漂浮法與膜過濾法測定白砂糖中螨的比對研究

蘇俊婷，劉學(xué)文*，林雅慧*，陳海寧，羅煒詩，彭子慧，楊夢真

(1廣東省科學(xué)院生物工程研究所，廣東廣州510316；2中國輕工業(yè)甘蔗制糖工程技術(shù)研究中心，廣東廣州510316)

0 引言

食糖是我國重要的大宗農(nóng)產(chǎn)品[1-4]，作為全球第2大食糖消費國[5]，在2016/17年至2018/19年連續(xù)3個榨季中，中國食糖年消費量大致穩(wěn)定在1500萬t[6-7]，并將長期保持增長態(tài)勢[7-8]，其中約40%被民用途徑消耗[9]，因此食糖的安全與健康與人民生活息息相關(guān)。食糖在貯藏和運輸?shù)倪^程中一旦貯藏不當(dāng)很容易受到螨類的污染，而污染食糖的最常見螨類為甜果螨[10-12]。食糖中的甜果螨不僅影響食糖的質(zhì)量，造成經(jīng)濟(jì)損失；還可能因誤食導(dǎo)致過敏性哮喘、肺螨病、腸螨病和尿螨病等[13-18]，危害人體健康。GB 13104-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)《食糖》[19]中螨的生物指標(biāo)是不得檢出。白砂糖作為日常生活中最為廣泛使用的食糖[20]，是常用的調(diào)味品和甜味劑[21]，加強(qiáng)白砂糖中的螨類檢測具有重要意義。

GB 13104-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)《食糖》中螨的檢測方法是漂浮法，有研究表明[12]采用漂浮法分離原糖中的螨類時，一些難以浮出水面的螨體會影響檢出率，使檢出率不能達(dá)到 100%。QB/T 5008-2016輕工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《白砂糖中螨的測定》[22]中螨的檢測方法是膜過濾法。本文通過比對漂浮法和膜過濾法2種白砂糖中螨的檢測方法，分析影響螨的檢出率的因素，并嘗試改變膜過濾法的實驗條件，為白砂糖中螨的日常檢測提供參考數(shù)據(jù)和方法，提高檢測結(jié)果準(zhǔn)確率。

1 材料與方法

1.1 樣品制備

臨用前將實驗室飼養(yǎng)的螨經(jīng)酒精燈加熱處死，在顯微鏡下用0號毛筆挑取10頭，至250 g經(jīng)檢測后未檢出螨的白砂糖中充分混勻后備用。

1.2 試劑與儀器

三級水；載玻片；1000 mL錐形瓶；φ8 μm白色微孔濾膜、φ8 μm黑色微孔濾膜(上海興亞凈化材料廠)；磁力攪拌器(SilentShake)；隔膜真空泵(GM-1.0A，天津市津騰實驗設(shè)備有限公司)；體視顯微鏡(SMZ745，尼康儀器上海有限公司)；光學(xué)顯微鏡(L2050，廣州光學(xué)顯微鏡)。

1.3 方法

漂浮法：參照GB 13104-2014，添加溫度為25℃的水至1000 mL錐形瓶的三分之二處，放置于磁力攪拌器上充分溶解后，補(bǔ)充25℃水至瓶口處水不溢出為止，將潔凈載玻片與液面接觸靜置15 min后取下鏡檢，直至未檢出螨為止。

過濾法：參照QB/T 5008-2016，添加溫度分別為4、25、50和80℃的水900 mL至1000 mL燒杯中，放置于磁力攪拌器上充分溶解后過濾鏡檢，同時采用白色和黑色2種不同顏色的微孔濾膜過濾后進(jìn)行比對。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。使用Origin 2015對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 漂浮法與過濾法對螨檢出率的影響

25℃水溫下漂浮法與過濾法的螨的檢出率如表1所示：

表1 漂浮法與過濾法的螨檢出率

采用獨立樣本T檢驗比較2種方法對檢出螨率的影響，結(jié)果表明過濾法的檢出螨率顯著高于漂浮法(P＜0.05)。如表1結(jié)果所示，12組實驗中，采用漂浮法的螨漏檢率為 58.33%(7/12)，采用過濾法全部都檢出螨。

2.2 過濾法中水溫對螨檢出率的影響

采用單因素ANOVA方差分析比較不同水溫溶解白砂糖對螨檢出率的影響，結(jié)果如圖1所示。

圖1 不同水溫的螨檢出率

從圖1可以看出，不同水溫對螨的檢出率有顯著差異(F=24.091；P＜0.05)，圖上不同水溫間字母a、b、c、d表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。水的溫度越高，螨的檢出率越高。

2.3 過濾法中濾膜顏色對螨檢出率的影響

黑色和白色2種濾膜在體式顯微鏡下的視野如圖2所示。由圖2可見，80℃水溫過濾后，黑色濾膜與白色濾膜上的糖晶都很少、視野干凈，黑色濾膜上的螨對比度更大、立體感更強(qiáng)，更易于被觀察。4℃水溫過濾后，殘留在濾膜上的糖晶較多，黑色濾膜上的糖晶可能會影響螨的觀察，白色濾膜上的螨更易于被觀察。

圖2 不同水溫不同顏色濾膜的體式顯微鏡視野

過濾法中不同顏色濾膜對螨檢出率的影響如表2所示，采用獨立樣本T檢驗比較2種不同顏色濾膜對螨檢出率的影響，結(jié)果表明2種濾膜對螨檢出率無顯著差異(T=0.623；P=0.543)。

3 討論

3.1 漂浮法與過濾法的比較

表2 濾膜顏色對螨檢出率的影響

通過比對 25℃水溫下漂浮法與過濾法對螨檢出率的影響，發(fā)現(xiàn)對于白砂糖中含螨量較少(10頭)的情況，采用漂浮法漏檢率高達(dá) 58.33%(7/12)，而過濾法未出現(xiàn)漏檢情況。過濾法的螨檢出率顯著高于漂浮法，這可能是由于白砂糖雜質(zhì)較少溶解后氣泡較少，螨沒有漂浮上來，或檢驗人員取載玻片時，螨跟著水一起滴落等等，因此漂浮法對檢驗人員的熟練程度要求較高。過濾法相較于漂浮法更省時，螨檢出率更高，但是依然沒有達(dá)到100%的檢出率，其原因可能包括：①濾膜上較多的砂糖結(jié)晶會覆蓋螨體、結(jié)晶顏色形態(tài)和螨體相似而影響螨體被觀察。②實際過濾過程中，因砂糖結(jié)晶堵住濾膜，糖液需分多次過濾，糖液在多次轉(zhuǎn)移中可能導(dǎo)致螨體不慎丟失。

3.2 過濾法中不同水溫的比較

如圖1所示，不同水溫對過濾法中的螨檢出率存在顯著差異。根據(jù)表3蔗糖的溶解度隨溫度的變化，不同水溫下的螨檢出率與蔗糖溶解度的線性方程為y=-0.0165x2+11.527x-1133.9，相關(guān)系數(shù)為r2=0.8981；因此水的溫度越高，蔗糖溶解度越大，過濾法的檢出螨率越高。如圖2所示，由于溶液的溫度高時，白砂糖溶解度高，溶液容易透過濾膜，不會在濾膜上形成糖晶，堵塞濾膜，導(dǎo)致多次過濾引起螨丟失。

表3 蔗糖溶解度表[23]

3.3 過濾法中不同濾膜的比較

由表2結(jié)果可知，不同顏色的濾膜對過濾法的檢驗結(jié)果無顯著影響，但是隨著水的溫度升高，蔗糖溶解度增大，濾膜上殘留的糖晶減少，黑色濾膜上的螨較白色濾膜上的螨更易于被觀察。而對于黑色濾膜上殘留糖晶較多的情況，經(jīng)驗不足的檢驗人員可能會較難從糖晶中分辨出螨，此時可選擇白色濾膜。

4 結(jié)論

漂浮法和過濾法均能檢出白砂糖中的螨，但是對于白砂糖中螨含量較少的情況，檢驗人員操作誤差大，采用漂浮法容易出現(xiàn)漏檢的情況。過濾法能在一定程度上降低檢驗人員的操作誤差，大大提高檢測準(zhǔn)確率。但是過濾法中白砂糖的溶解度會影響檢測結(jié)果，在日常檢驗中應(yīng)注意充分?jǐn)嚢璋咨疤鞘蛊涑浞秩芙夂?，分多張濾膜多次充分沖洗過濾。在白砂糖中雜質(zhì)較多，較難溶解的情況下，可適當(dāng)提高水的溫度輔助過濾。黑色濾膜上的螨對比度更大、立體感更強(qiáng)，更易于被觀察；黑色濾膜上的過多糖晶可能會影響螨的觀察，也可選用白色濾膜。每種檢測技術(shù)都有一定的優(yōu)缺點，應(yīng)對檢測方法進(jìn)行交叉使用，如白砂糖中雜質(zhì)較多的情況下，可先采用漂浮法檢測后，再提高水的溫度采用過濾法，取長補(bǔ)短，以便快速、準(zhǔn)確檢測白砂糖中的螨。