UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)在尿液紅細(xì)胞檢測(cè)中的應(yīng)用分析

紀(jì)鳳卿

廈門(mén)市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建廈門(mén) 361009

UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)包括UC3500尿干化學(xué)分析儀和UF5000尿沉渣分析儀兩臺(tái)檢測(cè)儀器。經(jīng)過(guò)優(yōu)化后系統(tǒng)在檢測(cè)尿液紅細(xì)胞方面的鏡檢符合率、假陽(yáng)性率、假陰性率等方面國(guó)外有見(jiàn)報(bào)道[1]，但在國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道，故本研究將作簡(jiǎn)單報(bào)道。本研究隨機(jī)選取廈門(mén)市中醫(yī)院2020年5—6月537份尿液標(biāo)本同時(shí)采用UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)、普通光學(xué)顯微鏡法、相差顯微鏡法進(jìn)行尿液紅細(xì)胞分析，統(tǒng)計(jì)前二者鏡檢符合率、假陽(yáng)性率、假陰性率，將流水線法與相差顯微鏡法這兩種檢測(cè)方法的尿液紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類信息進(jìn)行一致性分析，并分析原因。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取廈門(mén)市中醫(yī)院2020年5—6月門(mén)診及住院患者的尿液標(biāo)本537例，其中男性標(biāo)本208例，女性標(biāo)本329例，年齡1～90歲，平均42歲。

1.2 儀器和試劑

日本sysmex公司UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)，sysmex廠家提供配套尿液自動(dòng)化流水線的原廠試劑及質(zhì)控品；Olympus公司CX-21雙目顯微鏡；湘儀牌SC2542離心機(jī)低速離心；Nikon ECLIPSE E200相差顯微鏡。

1.3 檢測(cè)方法

在本實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)合格基礎(chǔ)上，嚴(yán)格按照本實(shí)驗(yàn)室儀器操作規(guī)程完成每日尿液室內(nèi)質(zhì)控檢測(cè)，確保儀器檢測(cè)的準(zhǔn)確性。確保所收集的門(mén)診及住院患者尿液均為中段尿，混勻后倒入一次性尿管約10 ml。所有標(biāo)本先用UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)檢測(cè)，UN2000檢測(cè)完離心后，接著用CX-21顯微鏡鏡檢尿液紅細(xì)胞項(xiàng)目，需要檢測(cè)尿液紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)信息的標(biāo)本離心后，再用相差顯微鏡鏡檢。離心鏡檢時(shí)按照第4版《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[2]操作，約10 ml尿液置于離心管，離心5 min，轉(zhuǎn)速1500 r/min，棄去上清液，剩余尿液0.2 ml混勻后取20 μl滴入干凈載玻片上，用蓋玻片覆蓋后鏡檢，進(jìn)行尿液紅細(xì)胞鏡檢及尿液紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查。

1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)中UC3500干化學(xué)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：隱血為（±）、（+）、（2+）、（3+）；UF5000尿液沉渣分析儀檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：女性紅細(xì)胞＞18個(gè)/μl、男性紅細(xì)胞＞15個(gè)/μl；顯微鏡鏡檢陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：紅細(xì)胞＞3個(gè)/HPF。兩種檢測(cè)方法結(jié)果判斷紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)信息以及血尿來(lái)源的標(biāo)準(zhǔn)[3]，UF5000尿液沉渣分析儀診斷標(biāo)準(zhǔn)：①非均一性紅細(xì)胞（Dysmorphic）：70%紅細(xì)胞前向散射光強(qiáng)度（RBC-P70FSC）＜70 ch；②均一性紅細(xì)胞（Isomorphic）：RBC-P70FSC≥100 ch且紅細(xì)胞前向散射光強(qiáng)度分布寬度（RBC-Fsc-DW）≤50，提示非腎小球性血尿可能；③混合性紅細(xì)胞（Mixed）：不滿足Dysmorphic和Isomorphic判定標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，則判斷為混合性血尿。相差顯微鏡判斷血尿來(lái)源標(biāo)準(zhǔn)[4]：尿中紅細(xì)胞＞8000/ml，異形紅細(xì)胞率≥80%，且大部分（＞70%）為2種以上異形改變的紅細(xì)胞形態(tài)判斷為多形性即腎源性血尿；尿中紅細(xì)胞＞8000/ml，異形紅細(xì)胞率≤50%，且大部分（＞70%）為正?；蛘邌我恍图t細(xì)胞形態(tài)判斷為均一性即非腎源性血尿；尿中紅細(xì)胞＞8000/ml，尿液中含有均一性和非均一性紅細(xì)胞，異形紅細(xì)胞率＞50%且＜80%判斷為混合性血尿。尿紅細(xì)胞檢查當(dāng)離心鏡檢陰性而UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)為假陽(yáng)性；當(dāng)離心鏡檢陽(yáng)性而UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)結(jié)果為陰性時(shí)為假陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料以%表示，兩種檢測(cè)方法所檢測(cè)尿液紅細(xì)胞結(jié)果比較采用四格表Fisher確切概率法，兩種檢測(cè)方法所檢測(cè)尿液紅細(xì)胞信息的分類結(jié)果一致性采用Kappa分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)和顯微鏡鏡檢尿液紅細(xì)胞結(jié)果

兩種方法檢測(cè)537例標(biāo)本紅細(xì)胞陽(yáng)性符合率為61.45%，陰性符合率為35.57%，總符合率為97.02%。顯微鏡檢測(cè)尿液紅細(xì)胞陽(yáng)性332例，陽(yáng)性率為61.82%；UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)檢測(cè)紅細(xì)胞陽(yáng)性344例，陽(yáng)性率為64.06%。假陽(yáng)性率為2.61%，假陰性率為0.37%。兩種紅細(xì)胞檢測(cè)方法比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)和顯微鏡鏡檢紅細(xì)胞結(jié)果

2.2 相差顯微鏡法和UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)檢測(cè)尿液紅細(xì)胞形態(tài)信息結(jié)果

兩種方法在尿液紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)的混合性與均一性的信息方面符合率較好，分別為91.25%和95.10%，紅細(xì)胞多形性、未提示信息方面符合率較差，為78.57%和86.57%。相差顯微鏡法和UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)檢測(cè)尿液紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)提示多形性、均一性、混合性、未提示紅細(xì)胞信息分類方面一致性采用Kappa分析，Cohen'skappa系數(shù)為0.835，P＜0.001，具有強(qiáng)一致性。見(jiàn)表2。

表2 UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)與相差顯微鏡檢法一致性分析

3 討論

尿液的有形成分較為復(fù)雜，某些有形成分如紅細(xì)胞與細(xì)菌、酵母菌、結(jié)晶等顆粒之間在流式細(xì)胞儀器的前側(cè)向激光散射強(qiáng)度、高低靈敏度熒光強(qiáng)度等指標(biāo)大小相似，儀器散點(diǎn)圖上分布位置接近導(dǎo)致儀器形態(tài)識(shí)別錯(cuò)誤。為此日本希斯美康公司針對(duì)實(shí)驗(yàn)室用戶應(yīng)用中儀器出現(xiàn)的檢測(cè)不足之處對(duì)其進(jìn)一步升級(jí)優(yōu)化，從而誕生了最新一代UF5000尿液沉渣分析儀。UF5000尿液沉渣分析儀通過(guò)檢測(cè)試劑、激光升級(jí)優(yōu)化，多了去偏振側(cè)向散射光，從而使尿液各有形成分分辨力增強(qiáng)，粒子識(shí)別力增加；細(xì)菌等小顆粒物質(zhì)識(shí)別更清晰，各種抗干擾能力增強(qiáng)。王燕鳳等[5]也對(duì)UF5000性能驗(yàn)證表明其是一臺(tái)性能優(yōu)良的全自動(dòng)尿沉渣定量分析儀。故其與UC3500尿液干化學(xué)儀組成的新一代UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)綜合檢測(cè)性能也得到提升。該UN流水線產(chǎn)品特點(diǎn)為區(qū)分細(xì)菌革蘭氏染色；紅細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)抗干擾能力增強(qiáng)，運(yùn)用流式細(xì)胞分析技術(shù)+核酸熒光染色技術(shù)，計(jì)算方法革新；給予臨床可報(bào)告項(xiàng)目增多。對(duì)于該流水線系統(tǒng)的區(qū)分細(xì)菌革蘭染色國(guó)內(nèi)外學(xué)者均已有報(bào)道[6-8]，國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道該流水線系統(tǒng)檢測(cè)紅細(xì)胞方面應(yīng)用研究。本研究重點(diǎn)探討UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)在尿液紅細(xì)胞檢測(cè)的臨床應(yīng)用價(jià)值。

本研究使用UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)與顯微鏡檢查對(duì)尿液中的紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，兩種方法檢測(cè)尿液紅細(xì)胞標(biāo)本537例，陽(yáng)性符合率為61.45%，陰性符合率為35.57%，總符合率為97.02%?？梢?jiàn)運(yùn)用該流水線系統(tǒng)紅細(xì)胞檢測(cè)方面與顯微鏡鏡檢法的總符合率較高，可以很大程度的降低鏡檢率。本研究結(jié)果顯示，顯微鏡檢測(cè)尿液紅細(xì)胞陽(yáng)性332例，陽(yáng)性率為61.82%；UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)檢測(cè)紅細(xì)胞陽(yáng)性344例，陽(yáng)性率為64.06%。假陽(yáng)性率為2.61%，假陰性率為0.37%。兩種紅細(xì)胞檢測(cè)方法比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。可見(jiàn)該系統(tǒng)可較大程度提高尿液紅細(xì)胞檢測(cè)的準(zhǔn)確率，降低鏡檢率。由于干擾UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)檢測(cè)紅細(xì)胞因素仍然存在，導(dǎo)致其檢測(cè)尿液紅細(xì)胞假陽(yáng)性率、假陰性率仍然有，可影響臨床診治。本研究通過(guò)分析顯示，造成UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)檢測(cè)尿紅細(xì)胞假陽(yáng)性的可能原因?yàn)榫?、氧化劑影響（UC3500干化學(xué)分析儀假陽(yáng)性原因），亦或?yàn)轭惤湍妇⒉菟徕}結(jié)晶、細(xì)菌等影響（UC5000尿液沉渣分析儀假陽(yáng)性原因）。造成UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)檢測(cè)尿中紅細(xì)胞假陰性可能原因?yàn)榫S生素C（＞100 mg/L）或者試紙條失效（UC3500干化學(xué)分析儀假陰性原因）；亦或?yàn)橛勺冃蔚募t細(xì)胞引起，如影紅細(xì)胞、棘形紅細(xì)胞、腫脹紅細(xì)胞等（UC5000尿液沉渣分析儀假陰性原因），還可能是尿液紅細(xì)胞破壞，此原因可從UC3500干化學(xué)分析儀檢測(cè)中的比重與pH值兩項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)和UF5000尿液沉渣分析儀的滲透壓這個(gè)檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)一步分析，因細(xì)胞在堿性、低滲透壓環(huán)境，細(xì)胞易腫脹、破裂[9]。尿液有形成分復(fù)雜易受儀器、試劑、溫度，采集時(shí)間干擾[10]，顯微鏡鏡檢法仍然是尿液紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”?？梢?jiàn)運(yùn)用該流水線系統(tǒng)和顯微鏡檢查聯(lián)合應(yīng)用可進(jìn)一步減少檢測(cè)的結(jié)果假陽(yáng)性率與假陰性率。

應(yīng)用UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)可提供尿液中紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類信息，可作為鑒別腎小球性與非腎小球性疾病方法之一。腎小球性血尿是腎小球發(fā)生了病理性改變，當(dāng)其尿液紅細(xì)胞流經(jīng)時(shí)，會(huì)受到擠壓扭曲變形以及腎小管內(nèi)環(huán)境pH值和滲透壓、介質(zhì)張力、各種代謝物作用使紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變；而非腎小球性疾病患者（如結(jié)石、普通泌尿道感染、腫瘤等），腎小球未發(fā)生病理性改變，則表現(xiàn)為均一性血尿[11]。尿紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類信息可為臨床診斷是腎性血尿或非腎性血尿提供可靠依據(jù)[12]，是臨床醫(yī)生判斷血尿來(lái)源最簡(jiǎn)易快速的參考方法之一。因其為無(wú)創(chuàng)快速檢測(cè)方法，一般情況下1～2 h可出報(bào)告，故一直深受腎病醫(yī)生重視，但相差顯微鏡經(jīng)常受諸多因素的干擾，如尿滲透壓、尿pH值、比重、離心速度等，其對(duì)臨床檢驗(yàn)技師的技術(shù)要求較高，經(jīng)驗(yàn)不足則直接影響檢測(cè)結(jié)果。UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)在經(jīng)過(guò)優(yōu)化升級(jí)后，將干擾紅細(xì)胞檢測(cè)的無(wú)定型鹽類結(jié)晶經(jīng)螯合作用溶解，使得紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)識(shí)別方面也得到很大優(yōu)化，可以比較準(zhǔn)確給臨床醫(yī)生提供一定泌尿系統(tǒng)臨床診斷指向性信息，對(duì)標(biāo)本要求只需新鮮第二次中段晨尿[13]，不需離心，可以更快速出具尿液紅細(xì)胞形態(tài)信息。本研究結(jié)果顯示，相差顯微鏡與UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)在紅細(xì)胞形態(tài)多形性、混合性、均一性、未提示信息檢測(cè)方面符合率分別是 78.57%、91.25%、95.10%、86.57%，總體符合率較高，相差顯微鏡法和UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)檢測(cè)尿液紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)提示多形性、均一性、混合性、未提示紅細(xì)胞信息分類方面一致性采用Kappa分析，Cohen'skappa系數(shù)為0.835，P＜0.001，具有強(qiáng)一致性?？梢?jiàn)該流水線系統(tǒng)在尿液紅細(xì)胞形態(tài)分類信息方面應(yīng)用價(jià)值高。同時(shí)本研究顯示134例標(biāo)本中流水線紅細(xì)胞提示信息為“未提示”，此部分標(biāo)本一部分為紅細(xì)胞檢測(cè)值在正常范圍里，故流水線顯示“未提示”即相當(dāng)于相差顯微鏡檢查為正常結(jié)果。另一部分為流水線儀器檢測(cè)局限性，如前述異形的紅細(xì)胞引起，例如影紅細(xì)胞、腫脹紅細(xì)胞等確實(shí)無(wú)法識(shí)別分類，這部分檢測(cè)結(jié)果只能靠人工相差顯微鏡鏡檢識(shí)別分類。對(duì)于這部分標(biāo)本判讀也應(yīng)結(jié)合流水線系統(tǒng)提供的滲透壓值及尿液pH值進(jìn)一步鑒別判斷。因?yàn)榧?xì)胞在低滲透壓、堿性環(huán)境中容易溶解、破裂進(jìn)而形成上述異形性紅細(xì)胞導(dǎo)致儀器無(wú)法正常判別。人工相差顯微鏡鏡檢法檢測(cè)尿紅細(xì)胞的形態(tài)學(xué)，可為臨床提供相對(duì)可靠的區(qū)分腎小球源性、非腎小球源性血尿?qū)嶒?yàn)依據(jù)[14]。本研究出現(xiàn)18例流水線分類為“未提示”紅細(xì)胞形態(tài)信息的標(biāo)本經(jīng)過(guò)人工相差顯微鏡鏡檢均得到有效區(qū)分。故UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)仍需與人工相差顯微鏡鏡檢法結(jié)合，在血尿來(lái)源的篩查與鑒別上相輔相成，方能為臨床提供快速準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果。運(yùn)用UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)與人工相差顯微鏡鏡檢相結(jié)合對(duì)尿液紅細(xì)胞形態(tài)及其分型進(jìn)行鑒別，有助于區(qū)分腎性和非腎性血尿患者，該鑒別方法值得推廣應(yīng)用[15]。

綜上所述，運(yùn)用UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)可提高尿液紅細(xì)胞檢測(cè)的準(zhǔn)確率，可以很大程度的降低鏡檢率，適于腎臟疾病的篩查。在尿液紅細(xì)胞形態(tài)及其分型方面，UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)應(yīng)用價(jià)值高，與相差顯微鏡鏡檢相結(jié)合，二者在血尿來(lái)源的篩查與鑒別上具有互補(bǔ)作用，值得推廣應(yīng)用。對(duì)于UN2000尿液全自動(dòng)化流水線系統(tǒng)，有必要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量對(duì)其所能檢測(cè)的項(xiàng)目進(jìn)行較為詳細(xì)的研究論證。