MDSC、Th2、FoxP3+Treg及炎癥因子與HR-HPV感染宮頸病變的關(guān)系研究

梁秀蘭，謝夢(mèng)珍，邱紅兵，李 明

1.邢臺(tái)市人民醫(yī)院婦科，河北邢臺(tái) 054000；2.河北省內(nèi)丘縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北邢臺(tái) 100191

宮頸癌是臨床較為常見的女性生殖道腫瘤疾病之一，流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國(guó)的宮頸癌發(fā)病率為98.0/10萬(wàn)，死亡率高達(dá)30.5/10萬(wàn)[1-2]。研究認(rèn)為，宮頸癌的發(fā)病與人乳頭瘤病毒(HPV)顯著相關(guān)，在病毒對(duì)機(jī)體的不斷侵染階段，HPV病毒的感染可能會(huì)造成機(jī)體免疫微環(huán)境及炎性反應(yīng)的改變，間接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、進(jìn)展[3]。在病毒對(duì)機(jī)體侵染的早期，機(jī)體可通過與病毒的免疫抑制性作用消除病毒，少數(shù)患者由于病毒的持續(xù)性增殖，可能會(huì)造成宮頸上皮細(xì)胞的癌變[4]。叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子-3(Foxp3)主要在機(jī)體的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)中進(jìn)行增殖，對(duì)機(jī)體的免疫狀態(tài)至關(guān)重要[5]。輔助性T細(xì)胞2(Th2)在腫瘤細(xì)胞與機(jī)體免疫水平的分析中發(fā)揮重要作用[6]。髓系來(lái)源抑制性細(xì)胞(MDSC)對(duì)腫瘤細(xì)胞的逃逸具有重要意義[7]。炎癥因子水平的變化在疾病的進(jìn)展中也發(fā)揮重要作用。目前，對(duì)于Th2、MDSC、FoxP3+Treg細(xì)胞和炎癥因子在宮頸病變中的作用尚不明確，尤其是上述指標(biāo)在宮頸癌前病變到宮頸癌發(fā)病階段的變化亟待研究。本研究通過對(duì)MDSC、Th2和FoxP3+Treg細(xì)胞及炎癥因子與高危性HPV(HR-HPV)感染患者宮頸病變的關(guān)系分析，以期為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇邢臺(tái)市人民醫(yī)院2017年1月至2019年12月收治的180例宮頸病變患者作為研究對(duì)象，平均年齡(42.15±2.03)歲，平均病程為(3.26±1.36)年，平均體質(zhì)量指數(shù)(24.56±2.33)kg/m2，平均孕次(2.59±1.12)次，平均產(chǎn)次(1.27±0.60)次。其中宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級(jí)(CINⅠ組)患者39例，宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級(jí)(CINⅡ組)患者31例，宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級(jí)(CINⅢ組)患者35例，宮頸癌(UCC組)患者37例，宮頸炎(CC組)患者38例，5組患者的年齡、體質(zhì)量指數(shù)及病程之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。所有患者均簽署知情同意書，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)論證通過?；颊呒{入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均符合宮頸病變?cè)\斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；(2)所有患者均為HP-HPV感染患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)妊娠者；(2)嚴(yán)重感染患者；(3)內(nèi)分泌異?；颊?；(4)肝腎功能異?；颊?；(5)結(jié)締組織疾病患者。

1.2研究方法 所有患者入組后及時(shí)采肘靜脈血4 mL，采用流式細(xì)胞儀(FACS CANTO Ⅱ)對(duì)患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg細(xì)胞水平進(jìn)行檢測(cè)。將患者的血樣100 μL使用RPMI-1640培養(yǎng)液100 μL進(jìn)行稀釋，隨后將其加入96孔平板中，使用丙二醇甲醚醋酸酯工作液、離子霉素工作液、莫能霉素工作液進(jìn)行混合，輕輕混合后，在含有5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 h，棄去上清液，再次向上述液體中加入CD4-FITC 單克隆抗體10 μL。在避光狀態(tài)下保存15 min，使用磷酸鹽緩沖液(PBS)進(jìn)行清洗，使用破膜劑，避光狀態(tài)下保存15 min，再使用PBS進(jìn)行清洗。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)MDSC、Th2和FoxP3+Treg細(xì)胞水平。

表1 5組患者的基線資料比較

1.3觀察指標(biāo) (1)分別對(duì)CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、UCC組、CC組患者的Th2、MDSC、FoxP3+Treg細(xì)胞水平進(jìn)行比較。(2)分別對(duì)患者的白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、γ干擾素(INF-γ)水平進(jìn)行比較。炎癥因子水平檢測(cè)主要采取酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法，實(shí)驗(yàn)試劑來(lái)自羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司，實(shí)驗(yàn)操作流程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.15組患者M(jìn)DSC、Th2和FoxP3+Treg細(xì)胞水平比較 5組患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg細(xì)胞水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果顯示，患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg細(xì)胞水平從高到低依次為UCC組、CINⅢ組、CINⅡ組、CINⅠ組、CC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.25組患者的炎癥因子水平比較 5組患者的IL-2、IL-10、IL-17A、TNF-α水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，IL-4、IL-6、INF-γ水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果顯示，IL-10、IL-17A、TNF-α水平從高到低依次為UCC組、CINⅢ組、CINⅡ組、CINⅠ組、CC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；IL-2從高到低依次為CINⅠ組、CC組、CINⅡ組、UCC組、CINⅢ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表2 5組患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg細(xì)胞水平比較

表3 5組患者的炎癥因子水平比較

2.3MDSC、Th2和FoxP3+Treg細(xì)胞及炎癥因子對(duì)宮頸病變程度的影響因素分析 以病變程度為因變量，上述有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的免疫細(xì)胞水平和炎癥因子為自變量，Logistic回歸分析結(jié)果顯示，Th2細(xì)胞、MDSC細(xì)胞、FoxP3+Treg細(xì)胞、IL-10、IL-17A、TNF-α、IL-2是影響宮頸惡性病變程度的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表4。

表4 Th2、MDSC、FoxP3+Treg細(xì)胞水平及炎癥因子對(duì)病程的影響分析

3 討 論

隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的不斷發(fā)展，人們生活習(xí)慣及飲食習(xí)慣不斷發(fā)生變化[9]，宮頸癌的發(fā)生率呈逐年上升的趨勢(shì)。流行病學(xué)調(diào)查顯示，宮頸癌有年輕化的趨勢(shì)[10]。有研究報(bào)道顯示，HPV感染在已婚婦女中較為常見，同時(shí)HR-HPV感染已經(jīng)成為宮頸癌患者發(fā)病的重要誘因。在對(duì)機(jī)體的感染過程中，90%的HPV病毒可被正常的免疫系統(tǒng)清除，但是該病毒也存在一定的免疫逃避機(jī)制[11]。

在病毒感染機(jī)體的早期，F(xiàn)oxP3+Treg細(xì)胞在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)及免疫逃避機(jī)制中發(fā)揮重要作用。研究顯示，F(xiàn)oxP3+Treg細(xì)胞所產(chǎn)生的FoxP3蛋白廣泛存在于生物中，在FoxP3+Treg細(xì)胞的新陳代謝過程中發(fā)揮重要作用，也是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的重要標(biāo)志物[12]。以往的研究顯示,在乳腺癌、膀胱癌、肝癌、肺癌患者的研究中，F(xiàn)oxP3蛋白水平呈明顯上升趨勢(shì)，機(jī)體FoxP3+Treg細(xì)胞可作為患者重要的預(yù)后監(jiān)測(cè)指標(biāo)之一，F(xiàn)oxP3+Treg細(xì)胞明顯升高，提示病毒對(duì)于機(jī)體免疫系統(tǒng)的逃逸風(fēng)險(xiǎn)顯著升高，對(duì)腫瘤的進(jìn)展具有積極意義。本研究對(duì)不同病變程度的宮頸病變患者的研究結(jié)果顯示，隨著患者宮頸惡性程度的不斷升高，其FoxP3+Treg細(xì)胞水平呈顯著上升趨勢(shì)。吳帆等[13]對(duì)FoxP3+Treg細(xì)胞水平與宮頸病變的相關(guān)性分析結(jié)果指出，F(xiàn)oxP3+Treg細(xì)胞水平與患者的病變程度呈正相關(guān)，與本研究結(jié)果一致。

在HPV對(duì)機(jī)體持續(xù)感染過程中，機(jī)體局部病灶部位出現(xiàn)顯著的炎性反應(yīng)，而在炎性反應(yīng)過程中，人體的免疫系統(tǒng)對(duì)于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有重要意義。已有研究報(bào)道顯示，Th細(xì)胞在機(jī)體的免疫功能中具有重要的調(diào)節(jié)作用，Th2細(xì)胞主要通過對(duì)IL-4、IL-10炎癥因子的調(diào)控作用促進(jìn)細(xì)胞的癌變[14]。同時(shí)，隨著Th2細(xì)胞水平的明顯升高，勢(shì)必會(huì)造成Th1細(xì)胞水平的顯著性下降，Th1/Th2失衡，Th1細(xì)胞對(duì)于抗腫瘤效應(yīng)介導(dǎo)作用顯著下降，進(jìn)一步促進(jìn)患者的腫瘤進(jìn)展。在本研究中，隨著患者的病灶部位惡性程度的不斷升高，Th2細(xì)胞呈明顯上升的趨勢(shì)。齊涵沁等[15]通過對(duì)宮頸癌病變程度與Th2細(xì)胞水平的分析顯示，隨著Th2細(xì)胞的上升，患者的宮頸惡變程度呈明顯上升趨勢(shì)。

MDSC是具有抑制性免疫作用的免疫細(xì)胞，在免疫逃逸、炎癥、感染中發(fā)揮重要作用。在惡變程度較高的腫瘤患者中，其細(xì)胞水平呈明顯上升趨勢(shì)，通過多種炎癥因子的相互作用，促進(jìn)機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的逃逸作用。余花艷等[16]通過對(duì)不同病變患者M(jìn)DSC細(xì)胞水平的分析顯示，患者的MDSC細(xì)胞與腫瘤病變程度明顯相關(guān)。

以往的研究顯示，IL-2主要通過對(duì)機(jī)體局部炎性反應(yīng)水平的升高，進(jìn)而影響病灶部位的腫瘤進(jìn)展[17]，與本文結(jié)果不一致，分析原因?yàn)楸狙芯繕颖玖枯^小，故與以往研究差異較大。

綜上所述，MDSC、Th2和FoxP3+Treg細(xì)胞均為HR-HPV感染患者宮頸病變的重要影響因素，通過MDSC、Th2和FoxP3+Treg細(xì)胞、炎癥因子的分析，可能實(shí)現(xiàn)對(duì)早期宮頸惡性病變的預(yù)測(cè)。