shù)據(jù)，記錄大鼠體脂率。

1.2.3 取材

4 周干預(yù)結(jié)束后禁食12 h，采用戊巴比妥鈉麻醉大鼠，50 mg/kg 體重進(jìn)行腹腔注射，對(duì)大鼠進(jìn)行心尖取血，保留血液并離心，取上清保存。按次序分離雙側(cè)腓腸肌、腎周脂肪、附睪脂肪、腹股溝脂肪和肩胛處棕色脂肪，分別稱(chēng)量其濕重。取新鮮腓腸肌約黃豆粒大小，用冰凍切片包埋劑（optimal cutting temperature compound，OCT）進(jìn)行包埋，取適量腎周脂肪、附睪脂肪投入4%多聚甲醛溶液中，以制備石蠟包埋樣品，骨骼肌和脂肪剩余部分包在錫紙中投入液氮桶，以用于Western Blot實(shí)驗(yàn)，置于－80℃保存。

1.2.4 蛋白印跡測(cè)試（Western Blot）

取各部分樣品0.1 g，剪碎后加入含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer），冰上勻漿，4℃靜止30 min。在4℃、12000 rpm 條件下離心8 min 取上清，加入RIPA 裂解液和5×loading buffer 將樣品濃度調(diào)至統(tǒng)一，在100℃加熱10 min，－40℃冷凍備用。

Western Blot 檢測(cè)骨骼肌中AMPKα、p-AMPKα（Thr172）、PGC-1α、FNDC5 蛋白表達(dá)，脂肪組織中UCP1 蛋白表達(dá)。采用10%分離膠濃度，進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，300 mA下轉(zhuǎn)膜1.5 h，5%牛蛋白血清（bovine serum albumin，BSA）封閉3 h，使用5%BSA 配制一抗，AMPKα濃度1 ∶2000、p-AMPKα（Thr172）濃度1∶500、PGC-1α濃度1∶1000、FNDC5濃度1∶2000、GAPDH 濃度1∶2000、β-actin 濃度1∶1000、UCP1濃度附睪組織1 ∶1000、肩胛組織1 ∶5000）。4℃過(guò)夜。二抗?jié)舛染鶠?∶2000，孵育1.5 h，洗膜后曝光。Image Lab軟件進(jìn)行灰度值分析。

1.2.5 免疫熒光檢測(cè)Laminin

細(xì)胞外層粘連蛋白Laminin 位于細(xì)胞外基質(zhì)，是基膜的特有成分和主要功能成分。通過(guò)檢測(cè)其定位，可以反映骨骼肌橫截面積[2]。對(duì)大鼠腓腸肌進(jìn)行包埋，冰凍切片機(jī)預(yù)冷至－20℃，用OCT 將包埋樣品粘到底座上，粗調(diào)待露出組織后再用8 μm 細(xì)調(diào)，將切下的組織固定在防脫載玻片上，－80℃保存。

樣品取出后，用4%多聚甲醛4°C 固定10 min。用含有0.3%Triton 的PBS 破膜30 min，用含有0.1%Triton 的PBS 搖床洗3 次，每次5 分鐘。用免疫組化筆標(biāo)示樣本范圍，在樣品上滴加5%羊血清封閉30 min。5%羊血清配置層粘連蛋白抗體（Laminin）作為一抗，濃度為1∶500，滴加后濕盒4℃過(guò)夜。次日加入熒光二抗，濃度為1∶500，DAPI 封片，利用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行拍攝，每組取3 只，每只選8 張片子，Image -Pro Plus軟件統(tǒng)計(jì)分析骨骼肌橫截面積。

1.2.6 ELISA法檢測(cè)血清Irisin

將各組大鼠血清樣品取出，在酶標(biāo)包被板上加入規(guī)定劑量的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品，留出空白孔，封板后37℃孵育30 min。洗滌酶標(biāo)板。在各孔中加入酶標(biāo)試劑，封板后37℃孵育30 min。洗滌酶標(biāo)板。在各孔中加入顯色劑，37℃避光顯色15 min。加入終止液用酶標(biāo)儀測(cè)定，記錄各組數(shù)據(jù)。

1.2.7 脂肪HE染色

將存于4%多聚甲醛的附睪脂肪組織和腎周脂肪組織用流水沖洗12 h 后進(jìn)行脫水，脫水完畢后使用石蠟包埋機(jī)進(jìn)行包埋。

將包埋的石蠟組織進(jìn)行縱行切片，厚度為7 μm，進(jìn)行HE 染色。切片放入烤箱中，60℃30 min，脫蠟、水化，用蘇木素染料染色12 min，流水沖洗1 min，然后浸入蒸餾水、鹽酸酒精分化，氨水反藍(lán)，流水沖洗1 min，用伊紅染料復(fù)染5 min，流水沖洗1 min，酒精脫水，最后在二甲苯中浸泡，使用中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下采集圖像信息，使用Case Viewer 軟件對(duì)脂肪組織切片進(jìn)行觀(guān)察并保存400 倍鏡下的圖像，利用Image -Pro Plus 對(duì)脂肪細(xì)胞面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，每張圖片測(cè)量3 次取平均值。

1.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，使用Image J、SPSS 22.0、GraphPad Prism、Image pro plus 等軟件進(jìn)行分析處理，組間分析采用單因素方差分析，方差齊時(shí)使用LSD法，方差不齊時(shí)使用Tamhane’s T2法，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.05。

1.3 主要儀器及試劑

AMPKα抗體，ab80039，Abcam 公司；p-AMPK 抗體，ab133448，Abcam 公司；PGC-1α，ab54481，Abcam 公司，F(xiàn)NDC5 抗體，ab174833，Abcam 公司；UCP1 抗體，ab10983，Abcam 公司；Irisin ELISA 試劑盒，AD0002RA，Andy gene; Laminin 抗體，ab11575，Abcam 公司；磷酸酶抑制劑，Roche 公司；蛋白酶抑制劑，Roche公司；BCA 蛋白測(cè)定試劑盒，Thermo公司。Western Blotting 電泳儀、電轉(zhuǎn)儀，Bio-Rad公司；xMark 酶標(biāo)儀，Bio-Rad公司；防脫載玻片，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

2 結(jié)果

2.1 運(yùn)動(dòng)與禁食后體重、體脂的變化

如表1 所示，4 周實(shí)驗(yàn)干預(yù)后，運(yùn)動(dòng)組、隔日禁食組和改良隔日禁食組的體重相比于對(duì)照組均顯著降低（P＜0.01）。從4 周干預(yù)期間大鼠體重增長(zhǎng)趨勢(shì)來(lái)看，對(duì)照組、運(yùn)動(dòng)組和改良隔日禁食組大鼠體重從第2周開(kāi)始相比于初始值即明顯增加（P＜0.01），而隔日禁食組體重增幅最小，直至第4周才與初始值有顯著差異（P＜0.05）。

表1 大鼠體重增長(zhǎng)趨勢(shì)（g，每組n=10）

如表2 所示，運(yùn)動(dòng)組、隔日禁食組和改良隔日禁食 組的體脂率相比于對(duì)照組和初始值均減少（P＜0.05）。

表2 大鼠體脂含量（%，每組n=10）

2.2 運(yùn)動(dòng)與禁食后腓腸肌濕重/體重和橫截面積的變化

4 周干預(yù)后，運(yùn)動(dòng)組腓腸肌濕重/體重（9.71×10-3± 0.68×10-3）與對(duì)照組（9.44×10-3± 0.30×10-3）相比無(wú)顯著差異，隔日禁食組（8.59×10-3± 0.59×10-3）和改良隔日禁食組（8.84×10-3± 0.48×10-3）與對(duì)照組相比顯著減?。≒＜0.05），且隔日禁食組減小更明顯（P＜0.01）。

如圖2 所示，4 周干預(yù)后，運(yùn)動(dòng)組和改良隔日禁食組的肌肉橫截面積相比于對(duì)照組無(wú)明顯變化，但隔日禁食組肌肉橫截面積顯著減少（P＜0.01）。

圖2 各組大鼠腓腸肌橫截面積與免疫熒光圖

2.3 運(yùn)動(dòng)與禁食后脂肪濕重/體重和脂肪面積的變化

由表3 可知，4 周干預(yù)后，運(yùn)動(dòng)組、隔日禁食組和改良隔日禁食組的附睪脂肪、腎周脂肪和腹股溝脂肪濕重/體重相比于對(duì)照組均顯著減少（P＜0.01），三個(gè)干預(yù)組的肩胛脂肪（以棕色脂肪為主）濕重/體重相比于對(duì)照組有增高的趨勢(shì)但無(wú)顯著性差異。

表3 大鼠不同部位的脂肪濕重/體重（10-3，每組n=10）

對(duì)附睪、腎周脂肪細(xì)胞面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，如圖3、圖4所示，對(duì)照組（2176.24 ± 905.92 μm2）、運(yùn)動(dòng)組（2013.56 ± 1045.41 μm2）、隔日禁食組（2268.15 ±1189.48 μm2）和改良隔日禁食組（2263.25 ± 1056.38 μm2）四組大鼠附睪脂肪細(xì)胞面積無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而運(yùn)動(dòng)組（2660.65 ± 1324.41 μm2）、隔日禁食組（1910.46± 923.58 μm2）和改良隔日禁食組（2114.14 ±1297.93 μm2）大鼠腎周脂肪細(xì)胞面積顯著小于對(duì)照組（4065.88 ± 2227.94 μm2）面積（P＜0.01）。

圖3 附睪脂肪、腎周脂肪細(xì)胞面積

圖4 附睪脂肪和腎周脂肪HE染色（×400，標(biāo)尺=50 μm）

2.4 運(yùn)動(dòng)與禁食后大鼠骨骼肌中蛋白表達(dá)

如圖5 所示，4 周干預(yù)后，四組AMPKα蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異，運(yùn)動(dòng)組、隔日禁食組和改良隔日禁食組p-AMPKα（Thr172）蛋白表達(dá)和p-AMPKα（Thr172）/AMPKα與對(duì)照組相比顯著升高（P＜0.05）。

圖5 腓腸肌AMPKα、p-AMPKα（Thr172）、PGC-1α、FNDC5蛋白表達(dá)變化

4周干預(yù)后，相比于對(duì)照組，運(yùn)動(dòng)組、隔日禁食組和改良隔日禁食組腓腸肌中的PGC-1α蛋白表達(dá)顯著升高（P＜0.01），說(shuō)明運(yùn)動(dòng)和禁食都可以誘導(dǎo)腓腸肌內(nèi)PGC-1α蛋白表達(dá)的升高。

4 周干預(yù)后，運(yùn)動(dòng)組、隔日禁食組和改良隔日禁食組的FNDC5蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.5 運(yùn)動(dòng)與禁食后大鼠血清Irisin水平

如圖6 所示，4 周干預(yù)后，與對(duì)照組相比，運(yùn)動(dòng)組、隔日禁食組和改良隔日禁食組Irisin 濃度顯著提高（P＜0.05）。

圖6 大鼠血清Irisin水平

2.6 運(yùn)動(dòng)與禁食后大鼠脂肪中蛋白表達(dá)

如圖7 所示，4 周干預(yù)后，運(yùn)動(dòng)組、隔日禁食組和改良隔日禁食組的附睪脂肪和腎周脂肪中UCP1 蛋白表達(dá)相比于對(duì)照組顯著增加（P＜0.01）。

圖7 附睪脂肪和腎周脂肪UCP1蛋白表達(dá)

3 討論

3.1 改良隔日禁食可以有效控制體重、降低減脂

禁食是一種有效減少能量攝入的手段，此外還有延長(zhǎng)壽命、增強(qiáng)免疫、改善心腦血管疾病、促進(jìn)大腦的神經(jīng)可塑性等益處[11-14]，它是通過(guò)耗盡肝細(xì)胞中的糖原，引起機(jī)體從糖類(lèi)供能向脂肪供能的轉(zhuǎn)變，促進(jìn)脂肪“燃燒”，減少體脂，從而達(dá)到有效控制體重及體脂含量的目的[15]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，4 周間歇性禁食可以控制大鼠體重、體脂增長(zhǎng)，且效果優(yōu)于中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)[3]。對(duì)肥胖者進(jìn)行改良隔日禁食，發(fā)現(xiàn)體重、腰圍和脂肪量顯著減少，如果食物中增加少量蛋白質(zhì)，還可以提高飽腹感，有利于受試者長(zhǎng)期配合[16]。即使對(duì)于正常受試者來(lái)說(shuō)，改良隔日禁食對(duì)降低體脂也有顯著效果[17，18]。本實(shí)驗(yàn)4 周干預(yù)后，改良隔日禁食組的體重、體脂與運(yùn)動(dòng)組和隔日禁食組變化趨勢(shì)相近，說(shuō)明改良隔日禁食同樣可以有效控制體重、降低體脂含量。運(yùn)動(dòng)可以保持或增加肌肉質(zhì)量[19]，4 周干預(yù)后改良隔日禁食組和運(yùn)動(dòng)組腓腸肌橫截面積相似，說(shuō)明改良隔日禁食不會(huì)影響腓腸肌肌肉質(zhì)量，而隔日禁食組可能由于強(qiáng)度過(guò)大，腓腸肌質(zhì)量下降嚴(yán)重。對(duì)大鼠附睪、腎周脂肪細(xì)胞面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)后，發(fā)現(xiàn)各組附睪脂肪細(xì)胞面積無(wú)顯著差別，也許是因?yàn)橹械葟?qiáng)度運(yùn)動(dòng)和本實(shí)驗(yàn)的禁食刺激并未達(dá)到可以引起附睪脂肪細(xì)胞面積減小的有效強(qiáng)度，但是三個(gè)干預(yù)組的腎周脂肪面積相比于對(duì)照組顯著減小，內(nèi)臟脂肪細(xì)胞面積減小更加有益于機(jī)體健康[20]，推測(cè)改良隔日禁食選擇性地影響了內(nèi)臟脂肪細(xì)胞大小。在實(shí)驗(yàn)喂養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)，禁食組的大鼠并未在攝食日暴飲暴食，反而總的能量攝入只占對(duì)照組的80%左右，推測(cè)禁食組體重小于對(duì)照組的原因可能是由于總能量攝入的減少。同時(shí)，4周禁食和運(yùn)動(dòng)干預(yù)后均激活“能量感受器”AMPK，說(shuō)明改良隔日禁食與運(yùn)動(dòng)一樣，可以有效刺激機(jī)體能量代謝發(fā)生改變。

3.2 隔日禁食可激活FNDC5-Irisin-UCP1 通路和白色脂肪棕色化

鳶尾素（Irisin）是過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子（peroxisome proliferator -activated receptor gamma coactivated 1-alpha，PGC-1α）的依賴(lài)性肌肉因子，前體蛋白FNDC5 受PGC-1α的調(diào)控，隨循環(huán)系統(tǒng)進(jìn)入血液后刺激白色脂肪棕色化和產(chǎn)熱作用，是運(yùn)動(dòng)減肥及防治代謝性疾病的新靶點(diǎn)[21]。在人體中，白色脂肪組織（white adipose tissue，WAT）作用是保溫和儲(chǔ)存化學(xué)能[20]；棕色脂肪組織（brown adipose tissue，BAT）通過(guò)線(xiàn)粒體解偶聯(lián)蛋白1（uncoupling protein-1，UCP1）介導(dǎo)的生熱作用來(lái)維持體溫，但成年人沒(méi)有活性的BAT[21]；而米色脂肪組織（beige adipose tissue）在成年人中仍然存在，它在基礎(chǔ)狀態(tài)下類(lèi)似于白色脂肪組織，UCP1 表達(dá)極低，當(dāng)受到特定刺激后表型會(huì)“轉(zhuǎn)分化”，出現(xiàn)類(lèi)似于棕色脂肪組織的多腔狀改變[22]，即所謂的白色脂肪棕色化，同時(shí)表現(xiàn)為UCP1 蛋白表達(dá)升高[24]，脂肪產(chǎn)熱增加，且米色脂肪組織優(yōu)先對(duì)Irisin敏感，即Irisin會(huì)通過(guò)對(duì)米色脂肪組織的特定作用刺激白色脂肪棕色化[25]，所以充分利用白色脂肪棕色化來(lái)減脂比試圖激活BAT有更大的可行性。

運(yùn)動(dòng)引起機(jī)體能量代謝改變，激活A(yù)MPK 及下游PGC-1α[26]，引起FNDC5/Irisin 高表達(dá)[21，27，28]，血清中的Irisin 與脂肪組織交互作用（cross-talk）促進(jìn)UCP1 的表達(dá)，增加脂肪產(chǎn)熱[7]。理論上，禁食與運(yùn)動(dòng)對(duì)于機(jī)體來(lái)說(shuō)都是一種巨大的刺激，哺乳動(dòng)物禁食12～24 h 會(huì)使血糖降低和肝糖原耗盡，細(xì)胞中AMP/ATP 比率增加，AMPK 被激活[1]，脂肪組織中UCP1 蛋白表達(dá)上調(diào)[29]，但其間促進(jìn)脂肪產(chǎn)熱、降低體脂的機(jī)制尚不明確。本研究4 周干預(yù)后發(fā)現(xiàn)，三個(gè)干預(yù)組腓腸肌的p-AMPKα（Thr172）/AMPKα 表達(dá)顯著升高，通過(guò)AMPK 磷酸化刺激了下游的PGC-1α和FNDC5/Irisin 表達(dá)升高，同時(shí)附睪脂肪和腎周脂肪中UCP1蛋白高表達(dá)，產(chǎn)生白色脂肪棕色化的反應(yīng)，說(shuō)明改良隔日禁食方法與運(yùn)動(dòng)一樣，均可通過(guò)改變能量代謝狀態(tài)調(diào)控刺激FNDC5-Irisin-UCP1信號(hào)通路及白色脂肪棕色化。

3.3 改良隔日禁食是一種更科學(xué)合理的減脂方法

為了保證禁食實(shí)驗(yàn)的科學(xué)有效，人體實(shí)驗(yàn)中對(duì)受試者饑餓、飽腹感和飲食滿(mǎn)意度都通過(guò)視覺(jué)模擬量表（visual analogue scales，VAS）來(lái)衡量[30]。Heilbronn的隔日禁食實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)VAS量表衡量受試者感受，發(fā)現(xiàn)受試者在禁食日的饑餓感并沒(méi)有減少[31]，而改良隔日禁食實(shí)驗(yàn)中，受試者饑餓感降低，實(shí)驗(yàn)滿(mǎn)意度和飽腹感增加，甚至與能量攝入限制方法相比，改良隔日禁食是一種更好的非藥物減脂方案，且受試者并不會(huì)在攝食日暴飲暴食，這是一種飲食行為良好的表現(xiàn)[15，32]，更重要的是，通過(guò)對(duì)受試者的飲食失調(diào)癥狀進(jìn)行多維評(píng)估發(fā)現(xiàn)，改良隔日禁食是一種安全有效的減脂方法，并不會(huì)引起胃腸道紊亂和睡眠障礙[33]。本研究中，雖然隔日禁食組的體重下降值更大，但體重的劇烈變化伴隨能量攝入的缺失會(huì)明顯影響到骨骼肌質(zhì)量；在降低體脂和保持肌肉質(zhì)量方面，改良隔日禁食同樣效果顯著，且減脂機(jī)制與運(yùn)動(dòng)相似，都是通過(guò)調(diào)節(jié)能量代謝狀態(tài)和影響Irisin相關(guān)機(jī)制來(lái)促進(jìn)脂肪產(chǎn)熱。

4 小結(jié)

4周改良隔日禁食不僅能夠有效控制大鼠體重、降低體脂含量，還可以平衡基礎(chǔ)能量攝入，保證骨骼肌質(zhì)量，整體效果優(yōu)于隔日禁食。此方法可通過(guò)改變能量狀態(tài)調(diào)控FNDC5-Irisin-UCP1 信號(hào)通路促使白色脂肪棕色化，達(dá)到減脂效果。