湖北地區(qū)豬細(xì)小病毒流行病學(xué)調(diào)查

趙潤(rùn)澤 同珂 李文靜 李桐 陳少賢 陳騰 王鈺 譚旭 王妍 張子微 劉國(guó)平

摘要 [目的]探究豬細(xì)小病毒在湖北省的流行情況。[方法]2018—2019年，從湖北省荊州、隨州、黃岡、恩施、咸寧5個(gè)地區(qū)的規(guī)?；i場(chǎng)收集出現(xiàn)繁殖障礙癥狀和有繁殖障礙史豬群的病料共1 407 份，采用巢式PCR法和PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，并分析PPV陽(yáng)性率與不同地區(qū)、年齡段及季節(jié)之間的感染差異，最后對(duì)PPV陽(yáng)性樣品進(jìn)行豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）及豬繁殖與呼吸綜合癥病毒（PRRSV）3種豬繁殖障礙性疾病的檢測(cè)。[結(jié)果]1 407份樣品中，巢式PCR法檢出率為16.70%（235/1 407），PCR檢測(cè)試劑盒的檢出率為16.35%（230/1 407），2種檢測(cè)方法的符合率為97.87%（230/235）。湖北各地區(qū)均有不同程度的感染，其中恩施地區(qū)的陽(yáng)性率最高，為30.48%（57/187）;其次為咸寧、黃岡、荊州地區(qū)，陽(yáng)性率分別為20.60%（62/301）、17.41%（47/270）、14.04%（33/235）;隨州地區(qū)陽(yáng)性率最低，為8.70%（36/414）。對(duì)不同年齡段豬群的檢測(cè)結(jié)果表明，育肥豬的陽(yáng)性率最高，為30.95%（65/210）;其次為后備豬和初產(chǎn)母豬，陽(yáng)性率分別為17.97%（78/434）、15.71%（55/350）;經(jīng)產(chǎn)母豬、0～30日齡仔豬的陽(yáng)性率分別為9.05%（21/232）、8.84%（16/181）。PPV一年四季均流行，但春季（23.14%，121/523）和秋季（17.39%，68/391）是PPV感染的高峰期，而夏季（11.04%，33/299）和冬季（6.70%，13/194）感染率較低。PPV與其他繁殖障礙性疾病二重感染（42.13%，99/235）和三重感染（11.49%，27/235）較為常見(jiàn)，其中與PRRSV二重感染（21.70%，51/235）最為嚴(yán)重，三重感染以PPV+PRRSV+PCV2（5.53%，13/235）較多，四重感染在此次采集的樣品中未檢測(cè)到。[結(jié)論]該研究對(duì)湖北省PPV的流行情況及特點(diǎn)進(jìn)行了調(diào)查，為PPV的防控提供了參考數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞 豬細(xì)小病毒;流行病學(xué);混合感染

中圖分類(lèi)號(hào) S 851.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2021）08-0083-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.08.022

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Epidemiological Investigation on PPV Infection in Swine in Hubei

ZHAO Run-ze，TONG Ke，LI Wen-jing et al （College of Animal Science，Yangtze University，Jingzhou，Hubei 434025）

Abstract [Objective]To study the prevalence of PPV in Hubei Province.[Method]From 2018 to 2019，1 407 samples of pig herd with the symptom and history of infertility were collected from three large-scale swine farms in 5 regions （Jingzhou，Suizhou，Huanggang，Enshi，Xianning） of Hubei Province and detected by the nested PCR method and PCR test kit.PPV positive rate and its difference in different regions，ages and seasons were analyzed.Finally，PPV positive samples were detected by the kits of three porcine reproductive disorders（PRV，PCV2，PRRSV）.[Result]In 1 407 samples，the positive rate of nested PCR was 16.7%（235/1 407），the positive rate of PCR test kit was 16.35%（230/1 407），the coincidence rate of two methods was 97.87%（230/235）.Different degrees of infection with PPV occurred in different regions of Hubei Province，the positive rate in Ensi region was the highest（30.48%，57/187），followed by Xianning region，Huanggang region，and Jingzhou region，the positive rates were 20.60% （62/301），17.41% （47/270），14.04% （33/235），respectively.The positive rate in Suizhou region was the lowest（8.70%，36/414）.The detection results of swine in different age groups showed that the positive rate of fattening pigs was 30.95%（65/210），followed by reserve pigs and primiparous sows，the positive rates were 17.97% （78/434） and 15.71% （55/350） respectively.The positive rates of postpartum sows and 0-30 day-old piglets were 9.05%（21/232） and 8.84%（16/181）respectively.PPV had strong prevalence all around year：spring（23.14%，121/523）and autumn（17.39%，68/391）were in peak of infection，but summer（11.04%，33/299） and winter （6.7%，13/194）were in low infection rate.PPV had double infection（42.13%，99/235）and triple infection（11.49%，27/235）with other porcine reproductive disorders，the double infection （21.70%，51/235） with PRRSV was the most serious.The triple infection（5.53%，13/235）with PRRSV and PCV2 was also serious.The quadruplexinfection was not detected in these samples.[Conclusion]This study investigated and analyzed the prevalence state and characteristics of PPV in Hubei Province，which provided references for the prevention of PPV.

Key words Porcine parvovirus;Epidemiology;Mixed infection

豬細(xì)小病毒（porcine parvovirus，PPV）是豬細(xì)小病毒科的ssDNA病毒，PPV感染主要引起初產(chǎn)母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬出現(xiàn)不孕、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎和重復(fù)返情等繁殖障礙[1]，繁殖障礙的嚴(yán)重程度取決于毒株的致病性和母豬所處的妊娠期。在母豬妊娠30 d內(nèi)感染，主要導(dǎo)致胚胎死亡或被母體重吸收;妊娠30～70 d，主要表現(xiàn)為流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎;妊娠70 d后感染，一般不引起病害，母豬多能正常產(chǎn)仔，但這些仔豬常常帶有抗體并長(zhǎng)期帶毒。PPV毒株大致分為4種類(lèi)型：①以NADL-2為代表的弱毒株，感染妊娠母豬后無(wú)法經(jīng)胎盤(pán)感染胎兒，被用作弱毒疫苗株;②以NADL-8為代表的強(qiáng)毒株，感染血清陰性母豬后，引起病毒血癥，并跨越胎盤(pán)屏障感染胎兒并致死;③以Kresse株為代表的皮炎型強(qiáng)毒株;④腸炎型毒株，主要引起腸道病變[2]。近年來(lái)，隨著規(guī)模化養(yǎng)豬業(yè)的迅速發(fā)展，PPV感染日益嚴(yán)重，不同年齡、品系、性別的家豬和野豬均可感染。病豬和帶毒豬是主要傳染源，通過(guò)口、鼻分泌物和排泄物向外排毒。PPV在全球范圍內(nèi)普遍流行，瑞典、克羅地亞等歐洲國(guó)家在家豬、野豬均檢出PPV[3-4];泰國(guó)、韓國(guó)等亞洲國(guó)家也相繼報(bào)道了PPV的感染情況[5-6];我國(guó)河南、四川、貴州等地區(qū)PPV均出現(xiàn)不同程度的感染[7-8]。感染PPV的母豬無(wú)明顯的臨床癥狀，且疫苗免疫后也無(wú)法阻止病豬排毒，豬細(xì)小病毒的廣泛傳播及隱性感染[9]，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的危害。為深入了解湖北地區(qū)PPV的流行特點(diǎn)，筆者于2018—2019年從湖北省5個(gè)地級(jí)市的規(guī)?；i場(chǎng)收集出現(xiàn)繁殖障礙癥狀和有繁殖障礙史豬群的病料共1 407 份，采用筆者所在課題組建立的巢式PCR法對(duì)PPV進(jìn)行調(diào)查，并分析不同地區(qū)、年齡段、季節(jié)及與其他繁殖障礙性疾病混合感染的情況，以期為PPV的防控提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 2018—2019年，1 407 份被動(dòng)送檢樣品，采自湖北省荊州、隨州、黃岡、恩施、咸寧5個(gè)地區(qū)的規(guī)模化豬場(chǎng)，臨床上出現(xiàn)繁殖障礙癥狀的母豬及其所產(chǎn)仔豬和有繁殖障礙史豬群。其中，荊州235份、隨州414份、黃岡270份、恩施187份、咸寧301份，樣品置于冰上保存運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，并于24 h內(nèi)完成后續(xù)檢測(cè)。

1.2 樣品預(yù)處理及病毒DNA提取 樣品預(yù)處理參照文獻(xiàn)[10]方法，具體步驟如下：取1 mL豬全血置于1.5 mL EP管中，1 500 r/min 離心30 min，取上清，預(yù)處理樣品用于后續(xù)病毒DNA提取。樣品病毒DNA提取采用Axygen體液提取試劑盒，具體步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用Nanodrop1 000檢測(cè)所提取DNA的濃度和純度，將DNA于-20 ℃下條件保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 病原學(xué)檢測(cè) 采用巢式PCR法對(duì)樣品進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)。引物序列如表1所示。同時(shí)，采用豬細(xì)小病毒PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行復(fù)檢，具體步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 對(duì)不同地區(qū)、年齡段、不同季節(jié)及混合感染的檢測(cè)結(jié)果，采用SPSS 24.0軟件中的卡方檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析，P>0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著。通過(guò)Origin 2019軟件對(duì)檢測(cè)樣品的PPV感染率進(jìn)行處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同地區(qū)PPV的檢測(cè)結(jié)果 不同地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)PPV的檢測(cè)結(jié)果（表2）顯示，PPV陽(yáng)性樣品數(shù)為235份，平均陽(yáng)性率為16.70%（235/1 407）。其中恩施地區(qū)PPV陽(yáng)性率最高，為30.48%（57/187）;其次為咸寧、黃岡、荊州地區(qū)，陽(yáng)性率分別為20.60%（62/301）、17.41%（47/270）和14.04%（33/235）;隨州地區(qū)最低，為8.70%（36/414），不同地區(qū)間PPV陽(yáng)性率差異顯著（P<0.05）。結(jié)果表明，荊州、隨州、黃岡、咸寧、恩施5個(gè)地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)均有不同程度感染，而恩施地區(qū)的感染尤為嚴(yán)重。

2.2 不同年齡段豬群PPV的檢測(cè)結(jié)果 對(duì)不同年齡段豬群PPV的感染情況進(jìn)行分析，其中育肥豬的陽(yáng)性率最高，為30.95%（65/210），其次是后備豬和初產(chǎn)母豬，陽(yáng)性率分別為17.97%（78/434）和15.71%（55/350），而經(jīng)產(chǎn)母豬、0～30日齡仔豬的陽(yáng)性率較低，分別為9.05%（21/232）和8.84%（16/181），不同年齡段豬群間PPV陽(yáng)性率差異顯著（P<0.05，表3）。這表明不同年齡段豬群的感染程度相差較大，育肥豬是PPV感染的重災(zāi)區(qū)。

2.3 不同季節(jié)PPV的檢測(cè)結(jié)果 對(duì)不同季節(jié)豬PPV感染情況進(jìn)行分析，其中春季的陽(yáng)性率最高，為23.14%（121/523）;其次是秋季和夏季，陽(yáng)性率分別為17.39%（68/391）和11.04%（33/299）;冬季PPV的陽(yáng)性率最低，為6.70%（13/194）。不同季節(jié)PPV陽(yáng)性率差異顯著（P<0.05，表4）。這表明PPV一年四季均流行，但春季和秋季是PPV感染的高峰期，而春季感染更為嚴(yán)重。

2.4 混合感染情況 為了解PPV與其他繁殖障礙性疾病混合感染的情況，將PPV檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性的235份樣品進(jìn)行PRV、PRRSV、PCV2檢測(cè)。結(jié)果顯示，PPV與其他繁殖障礙性疾病二重感染（42.13%，99/235）最為常見(jiàn)，其中PPV+PRRSV二重感染率最高，為21.70%（51/235）;其次是PPV+PRV、PPV+PCV2，二重感染率分別為11.49%（27/235）、8.94%（21/235）;三重感染率較低，為11.49%（27/235），PPV+PRV+PCV2、PPV+PRRSV+PRV、PPV+PRRSV+PCV2分別為1.70%（4/235）、4.26%（10/235）、5.53%（13/235）;四重感染情況在此次收集的樣品中并未發(fā)現(xiàn)（表5）。分析發(fā)現(xiàn)，二重感染率顯著高于三重感染率（P<0.05）。

3 討論

該研究對(duì)2018—2019年湖北地區(qū)PPV的流行情況進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果顯示PPV平均陽(yáng)性率為16.70%（235/1 407），其中荊州、隨州、黃岡、恩施、咸寧地區(qū)的陽(yáng)性率分別為14.04%（33/235）、8.70%（36/414）、17.41%（47/270）、30.48%（57/187）和20.60%（62/301），結(jié)果表明湖北地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)均有不同程度感染，其中恩施地區(qū)的感染尤為嚴(yán)重。出現(xiàn)這種差異，通常是由于豬場(chǎng)的飼養(yǎng)密度、免疫程序及管理水平的差異所致[15]，也可能受地理位置和自然條件等因素的影響。恩施地區(qū)相鄰省市均為養(yǎng)豬大省，頻繁的豬只調(diào)運(yùn)成為PPV傳播的重要途徑。此外，恩施位于鄂南地區(qū)，該地區(qū)山林豐富，雨水充足，且散養(yǎng)戶較多，對(duì)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)建立優(yōu)良的生物安全體系形成阻礙。劉明莉等[16]于2014年1—6月在河南省駐馬店市進(jìn)行PPV調(diào)查（PPV陽(yáng)性率為25.00%）;譚小兵等[17]于2015—2016年從四川遂寧市規(guī)?；i場(chǎng)采集649份樣品，進(jìn)行PPV流行情況監(jiān)測(cè)與分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PPV陽(yáng)性率為28.04%;楊先富等[18]于2017年對(duì)貴州省劍河縣3個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行PPV流行情況調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3個(gè)豬場(chǎng)PPV的陽(yáng)性率分別為35.09%、42.06%和46.18%。研究表明，PPV在我國(guó)分布廣泛且造成嚴(yán)重?fù)p失，而湖北地區(qū)PPV陽(yáng)性率相對(duì)較低，考慮到2018年非洲豬瘟在國(guó)內(nèi)蔓延，規(guī)?；B(yǎng)豬業(yè)配備比以往更優(yōu)良的管理水平及生物安全體系，大大降低了PPV的傳播。

不同年齡段豬群PPV的調(diào)查結(jié)果顯示，不同年齡段豬群的感染程度相差較大，其中育肥豬的陽(yáng)性率最高，其次是后備豬、初產(chǎn)母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬，0～30日齡仔豬最低。新生仔豬通過(guò)攝取初乳中的母源抗體，獲得對(duì) PPV 的被動(dòng)保護(hù)[19];后備豬和育肥豬的飼養(yǎng)密度較其他年齡段豬群更為密集，飼養(yǎng)環(huán)境和管理水平也相對(duì)較低。即使接受疫苗免疫的病豬，也無(wú)法阻止其通過(guò)口-鼻、排泄物向外排毒[20]，污染環(huán)境、飼料及飲水等，造成大規(guī)模的感染，這也可能是后備豬和育肥豬未按照母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行合理免疫，母源抗體水平降至臨界點(diǎn)后免疫不及時(shí)所致[19]。

PPV在湖北地區(qū)一年四季均可流行，但春季和秋季是PPV感染的高峰期，而春季感染更為嚴(yán)重。究其原因，湖北地處亞熱帶，降水充沛，雨熱同季，春季氣溫多變，秋季氣溫下降迅速，且春、秋季的降水量顯著高于夏、冬季，溫度和濕度更適宜PPV在豬舍內(nèi)存活和傳播[21]。此外，豬的汗腺不發(fā)達(dá)，散熱困難，母豬的最佳繁殖環(huán)境溫度為20～23 ℃，當(dāng)環(huán)境溫度過(guò)高時(shí)，機(jī)體不能完成正常的生理調(diào)節(jié)而出現(xiàn)熱應(yīng)激，產(chǎn)生一系列的生理、病理變化，不利于卵泡發(fā)育和成熟，同時(shí)炎熱的子宮環(huán)境也不利于受精卵的附植和發(fā)育[22]。因此，規(guī)模化豬場(chǎng)往往在春、秋季進(jìn)行集中配種，這也增加了PPV的傳播風(fēng)險(xiǎn)，需要加強(qiáng)春、秋季豬群的綜合防疫工作。

該研究中PPV與其他繁殖障礙性疾病混合感染的檢測(cè)結(jié)果顯示，二重感染（42.12%）和三重感染（11.49%）較為常見(jiàn)，與PRRSV二重感染（21.70%）最為嚴(yán)重，三重感染以PPV+PRRSV+PCV2（5.53%）較多，四重感染在此次采集的樣品中未檢測(cè)到，與呂其壯等[23]的研究結(jié)果相一致。由于PPV與其他繁殖障礙性疾病具有協(xié)同作用，多種病原混合感染已成為常態(tài)，未來(lái)對(duì)豬繁殖障礙性疾病也應(yīng)從多病原混合感染的維度進(jìn)行防控。

為做好PPV防控工作，可從以下方面著手：①建議每隔4～6月對(duì)所有妊娠母豬重新接種疫苗，雖然疫苗可以保護(hù)豬群免受豬細(xì)小病毒病的侵害，但無(wú)法阻止病豬排毒;②多種病原混合感染已成為常態(tài)，今后豬病的防控與凈化也應(yīng)以多病原治理為思路;③優(yōu)良的免疫程序要搭配科學(xué)的管理制度，現(xiàn)代化養(yǎng)殖業(yè)要以疫病凈化為手段，以建立生物安全體系為核心。

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