丹參多酚酸鹽減輕糖尿病腎病小鼠腎纖維化的機(jī)制研究

楊冰， 高飛， 劉令今， 張堯， 張翠輕， 檀淼， 檀金川

（1.河北中醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)院，河北石家莊 050000；2.河北中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腎病一科，河北石家莊 050000；3.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北石家莊 050000）

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是引起終末期腎病的主要原因，占全球范圍內(nèi)終末期腎病的30% ～50%[1]，而導(dǎo)致DN 的發(fā)生發(fā)展是多種病理變化共同的結(jié)果，包括細(xì)胞外基質(zhì)蛋白沉積、腎小球基底膜增厚以及電荷屏障丟失、腎小球系膜基質(zhì)擴(kuò)張、足突融合消失和足細(xì)胞丟失等[2-4]。DN 的發(fā)展不僅需要控制血糖升高這一源頭，更應(yīng)警惕疾病發(fā)生過(guò)程中并發(fā)的腎組織纖維化的進(jìn)展。臨床研究顯示，丹參多酚酸鹽在改善糖尿病患者的早期炎癥反應(yīng)中具有確切的療效，還可以改善腎功能相關(guān)指標(biāo)以及減輕腎組織纖維化的病理程度，從而延緩慢性腎臟疾病的進(jìn)展[5-7]。本課題組在前期實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，丹參多酚酸鹽可以有效抑制或減少膜性腎病大鼠腎小球基底膜免疫復(fù)合物的沉積及基底膜的增厚，延緩腎病進(jìn)展[8-9]。在此基礎(chǔ)上，本研究以DN小鼠為模型，進(jìn)一步從分子水平探討丹參多酚酸鹽改善DN小鼠腎纖維化的可能機(jī)制，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 8周齡清潔級(jí)雄性C57BL/6小鼠60只，體質(zhì)量（20±2）g，購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（冀）2018-004。飼養(yǎng)于河北中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（室溫、濕度、光照適宜），普通飼料喂養(yǎng)。

1.3 儀器 穩(wěn)豪型血糖儀（強(qiáng)生有限公司）；7170A 全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司）；Eco 實(shí)時(shí)定量PCR儀（美國(guó)Illumina 公司）；1-15K高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Sigma 公司）；RM-2126RT 型切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司）；CU600恒溫水浴震蕩器（姜堰市醫(yī)療器械有限公司）；BX53光學(xué)顯微鏡（日本Olympus 公司）；DYCZ-24D 型垂直電泳槽（北京六一公司）； Mini-PROTEAN3 電泳系統(tǒng)、Mini Trans-Blot轉(zhuǎn)移系統(tǒng)（美國(guó)伯樂(lè)公司）。

1.4 分組、造模及給藥 將60只小鼠稱定體質(zhì)量并編號(hào)按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為4組，即正常組、模型組、貝那普利組、丹參多酚酸鹽組，每組各15 只。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，通過(guò)連續(xù)5 d腹腔注射40 mg·kg-1STZ（溶于0.1 mol/L 檸檬酸緩沖液，pH = 4.0）建立DN 小鼠模型。腹腔注射STZ 5 d 后檢測(cè)血糖水平，若血糖＞16.7 mmol·L-1則可判斷糖尿病模型復(fù)制成功，此后每周監(jiān)測(cè)小鼠血糖和24 h尿微量蛋白（24-hour urinary microprotein，UMP）水平。8 周后以UMP ＞30 mg 為DN 模型成功標(biāo)準(zhǔn)[10]。成功造模后，按照成人用藥的配伍比例及小鼠與成人的體表面積換算法[11]計(jì)算小鼠給藥劑量。丹參多酚酸鹽組：將注射用丹參多酚酸鹽與0.1 mL 生理鹽水配成溶液后腹腔注射，劑量為25.9 mg/kg（相當(dāng)于等效成人劑量200 mg/d），再給予0.2 mL蒸餾水灌胃；貝那普利組：將貝那普利磨成細(xì)粉溶于0.2 ml 蒸餾水中灌胃，劑量為1.30 mg/kg（相當(dāng)于成人10 mg/d），再給予0.1 mL 生理鹽水腹腔注射；正常組和模型組：給予等體積蒸餾水灌胃及等體積生理鹽水腹腔注射。每日1 次，連續(xù)4 周。實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠均有死亡。

1.5 觀察指標(biāo)與方法

1.5.1 生化指標(biāo)測(cè)定 采用終點(diǎn)法檢測(cè)尿蛋白濃度，24 h 尿蛋白總量（24h UTP）=尿蛋白濃度×24 h尿量。所有大鼠禁食8 h后尾靜脈采血，血糖分析儀檢測(cè)空腹血糖（FBG）。眼球取血，采用全自動(dòng)生化分析儀按試劑盒說(shuō)明方法操作檢測(cè)血清肌酐（SCr）、BUN水平。

1.5.2 酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）檢測(cè)腎臟組織氧化應(yīng)激因子SOD、GSH-Px活性及MDA含量 取小鼠腎臟組織勻漿上清液，根據(jù)SOD、GSH-Px、MDA ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)，應(yīng)用酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定SOD 吸光度值，采用可見(jiàn)分光光度計(jì)于420 nm波長(zhǎng)處測(cè)定GSH-Px吸光度值、于532 nm波長(zhǎng)處測(cè)定MDA吸光度值。

1.5.3 過(guò)碘酸六胺銀（PASM）和Masson 染色法觀察腎臟病理學(xué)變化 用40 g/L的多聚甲醛固定液固定腎組織，常規(guī)乙醇梯度脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片（厚度2 μm）、二甲苯脫蠟、乙醇梯度水化后，PASM、Masson 染色，封片，光學(xué)顯微鏡下放大400倍采集圖像。

1.5.4 蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測(cè)小鼠腎臟組織p-Smad2/3、Smad2/3、Smad7 蛋白表達(dá)情況 稱取100 mg 腎組織，剪碎后置于EP 管內(nèi)，加入裂解液含細(xì)胞酶抑制劑提取蛋白，并測(cè)定蛋白含量。取上樣蛋白10 ～15 μg，電泳，轉(zhuǎn)膜。室溫下用50 g/L 脫脂牛奶封閉。加入一抗，4 ℃孵育過(guò)夜。加入二抗，37 ℃孵育1 h。顯影。所得結(jié)果與內(nèi)參校正和比較。

1.5.5 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)Smad7、Smad2/3、TGF-β1 mRNA 表達(dá)水平 根據(jù)說(shuō)明書(shū)，用TRIzol 試劑提取腎臟總RNA，并用PrimeScript 試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄成cDNA。將cDNA放于熒光定量PCR儀擴(kuò)增。擴(kuò)增條件：95 ℃10 min、95 ℃15 s、60 ℃60 s，循環(huán)40 次。使用2△△CT法計(jì)算目的基因mRNA 表達(dá)水平，以β-actin 為內(nèi)參。引物由北京Servicebio 公司設(shè)計(jì)合成。β-actin上游引物序列為5’-AGGCCAACCGTGAAAAGATG-3’，下游引物序列為5’-ACCAGAGGCATACAGGG ACAA-3’，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為266 bp；Smad2 上游引物序列為5’-AGGAACAAAAGGTCCGGGGC-3’，下游引物序列為5’-CACTGGCGGAGTGAATGGC A-3’，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為142 bp；Smad3上游引物序列為5’-GGACGCCTGGGCAAGTTCTC-3’，下游引物序列為5’-ATGGACGACATGGCTGGCAC-3’，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為145 bp；Smad7 上游引物序列為5’-CGCGACGAAGAGAGTCTCGG-3’，下游引物序列為GCTGGGGCTGCTCGCATAAG-3’，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為102 bp；TGF-β1 上游引物序列為5’-CGTGCTAATGGTGGACCGCA-3’，下游引物序列為5’-GCAATGGGGGTTCTGGCACT-3’，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為119 bp。

俗話說(shuō)：“愛(ài)子愛(ài)在心里。”然而，他愛(ài)子是愛(ài)在臉上的。有一次，我應(yīng)邀在其老家作客，吃飯時(shí)，大人還沒(méi)有動(dòng)筷子，他的大兒子卻大口大口地先吃起來(lái)，還說(shuō)：“這是我要吃的，你們不能吃！”一點(diǎn)規(guī)矩都沒(méi)有。然鄭君只是輕描淡寫地說(shuō)一句：“老大！客人在，你收斂些好嗎！”飯后，我和鄭君正在品茶談天，突然，有一孩子哭著來(lái)告狀，說(shuō)是他額頭上的烏青塊是鄭君的大兒子用磚頭砸的。鄭君連句安慰他的話都沒(méi)有，卻反問(wèn)那個(gè)孩子：“他為什么砸你，而不砸別人呢?”這無(wú)疑是在默認(rèn)、縱容其子的錯(cuò)誤行為。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，所選指標(biāo)均為計(jì)量資料，以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（± s）表示。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，組間比較采用單因素方差分析，若數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)性假設(shè)或方差不齊時(shí)，則選用秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠一般情況 正常組小鼠毛色光澤，活動(dòng)自然，飲食飲水量及尿量正常；模型組小鼠毛色晦暗，體質(zhì)量逐漸下降，出現(xiàn)明顯多飲、多食、多尿等表現(xiàn)，造模第6周末，模型組有1只小鼠血糖不達(dá)標(biāo)，予以剔除；丹參多酚酸鹽組第6周死亡1只；貝那普利組第7周死亡1只。

2.2 各組小鼠FBG、UTP、BUN、SCr 水平的比較 表1結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組小鼠的FBG、UTP 水平明顯升高（P ＜0.05），BUN 和SCr變化不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），提示DN小鼠腎功能受到了損傷；與模型組比較，丹參多酚酸鹽組和貝那普利組的UTP 水平顯著降低（P ＜0.05），F(xiàn)BG、BUN、SCr 水平無(wú)顯著變化（P ＞0.05），且2 個(gè)治療組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。表明丹參多酚酸鹽組小鼠的腎功能損傷可能得到了改善。

2.3 各組小鼠腎組織中SOD、MDA、GSH-Px水平的比較 表2結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組小鼠腎組織中MDA 含量顯著升高，SOD 和GSH-Px活性下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），提示DN 小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了氧化應(yīng)激反應(yīng)；與模型組比較，丹參多酚酸鹽組和貝那普利組小鼠腎組織中MDA含量不同程度地降低，SOD和GSH-Px活性升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），且2 個(gè)治療組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。表明丹參多酚酸鹽能夠有效抑制DN小鼠腎臟組織的氧化應(yīng)激反應(yīng)。

表1 各組小鼠FBG、UTP、BUN和SCr水平的比較Table 1 Comparison of the levels of FBG，UTP，BUN and SCr in various groups （±s）

表1 各組小鼠FBG、UTP、BUN和SCr水平的比較Table 1 Comparison of the levels of FBG，UTP，BUN and SCr in various groups （±s）

①P ＜0.05，與正常組比較；②P ＜0.05，與模型組比較

組別正常組模型組貝那普利組丹參多酚酸鹽組鼠數(shù)（只）15 14 14 14 FBG（mmol·L-1）5.32±0.53 27.03±2.67①27.09±3.11①27.12±3.22①UTP（mg·24h-1）2.34±0.15 7.54±0.48①5.37±0.22②4.16±0.18②BUN（mmol·mL-1）10.51±1.54 9.83±1.33 8.84±1.70 9.32±1.56 SCr（μmol·L-1）57.68±3.56 58.24±8.74 54.37±7.72 56.87±6.81

表2 各組小鼠腎組織中SOD、MDA、GSH-Px水平的比較Table 2 Comparison of the levels of SOD，MDA and GSH-Px in mouse renal tissue of various groups （±s）

表2 各組小鼠腎組織中SOD、MDA、GSH-Px水平的比較Table 2 Comparison of the levels of SOD，MDA and GSH-Px in mouse renal tissue of various groups （±s）

①P ＜0.05，與正常組比較；②P ＜0.05，與模型組比較

組別正常組模型組貝那普利組丹參多酚酸鹽組鼠數(shù)（只）15 14 14 14 SOD（kU·g-1）133.00±11.03 83.54±9.63①101.47±9.59②115.87±10.45②MDA（μmol·g-1）1.19±0.12 1.84±0.18①1.56±0.20②1.44±0.21②GSH-Px（kU·g-1）604.81±53.17 411.78±33.74①490.24±35.95②543.66±39.46②

2.4 各組小鼠腎組織病理變化的比較 圖1 中PASM 染色結(jié)果顯示：正常組小鼠腎內(nèi)結(jié)構(gòu)較清晰，形狀規(guī)則，基底膜未見(jiàn)增厚；模型組可見(jiàn)腎小球基底膜增厚，系膜區(qū)明顯增寬，細(xì)胞外基質(zhì)累積；與模型組比較，丹參多酚酸鹽組和貝那普利組小鼠腎組織的病理改變有所減輕。

Masson 染色結(jié)果顯示：正常組小鼠腎組織球管形體結(jié)構(gòu)清晰無(wú)明顯異常；與正常組比較，模型組腎小球基底膜顯著增厚，有較多的免疫復(fù)合物堆積，膠原纖維增多；丹參多酚酸鹽組和貝那普利組的病理改變較模型組減輕，2個(gè)治療組之間無(wú)明顯差異。

2.5 各組小鼠腎組織p-Smad2/3、Smad2/3、Smad7蛋白表達(dá)情況比較 圖2 結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組的p-Smad2/3 與Smad2/3 比值升高（P ＜0.05），Smad7 蛋白表達(dá)明顯減弱（P ＜0.05），表明DN 小鼠體內(nèi)TGF-β1/Smad 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被激活。與模型組比較，丹參多酚酸鹽組與貝那普利組的p-Smad2/3 與Smad2/3 比值下降（P ＜0.05），Smad7蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)（P ＜0.05）。表明丹參多酚酸鹽可抑制DN小鼠腎組織發(fā)生TGF-β1/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活化。

2.6 各組小鼠腎組織Smad2/3、Smad7、TGF-β1 mRNA表達(dá)水平的比較 表3結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組小鼠腎組織中Smad2/3、TGF-β1mRNA表達(dá)水平明顯升高，Smad7 mRNA表達(dá)水平明顯下降（均P ＜0.05）；與模型組比較，丹參多酚酸鹽組和貝那普利組均可下調(diào)小鼠腎組織中Smad2/3、TGF-β1 mRNA 表達(dá)水平，上調(diào)Smad7 mRNA 表達(dá)水平（均P ＜0.05），且2 個(gè)治療組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。表明丹參多酚酸鹽可抑制DN小鼠腎組織TGF-β1/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路Smad2/3、Smad7、TGF-β1 mRNA的表達(dá)。

圖1 各組小鼠腎組織病理形態(tài)的比較（PASM、Masson染色，×400）Figure 1 Comparison of the mouse renal pathological changes in various groups（by PASM and Masson staining，×400）

圖2 各組小鼠腎組織p-Smad2/3、Smad2/3、Smad7蛋白表達(dá)情況比較（±s）Figure 2 Comparison of the protein expression levels of p-Smad2/3，Smad2/3 and Smad7 in mouse renal tissue of various groups（±s）

表3 各組小鼠腎組織中Smad2/3、Smad7、TGF-β1 mRNA表達(dá)水平比較Table 3 Comparison of the mRNA levels of Smad2/3，Smad7and TGF-β1 in mouse renal tissue of various groups （±s）

表3 各組小鼠腎組織中Smad2/3、Smad7、TGF-β1 mRNA表達(dá)水平比較Table 3 Comparison of the mRNA levels of Smad2/3，Smad7and TGF-β1 in mouse renal tissue of various groups （±s）

①P ＜0.05，與正常組比較；②P ＜0.05，與模型組比較

組別正常組模型組貝那普利組丹參多酚酸鹽組鼠數(shù)（只）15 14 14 14 Smad2/3 1.00±0.00 2.67±0.38①1.76±0.26②1.44±0.22②Smad7 1.00±0.00 0.31±0.04①0.62±0.05②0.71±0.06②TGF-β1 1.00±0.00 4.33±0.64①2.47±0.35②2.12±0.26②

3 討論

糖尿病腎?。―N）是繼發(fā)于糖尿病的一種微血管并發(fā)癥，其主要臨床表現(xiàn)為蛋白尿、高血壓和腎功能逐漸下降。DN 是一種多因素進(jìn)展性疾病，其發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，主要涉及遺傳因素、腎臟血流動(dòng)力學(xué)異常、高血糖導(dǎo)致的糖代謝紊亂、氧化應(yīng)激、炎性反應(yīng)和細(xì)胞因子以及自噬等[12]。在臨床上，及時(shí)避免糖尿病發(fā)展成為DN，延緩腎衰竭，防止纖維化是我們亟需解決的問(wèn)題。

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）/Smad 信號(hào)在激活腎小管間質(zhì)中過(guò)量生成細(xì)胞外基質(zhì)的成肌纖維細(xì)胞中起重要作用[13]。研究表明，TGF-β1/Smad信號(hào)傳導(dǎo)可以誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，以及募集和誘使骨髓來(lái)源的纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化成肌纖維母細(xì)胞[14]。TGF-β1 是成纖維因子，可通過(guò)激活成纖維細(xì)胞并抑制基質(zhì)降解來(lái)促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)積累[15-16]，也是DN 發(fā)病機(jī)制的最后共同通路。有研究證實(shí)，在DN 患者中，血清及尿中TGF-β1水平均增高，因此，下調(diào)TGF-β1信號(hào)表達(dá)可能是抗腎纖維化治療的有希望的靶標(biāo)[17-19]。Smad蛋白是目前所知的TGF-β1受體唯一的胞內(nèi)激酶底物，介導(dǎo)了胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，參與信號(hào)通路傳導(dǎo)的有Smad2、Smad3、Smad4、Smad6、Smad7 等。在誘導(dǎo)的DN 小鼠腎臟病變過(guò)程中，Smad2 和Smad3、磷酸化的Smad2/3與Smad4結(jié)合并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中以調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄。TGF-β1 信號(hào)通路中的Smad7是主要的負(fù)性調(diào)節(jié)因子[20]，對(duì)糖尿病腎損傷具有保護(hù)作用，在一定程度上對(duì)TGF-β1/Smad 信號(hào)傳導(dǎo)通路具有負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用，其抑制TGF-β1/Smad信號(hào)通路已得到公認(rèn)[21-25]。另外，糖尿病長(zhǎng)期的高血糖狀態(tài)可破壞活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）產(chǎn)生與清除之間的動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激的發(fā)生，而氧化應(yīng)激是DN中一個(gè)重要的發(fā)病環(huán)節(jié)[26-27]。有研究[28]證明，ROS 可以激活TGF-β1，糖尿病ROS 水平增高的同時(shí)伴隨著TGF-β1 水平的明顯增高。本研究結(jié)果顯示，DN模型小鼠腎組織SOD、GSH-Px活性，Smad7 mRNA和蛋白表達(dá)水平均較正常組降低，MDA 含量、Smad2/3 的活化水平、TGF-β1 mRNA 表達(dá)水平均較正常組升高。表明DN小鼠體內(nèi)發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)及TGF-β1/Smad信號(hào)通路的活化。

中醫(yī)學(xué)并沒(méi)有“糖尿病”“糖尿病腎病”病名。根據(jù)糖尿病的臨床表現(xiàn)，中醫(yī)學(xué)將其歸屬“消渴”范疇，其病機(jī)關(guān)鍵在于陰虛內(nèi)熱，而多數(shù)醫(yī)家認(rèn)為本病在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，形成了本虛標(biāo)實(shí)的病理特征。根據(jù)DN的臨床表現(xiàn)，可歸為“水腫”“關(guān)格”“癃閉”“溺毒”等范疇。現(xiàn)代醫(yī)家認(rèn)為DN腎纖維化多是腎絡(luò)瘀阻的結(jié)果，當(dāng)外感濁毒之邪，與內(nèi)生之邪相合，伏于腎絡(luò)，阻遏氣機(jī)，血行凝滯，瘀血內(nèi)生，痹阻腎絡(luò)，致腎絡(luò)瘀阻。濕濁瘀血等病理產(chǎn)物堆積，表現(xiàn)為膠原基質(zhì)沉積增多；痰濕、濁毒、瘀血等一些病理產(chǎn)物損害了腎臟的正常組織結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為細(xì)胞的損傷、凋亡，以及數(shù)量的減少；疾病進(jìn)一步發(fā)展則癥瘕形成，可表現(xiàn)為腎小球硬化或腎間質(zhì)纖維化。

丹參，為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.干燥根及根莖。其味苦，性微寒，入心、肝經(jīng)，具有活血祛瘀、安神寧心的功效，常用于治療冠心病心絞痛、癥瘕積聚、心悸、失眠等病癥。丹參多酚酸鹽是從丹參中提取的有效成分，其主要的活性物質(zhì)為丹參乙酸鎂。為觀察糖尿病腎結(jié)構(gòu)和功能變化及丹參多酚酸鹽的干預(yù)作用，本研究構(gòu)建了DN小鼠模型，結(jié)果顯示：模型組小鼠腎臟功能指標(biāo)UTP、SCr、BUN 水平升高，腎臟組織可見(jiàn)腎小球基底膜增厚，系膜區(qū)明顯增寬，細(xì)胞外基質(zhì)累積等病理改變，說(shuō)明DN小鼠出現(xiàn)不同程度的腎結(jié)構(gòu)和功能損害。經(jīng)丹參多酚酸鹽干預(yù)后，DN小鼠腎臟功能指標(biāo)有所降低，受損的腎組織得到明顯改善。表明丹參多酚酸鹽可以有效改善DN 小鼠腎臟病理?yè)p傷，從而調(diào)節(jié)DN 小鼠的腎臟功能。另外，本研究結(jié)果還顯示，丹參多酚酸鹽可以增加DN 小鼠腎組織抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性，降低組織和細(xì)胞中氧化產(chǎn)物MDA的蓄積，上調(diào)腎組織Smad7 的mRNA 蛋白的表達(dá)。表明丹參多酚酸鹽可改善DN小鼠體內(nèi)發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)及TGF-β1/Smad 信號(hào)通路的活化狀態(tài)，最終改善糖尿病小鼠的腎臟病理學(xué)改變和腎臟功能。

綜上所述，丹參多酚酸鹽可以改善DN小鼠腎功能損傷，其潛在機(jī)制可能與抑制TGF-β1/Smad信號(hào)傳導(dǎo)，減少下游轉(zhuǎn)錄蛋白膠原的生成，以及抗氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而減輕腎纖維化有關(guān)。本研究結(jié)果為丹參多酚酸鹽臨床治療DN提供了理論基礎(chǔ)。