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    QuEChERS-高效液相色譜-串聯(lián)飛行時間高分辨質(zhì)譜法篩查測定飼料中35種有機(jī)磷類藥物

    2021-05-11 16:42張立田徐淑媛李藝王雪松董李學(xué)李愛軍王磊
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年8期
    關(guān)鍵詞:高效液相色譜飼料

    張立田 徐淑媛 李藝 王雪松 董李學(xué) 李愛軍 王磊

    摘要:[目的]利用高效液相色譜-高分辨四級桿飛行時間質(zhì)譜(HPLC-QTOF/MS)技術(shù),建立飼料中35種有機(jī)磷類藥物的快速篩查方法。[方法]飼料樣品經(jīng)乙腈-0.2%甲酸溶液提取,QuEChERS方法凈化,建立了35種分析物的數(shù)據(jù)庫。目標(biāo)藥物經(jīng)WatersACQUITYUPLCHSST3色譜柱(50mm×2.1mm,1.8μm)分離,在正離子模式下進(jìn)行數(shù)據(jù)采集,可在7min內(nèi)實(shí)現(xiàn)對35種殺蟲劑藥物的良好分離。[結(jié)果]在10、50、100μg/kg添加濃度下的回收率為80.87%~114.21%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.69%~11.65%(n=6),方法定量限(LOQ,S/N=10)為0.2~0.5μg/kg,在5~100μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好線性(R2≥0.9984)。結(jié)合精確質(zhì)量數(shù)、保留時間和同位素峰形匹配度對目標(biāo)化合物進(jìn)行快速篩查與確證。[結(jié)論]該方法快速簡便、準(zhǔn)確、靈敏度較高,適用于飼料中有機(jī)磷類藥物殘留的高通量篩查與定性鑒定。

    關(guān)鍵詞:QuEChERS;飼料;有機(jī)磷類藥物;高效液相色譜-串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜

    中圖分類號S816.17文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611(2021)08-0199-04

    doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2021.08.052

    開放科學(xué)(資源服務(wù))標(biāo)識碼(OSID):

    ScreeningandDeterminationof35OrganophosphorusDrugsinFeedbyQuEChERSMethodCombinedwithPerformanceLiquidChromatography-Time-of-FlightMassSpectrometry

    ZHANGLi-tian1,2,3,XUShu-yuan1,2,3,LIYi1,2,3etal

    (1.TangshanFoodandDrugComprehensiveTestingCenter,Tangshan,Hebei063000;2.HebeiAgriculturalProductsQualityandSafetyTestingInnovationCenter,Tangshan,Hebei063000;3.TangshanInstituteofIndustrialTechnologyforFunctionalAgriculturalProducts,Tangshan,Hebei063000)

    Abstract[Objective]Acomprehensiveanalyticalmethodwasestablishedforthesimultaneousdeterminationof32organophosphatesinfeedbyperformanceliquidchromatography-quadrupoletime-of-flightmassspectrometry(HPLC-QTOF/MS).[Method]Theanalytesinfeedsampleswereextractedwithacetonitrilecontaining0.2%formicacid.TheextractswerecleanedupthroughQuEChERSmethodandadatabasefor35targetanatyteswasestablished.ThetargetcompoundswereseparatedonanWatersACQUITYUPLCHSST3columnanddetectedbyMSinDualAJSESI+mode.The35pesticidescouldbeseparatedin7min.[Result]Therecoveriesof35pesticideswere85.98%-114.21%andRSDwas0.58%-11.65%attheconcentrationsof10,50and100μg/kg.Thequantitativelimitoftheexperimentalmethodwas0.2-0.5μg/kgandallthepesticidestobetestedwereinthecalibrationcurvesrangeof5-100μg/Lwithshowedagoodlinearity(R2≥0.9984).Theprecisionmass,retentiontimeandisotopicmatched-degreewereemployedforthescreeningandconfirmation.[Conclusion]Themethodisfast,simple,accurate,andhighlysensitive,andissuitableforhigh-throughputscreeningandqualitativeidentificationoforganophosphorusdrugresiduesinfeed.

    KeywordsQuEChERS;Feed;Organophosphatesdrugs;Performanceliquidchromatography-time-flight-massspectrometry(HPLC-QTOF/MS)

    有機(jī)磷農(nóng)藥具有高效、低毒和生物降解快的特點(diǎn),因而被廣泛用于糧食、棉花、蔬菜、果樹等作物的害蟲防治。但是殺蟲劑藥物在動物產(chǎn)品中的殘留不僅危害到消費(fèi)者的身體健康,對人體產(chǎn)生諸如具有致突變性和潛在的致癌性等毒副作用,引起細(xì)菌耐藥性的增加,而且同時影響我國畜禽產(chǎn)品的出口貿(mào)易[1-4]。為了保護(hù)人民的身體健康,從源頭進(jìn)行控制的有效手段,因此研究飼料中有機(jī)磷藥物的檢測方法具有重要的意義。

    針對飼料中有機(jī)磷類藥物的檢測手段比較單一,測定飼料中有機(jī)磷藥物殘留的HPLC法、GC-MS法、SDME-GC-MS法、LC-MS法、HPLC-MS/MS等分析方法已經(jīng)不適用實(shí)際樣

    品快速篩查的需要。高效液相色譜-高分辨四級桿飛行時間質(zhì)譜(HPLC-QTOF/MS)法具有更強(qiáng)的分離能力、樣品通量和靈敏度,可以提供母離子和碎片離子的精確質(zhì)量數(shù),準(zhǔn)確推算可能的分子式,從而進(jìn)一步對化合物的結(jié)構(gòu)和裂解規(guī)律加以確證[5-11]。該試驗利用HPLC-QTOF/MS技術(shù),建立了35種有機(jī)磷類藥物的飼料樣品前處理方法和質(zhì)譜特征數(shù)據(jù)庫,采用FullScan/MSE模式進(jìn)行掃描測定,不僅提高了有機(jī)磷類藥物殘留的快速篩查的可靠性,同時可以獲得較高靈敏度的定量結(jié)果,從而為飼料樣品的快速高通量篩查提供準(zhǔn)確、可靠的方法。

    1材料與方法

    1.1儀器與設(shè)備

    TripleTOF5600MS儀(配有電噴霧離子源),美國ABSCIEX公司;SiO-6512全自動前處理設(shè)備,本立科技公司;SZ13022-NY0.2μm有機(jī)濾膜,天津市領(lǐng)航實(shí)驗設(shè)備股份有限公司;T-200電子天平,常熟雙杰儀器制造廠;FY-DCY96S氮?dú)鉂饪s儀,上海安譜實(shí)驗科技股份有限公司;Milli-Q超純水儀,美國Millipore公司。

    1.2材料與試劑

    青貯玉米。甲酸(UV-HPLC級)、乙腈(UV-HPLC級)、甲酸銨,純度>99.0%,Dikma公司;無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸氫二鈉、檸檬酸鈉、N-丙基乙二胺(PSA)、氧化鋯珠(R104)和雙層提取凈化管(V50),均購于本立科技公司;去離子水(自制);敵敵畏、樂果、氧樂果、乙酰甲胺磷、毒死蜱、甲基毒死蜱、甲基嘧啶磷、除線磷、辛硫磷、三唑磷、二嗪磷、地蟲硫磷、殺螟松、丙溴磷、乙硫磷、蠅毒磷、甲胺磷、治螟磷、久效磷、對硫磷、殺撲磷、地胺磷、伏殺硫磷、磷銨、馬拉硫磷、水胺硫磷、喹硫磷、硫環(huán)磷、敵百蟲、甲基異柳磷、稻豐散、亞胺硫磷、滅線磷、甲基對硫磷、特丁硫磷,100μg/mL,純度995%,天津阿爾塔科技有限公司。

    1.3試驗方法

    1.3.1樣品前處理。

    準(zhǔn)確稱取2.0g飼料樣品于離心管外管中,加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,靜置30min,加入10mL乙腈和10mL水,加入萃取鹽包(內(nèi)含5.5g無水硫酸鎂、1.5g氯化鈉、0.5g檸檬酸氫二鈉、1.0g檸檬酸鈉)及10顆鋯珠,擰緊內(nèi)管(內(nèi)含4mm氧化鋯珠5粒、100mgPSA、600mg無水硫酸鎂、100mgC18)后放入自動QuEChERS前處理儀器中開始處理,經(jīng)25min交替振蕩離心后,從內(nèi)管中取凈化液過0.22μm的有機(jī)微孔濾膜,濾液供HPLC-QTOF/MS測定。

    1.3.2色譜-質(zhì)譜分析條件。

    1.3.2.1

    色譜條件。流動相A為0.1%(V/V)甲酸+2mmol/L甲酸銨的水溶液,B為0.1%甲酸+2mmol/L甲酸銨的甲醇溶液。梯度洗脫:0~0.5min,5%B;0.5~1.0min,30%B;1.0~10.0min,95%B;10.0~13.0min,5%B。進(jìn)樣量5μL;流速0.3mL/min;柱溫40℃;樣品溫度10℃;WatersACQUITYUPLCHSST3色譜柱(50mm×2.1mm,1.8μm)。

    1.3.2.2

    質(zhì)譜條件。正離子采集模式;離子源溫度500℃;電噴霧電壓5.5kV;氣簾氣壓力241.32kPa;掃描模式FullScan/MSE,采集范圍m/z80~1000,采集時間0.75s,采集間隔時間10s。

    1.4篩查數(shù)據(jù)庫的建立

    取合適濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液稀釋至1μg/mL,在優(yōu)化色譜-質(zhì)譜條件下,先進(jìn)行一級質(zhì)譜掃描,得到目標(biāo)化合物的保留時間、質(zhì)子化的分子質(zhì)量數(shù)、質(zhì)量誤差等信息。在不同的碰撞電壓下再進(jìn)行二級質(zhì)譜掃描,得到目標(biāo)化合物的二級全掃描圖及質(zhì)譜碎片信息,以此建立35種殺蟲劑類藥物的篩查譜庫。篩查譜庫中還包含藥物的英文名稱、分子式、結(jié)構(gòu)式、理論分子量、保留時間以及同位素峰型匹配度等信息。根據(jù)譜庫信息可對樣品中目標(biāo)化合物進(jìn)行篩查確證。

    2結(jié)果與分析

    2.1色譜-質(zhì)譜條件優(yōu)化

    2.1.1色譜條件。

    試驗選用WatersACQUITYUPLCHSST3色譜柱分析,考察了0.1%甲酸-甲醇、0.1%甲酸-乙腈、2mmol/L甲酸銨-乙腈、2mmol/L甲酸銨-甲醇和0.1%甲酸+2mmol/L甲酸銨-甲醇5種流動相對殺蟲劑類的分離、離子化效應(yīng)和峰形的影響。甲酸銨體系可以獲得較低的背景值,但殺蟲劑類藥物響應(yīng)較低,影響檢測靈敏度。采用甲酸體系時,背景值有所升高,但35種目標(biāo)藥物的響應(yīng)有所增強(qiáng)。與乙腈相比,甲醇作為流動相可以獲得更好的分離度。綜合分析,試驗采用0.1%甲酸+2mmol/L甲酸銨-甲醇作為流動相進(jìn)行梯度洗脫,7min內(nèi)實(shí)現(xiàn)35種目標(biāo)分析物的基線分離。目標(biāo)分析物在溶劑中的總離子流色譜圖如圖1所示。

    2.1.2質(zhì)譜條件。

    有機(jī)磷類藥物均含有易于和H+結(jié)合的帶有孤對電子的O原子,適合在ESI源的正離子模式下離子化,其準(zhǔn)分子離子為[M+H]+??疾炝穗妵婌F電壓、氣簾氣壓力、碰撞能和離子源溫度等因素的影響。離子源溫度500℃、電噴霧電壓5.5kV和氣簾氣壓力241.32kPa時,目標(biāo)化合物的響應(yīng)較強(qiáng)。高分辨Q-TOF質(zhì)譜在FullScan/MSE模式下能同時完成在低能通道以母離子為定量離子,又能實(shí)現(xiàn)在高能通道全范圍二級質(zhì)譜的掃描,有助于樣品的快速篩查和定量分析。

    2.2線性關(guān)系、精密度和回收率

    以空白飼料樣品制備濃度為5、10、20、40、80、100μg/L的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品,在優(yōu)化的色譜和質(zhì)譜條件下進(jìn)行測定,以各組分的峰面積對其質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算線性方程、線性范圍和決定系數(shù)(R2),以10倍信噪比(S/N=10)估算定量限(LOQ),具體結(jié)果如表1所示。從表1可以看出,35種有機(jī)磷類藥物的LOQ為0.2~0.5μg/kg,在5~100μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2≥0.9984)。

    利用空白飼料樣品進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗,分別對低(10μg/kg)、中(50μg/kg)、高(100μg/kg)3個添加水平按照“1.3.1”方法處理,每個濃度水平做6份平行樣品,結(jié)果見表2。由表2可知,低加標(biāo)水平下,殺蟲劑類藥物的平均回收率>80%,RSD<12%;中、高加標(biāo)水平下,有機(jī)磷類藥物的平均回收率>86%,RSD<9%。表明有機(jī)磷類藥物在低濃度水平受基質(zhì)干擾較大;在中、高濃度水平重現(xiàn)性較好,方法準(zhǔn)確可靠。

    2.3數(shù)據(jù)庫的建立與篩查

    在最佳的色譜-質(zhì)譜條件下,對每一種目標(biāo)化合物的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行FullScan/MSE掃描,基于HPLC-QTOF/MS的高通量篩查研究,采用MasslynxChromlynx軟件建立了有機(jī)磷類藥物的高通量篩查數(shù)據(jù)庫,其包括目標(biāo)化合物的分子式、精確分子量、保留時間和同位素峰形匹配度等信息(表3),通過比對以上信息,所有35種目標(biāo)化合物的保留時間偏差均<±0.01min,質(zhì)量偏差均<±4mDa,同位素峰形匹配度>90%。

    2.4實(shí)際樣品檢測

    應(yīng)用該研究建立的HPLC-QTOF/MS的高通量篩查方法,隨機(jī)抽取20份飼料樣品進(jìn)行檢測,采集一級質(zhì)譜數(shù)據(jù)、保留時間和二級碎片信息對樣品中35種有機(jī)磷類藥物定性篩查同時定量,均未檢出陽性樣品。

    3結(jié)論

    該研究建立了HPLC-QTOF/MS測定飼料中35種有機(jī)磷類藥物的檢測方法和目標(biāo)化合物的數(shù)據(jù)庫,并進(jìn)行了方法學(xué)驗證。在10、50、100μg/kg添加濃度下的回收率為8087%~114.21%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.69%~11.65%(n=6),方法定量限(LOQ,S/N=10)為0.2~0.5μg/kg,在5~100μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好線性(R2≥0.9984)。該方法具有簡便高效快速、選擇性好、靈敏準(zhǔn)確等特點(diǎn),滿足測定大量飼料樣品中有機(jī)磷類藥物的快速、定量的需求,適用于飼料中有機(jī)磷類藥物的同時定性篩查和定量分析。

    參考文獻(xiàn)

    [1]韓俊艷,張立竹,紀(jì)明山.植物源殺蟲劑的研究進(jìn)展[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2011,27(21):229-233.

    [2]林璐璐,鐘永志,張光玲,等.6種藥劑對安徽省草地貪夜蛾的防治效果[J].農(nóng)藥,2020,59(7):528-531,546.

    [3]宋潔蕾,李艷麗,李亞紅,等.不同殺蟲劑對草地貪夜蛾的室內(nèi)毒殺效果及毒力測定[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報,2019,50(7):1489-1495.

    [4]邵仁志,劉小安,孫蘭,等.中國植物源農(nóng)藥的研究進(jìn)展[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,56(8):1401-1405.

    [5]姚鳳花,馮永巍.高效液相色譜串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜法快速檢測飼料中多種β-受體激動劑[J].糧食與飼料工業(yè),2013(1):62-64.

    [6]貢松松,顧欣,曹慧,等.超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜法快速篩查生鮮牛乳中的14種磺胺類藥物[J].分析測試學(xué)報,2014,33(12):1342-1348.

    [7]孟哲,石志紅,呂運(yùn)開,等.超高效液相色譜-高分辨四級桿飛行時間質(zhì)譜法快速篩查乳制品中磺胺類與氟喹諾酮類藥物[J].分析化學(xué),2014,42(10):1493-1500.

    [8]HERNNDEZF,PORTOLST,IBEZM,etal.Useoftime-of-flightmassspectrometryforlargescreeningoforganicpollutantsinsurfacewatersandsoilsfromariceproductionareainColombia[J].Scienceofthetotalenvironment,2012,439:249-259.

    [9]孫雷,畢言鋒,張驪,等.飛行時間質(zhì)譜分析技術(shù)及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國獸藥雜志,2009,43(7):37-40.

    [10]吳煒亮,李曉明,朱文亮,等.飛行時間質(zhì)譜技術(shù)及其在食品安全檢測中的應(yīng)用[J].食品與機(jī)械,2015,31(3):236-241.

    [11]孫秉康,李曉毓,寧雪雪,等.四極桿-飛行時間質(zhì)譜技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,45(9):76-77.

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