抗腫瘤中藥青龍衣化學(xué)成分研究

付起鳳,宋紅娟,馬丹娜,劉艷,于海龍,周媛媛*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2.哈爾濱市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江 哈爾濱 150525)

核桃楸(JuglansmandshuricaMaxim)是胡桃科胡桃屬落葉喬木，作為一種名貴樹(shù)種，僅分布在亞洲東北部地區(qū)[1]。青龍衣為胡桃科植物核桃楸(JuglansmandshuricaMaxim)的未成熟果實(shí)的外果皮，該藥最初記載于《開(kāi)寶本草》，從《山東中草藥手冊(cè)》稱(chēng)之為“青龍衣”后，現(xiàn)一直延用此名稱(chēng)。味辛、苦，性澀、平，具有清熱解毒、祛風(fēng)療癬、止痛止痢等功效，作為中草藥應(yīng)用已有千年的歷史?，F(xiàn)代藥理研究表明青龍衣可以治療白癜風(fēng)、頑癬等皮膚疾患，具有顯著抗腫瘤效果，尤其對(duì)胃癌、肝癌臨床已取得了比較滿(mǎn)意的療效。目前已報(bào)道青龍衣主要化學(xué)成分類(lèi)型有二芳基庚烷、萘醌、黃酮及苯丙素類(lèi)等，后續(xù)又發(fā)現(xiàn)了三萜類(lèi)成分。本實(shí)驗(yàn)對(duì)青龍衣中三萜類(lèi)成分開(kāi)展相關(guān)研究，分離得到14個(gè)化合物，分別鑒定為2α-羥基齊墩果酸(2α-hydroxy oleanolic acid,1)，2α,23-二羥基齊墩果酸(2α,23-dihydroxy oleanolic acid,2)，齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖(oleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranoside,3)，阿江欖仁酸(arjunolic acid,4)，青錢(qián)柳酸A(cyclocaric acid A,5)，青錢(qián)柳酸B(cyclocaric acid B,6)，蒲公英萜醇(taraxerol,7)，2α-羥基熊果酸(2α-hydroxy ursolic acid, 8)，23-羥基熊果酸(23-hydroxy ursolic acid,9)，2α,3α,19α-三羥基熊果酸(2α,3α,19α-trihydroxy ursolic acid,10)，2α,3β,19α-三羥基熊果酸-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2α,3β,19α-trihydroxy urs-12-en-28-O-β-D-glucopyranoside, 11)，青錢(qián)柳苷I(cyclocarioside I, 2)，木栓酮(friedelin,13)，3-羥基-30-去甲基-20-酮基-28-羽扇豆酸(3-hydroxy-30-nor-20-oxo-28-lupanoic acid,14)。其中，化合物3～7、11～14首次從青龍衣中分離得到。

1 儀器與材料

AV-400型超導(dǎo)核磁共振儀(Bruker公司)；Q-TOF(ESI)高分辨質(zhì)譜儀(Waters公司)；柱色譜硅膠(200～300目)和薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠(chǎng))；其余均為分析純。

青龍衣藥材于2017年7月采自吉林省長(zhǎng)白山地區(qū)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王振月教授鑒定為胡桃科植物核桃楸(JuglansMandshuricaMaxim)的未成熟外果皮，標(biāo)本(20170715)保存于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)教研室。

2 提取與分離

將陰干的青龍衣藥材(5.0 kg)適當(dāng)粉碎，以95%乙醇回流提取3次，每次1 h，減壓濃縮得到浸膏(695.5 g)。浸膏加適量蒸餾水分散后，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯及水飽和的正丁醇進(jìn)行萃取，萃取物減壓濃縮，得各萃取部位。取二氯甲烷萃取部位270.2 g，乙酸乙酯萃取部位180.6 g，經(jīng)硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫、反復(fù)硅膠柱層析及重結(jié)晶等方法共分離純化得到14個(gè)化合物:1～14。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：473 [M+H]+, 推測(cè)分子量為472，分子式為C30H48O4。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表1)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表2)。與文獻(xiàn)[2]對(duì)照，故鑒定化合物1為2α-羥基齊墩果酸。

化合物2：無(wú)色針晶(MeOH)。ESI-MSm/z：489 [M+H]+, 推測(cè)分子量為488，分子式為C30H48O5。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表1)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表2)。與文獻(xiàn)[3]對(duì)照，故鑒定化合物2為2α,23-二羥基齊墩果酸。

化合物3：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：641 [M+Na]+, 推測(cè)分子量為618，分子式為C36H58O8。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表1)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表2)。與文獻(xiàn)[4]對(duì)照，故鑒定化合物3為齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：489[M+H]+, 推測(cè)分子量為488，分子式為C30H48O5。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表1)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表2)。與文獻(xiàn)[5]對(duì)照，故鑒定化合物4為阿江欖仁酸。

化合物5：白色結(jié)晶性粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：455 [M+H]+, 相對(duì)分子質(zhì)量為454，分子式為C30H46O3。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表1)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表2)。與文獻(xiàn)[6]對(duì)照，故鑒定化合物5為青錢(qián)柳酸A。

化合物6：無(wú)色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：487 [M+H]+, 推測(cè)分子量為486，分子式為C30H46O5。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表1)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表2)。與文獻(xiàn)[7]對(duì)照，故鑒定化合物6為青錢(qián)柳酸B。

化合物7：無(wú)色針晶(MeOH)。ESI-MSm/z：427 [M+H]+, 推測(cè)分子量為426，分子式為C30H50O。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表1)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表2)。與文獻(xiàn)[8]對(duì)照，故鑒定化合物7為蒲公英萜醇。

表2 化合物1～7的13C-NMR數(shù)據(jù)(C5D5N)

表1 化合物1～7的1H-NMR數(shù)據(jù)(C5D5N)

化合物8：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：473 [M+H]+, 推測(cè)分子量為472，分子式為C30H48O4。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表3)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表4)。與文獻(xiàn)[3]對(duì)照，故鑒定該化合物8為2α-羥基熊果酸。

化合物9：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：473 [M+H]+, 推測(cè)分子量為472，分子式為C30H48O4。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表3)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表4)。與文獻(xiàn)[3]對(duì)照，故鑒定化合物9為23-羥基熊果酸。

化合物10：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：489 [M+H]+, 推測(cè)分子量為488，分子式為C30H48O5。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表3)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表4)。與文獻(xiàn)[9]對(duì)照，故確定化合物10為2α,3α,19α-三羥基熊果酸。

化合物11：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：683 [M+Na]+, 推測(cè)分子量為664，分子式為C36H64O9。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表3)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表4)。與文獻(xiàn)[10]對(duì)照，故鑒定化合物11為2α,3β,19α-三羥基熊果酸-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物12：白色粉末狀結(jié)晶(MeOH)。ESI-MSm/z：777 [M+Na]+, 推測(cè)分子量為754，分子式為C41H70O12。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表3)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表4)。與文獻(xiàn)[11]對(duì)照，故鑒定化合物12為青錢(qián)柳苷I。

化合物13：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：427 [M+H]+, 推測(cè)分子量為426，分子式為C30H50O。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表3)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表4)。與文獻(xiàn)[12]對(duì)照，故鑒定化合物13為木栓酮。

化合物14：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：459 [M+H]+, 推測(cè)分子量為458，分子式為C29H46O4。1H-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表3)；13C-NMR譜的全部信號(hào)進(jìn)行了相應(yīng)歸屬(見(jiàn)表4)。與文獻(xiàn)[13]對(duì)照，故鑒定化合物14為3-羥基-30-去甲基-20-酮基-28-羽扇豆酸。

表3 化合物8～14的1H-NMR數(shù)據(jù)(C5D5N)

表4 化合物8～14的13C-NMR數(shù)據(jù)(C5D5N)

4 討論

化合物3～7,11～14首次從青龍衣中分離得到。目前已有文獻(xiàn)[14-15]報(bào)道，三萜類(lèi)化合物具有良好的抗腫瘤作用，且三萜皂苷抗腫瘤效果更為顯著。但是國(guó)內(nèi)外對(duì)于三萜皂苷抗腫瘤作用的構(gòu)效關(guān)系的研究還不是很成熟。上述化合物為青龍衣抗腫瘤作用機(jī)制研究奠定了藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并且這些化合物能否和青龍衣中抗腫瘤主要成分胡桃醌增效減毒還需更深入的探討和研究。