宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變與陰道微生態(tài) HPV TRAIL及IL-32的關(guān)系研究

閆曉華，董 立，彭寶相，張紀(jì)云，程振娜，劉瑞磊

(1山東醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，山東 臨沂 276000；2臨沂市人民醫(yī)院；3臨沂市腫瘤醫(yī)院)

宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial neoplasia，CIN)是宮頸癌前病變的統(tǒng)稱，是發(fā)展為宮頸癌的必經(jīng)階段。HPV是一種嗜上皮性病毒，其持續(xù)感染是導(dǎo)致宮頸癌的重要原因[1-3]。而有關(guān)CIN與陰道微生態(tài)的關(guān)系還不是很明確，與TRAIL、IL-32表達(dá)的研究還未見(jiàn)報(bào)道。為此，本研究對(duì)CIN、陰道微生態(tài)、HPV及陰道TRAIL、IL-32的水平進(jìn)行分析，旨在揭示它們之間的關(guān)系，為宮頸癌的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年9月—2020年9月在臨沂市人民醫(yī)院就診的172例患者，年齡25～55歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：性生活規(guī)律；月經(jīng)規(guī)律；近1個(gè)月無(wú)陰道病治療史；無(wú)宮頸錐切術(shù)史；對(duì)本研究知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：宮頸腺細(xì)胞異常者；妊娠期或哺乳期；生殖器官其他感染性疾病者；免疫功能低下或免疫性疾病患者；惡性腫瘤患者；合并心肺肝等重要臟器功能異常者。

1.2方法 于月經(jīng)結(jié)束后5～7 d內(nèi)采集標(biāo)本；樣本采集前3 d不同房、坐浴或行陰道沖洗。先行液基薄層細(xì)胞(TCT)檢查，并在陰道鏡下采集宮頸組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，根據(jù)TCT和病理學(xué)診斷，診斷為CIN的87例女性作為觀察組；TCT結(jié)果為無(wú)明確診斷意義的鱗狀細(xì)胞病變，但病理結(jié)果為正常的85例作為對(duì)照組。

1.2.1陰道微生態(tài)檢測(cè) 常規(guī)采集受試者陰道側(cè)壁中上方1/3部位分泌物，0.5 h內(nèi)于陰道自動(dòng)檢測(cè)工作站(江蘇碩世生物)檢測(cè)，人工顯微鏡(10×40)復(fù)核清潔度、菌群密集度、菌群多樣性等，判斷標(biāo)準(zhǔn)參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第4版。

1.2.2HPV檢測(cè)常規(guī)方法采集宮頸口分泌物標(biāo)本，采用HPV分型檢測(cè)試劑盒(凱普生物有限公司)，PCR擴(kuò)增、雜交法顯示高危型HPV亞型14種，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68型。

1.2.3陰道沖洗液細(xì)胞因子檢測(cè) 用0.9%無(wú)菌生理鹽水5 ml，沖洗宮頸口及陰道，自后穹窿吸出灌洗液，混勻后，3000 r/min、4℃離心5 min，取上清液，ELISA法檢測(cè)上清液TRAIL濃度(上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司)及IL-32 濃度(北京萬(wàn)泰德瑞診斷技術(shù)有限公司)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1陰道微生態(tài)及HPV檢測(cè)結(jié)果比較 兩組陰道微生態(tài)各指標(biāo)及HPV感染率比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 兩組陰道微生態(tài)及HPV檢測(cè)結(jié)果比較[n(%)]

表2 兩組TRAIL和IL-32的表達(dá)情況比較

2.2陰道灌洗液細(xì)胞因子比較 兩組TRAIL、IL-32濃度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

3 討論

陰道微生態(tài)是個(gè)非常敏感的系統(tǒng)，正常情況下以乳酸桿菌為主，其他多種微生物并存。在受到內(nèi)源性和外源性因素的影響下，容易發(fā)生改變，從而引起疾病的發(fā)生[4-5]。本研究顯示，觀察組微生態(tài)各指標(biāo)均明顯高于對(duì)照組，提示其菌群紊亂，乳酸桿菌減少，雜菌增多，陰道有炎癥。

HPV是一種人乳頭瘤病毒，有上百個(gè)亞型，據(jù)統(tǒng)計(jì)，80%左右的女性一生中會(huì)感染HPV病毒，很多感染者在2年內(nèi)通過(guò)機(jī)體自身免疫，病毒能夠被清除，僅有少部分持續(xù)感染，高危亞型HPV的持續(xù)感染與CIN及宮頸癌有密切關(guān)系[1-3]。本研究顯示觀察組HPV感染率明顯增高。

TRAIL屬于腫瘤壞死因子超家族成員，在機(jī)體各種組織中廣泛存在，其特點(diǎn)是能夠誘導(dǎo)病理細(xì)胞或病毒感染細(xì)胞凋亡，而對(duì)正常細(xì)胞不誘導(dǎo)凋亡，參與機(jī)體的免疫防御功能。IL-32是近年發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子，在炎癥發(fā)生過(guò)程中起到放大作用，其可能通過(guò)放大多核細(xì)胞對(duì)病原微生物的吞噬和殺傷功能，從而促進(jìn)釋放炎性介質(zhì)誘導(dǎo)單核細(xì)胞向吞噬細(xì)胞分化[6]，所以在炎癥反應(yīng)中起正向調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果表明，觀察組TRAIL濃度明顯低于對(duì)照組，IL-32濃度明顯高于對(duì)照組。提示CIN改變時(shí)，對(duì)局部的免疫監(jiān)控能力下降，炎性變促進(jìn)了細(xì)胞的瘤樣改變。

總之，陰道微生態(tài)異常導(dǎo)致局部免疫力下降，易致HPV感染，而HPV感染可導(dǎo)致局部上皮發(fā)生變化，易引起炎性因子及免疫調(diào)控因子改變，這些因素共同促進(jìn)CIN的發(fā)生。因此，可以通過(guò)檢測(cè)陰道微生態(tài)、HPV、TRAIL及IL-32水平，進(jìn)行早期預(yù)防及指導(dǎo)治療。