離子色譜法測(cè)定阿侖膦酸鈉片含量的不確定度評(píng)定

葉紅兵

(合肥市食品藥品檢驗(yàn)中心，合肥 236000)

阿侖膦酸鈉片主要成分是阿侖膦酸鈉，為氨基二膦酸鹽骨代謝調(diào)節(jié)劑［1–2］。該調(diào)節(jié)劑與骨內(nèi)羥磷灰石有很強(qiáng)的親和力，能進(jìn)入骨基質(zhì)羥磷灰石晶體中。當(dāng)破骨細(xì)胞溶解晶體，藥物被釋放，能抑制破骨細(xì)胞活性，并通過(guò)成骨細(xì)胞間接起到抑制骨吸收效應(yīng)，防止骨質(zhì)的丟失［3–5］。準(zhǔn)確測(cè)定阿侖膦酸鈉片的含量可以有效控制藥品質(zhì)量，《中國(guó)藥典》2015 年版中阿侖膦酸鈉片含量的測(cè)定采用離子色譜法［6–7］。利用不確定度評(píng)定，可以定量評(píng)價(jià)測(cè)量結(jié)果的質(zhì)量和可信度。目前離子色譜法測(cè)定阿侖膦酸鈉片含量的不確定度評(píng)定未見(jiàn)報(bào)道［9–14］。為了提高阿侖膦酸鈉片含量檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度，筆者對(duì)離子色譜法測(cè)定阿倫膦酸鈉含量不確定度進(jìn)行評(píng)定，依據(jù)《中國(guó)藥典》和JJF 1059.1–012 《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》［15］，分析影響不確定度的因素，并對(duì)各個(gè)不確定度分量進(jìn)行評(píng)估，最終給出測(cè)量結(jié)果的置信區(qū)間和置信水平。建立適用于離子色譜法測(cè)定阿倫膦酸鈉含量不確定度的評(píng)定方法，有助于在藥品檢驗(yàn)過(guò)程中，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作，從而提高檢驗(yàn)水平，也為測(cè)定結(jié)果的科學(xué)評(píng)估提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

離子色譜儀：ICS–1600 型，美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

超聲波清洗器：S120H 型，德國(guó)ELMA 公司。

電子天平：Mettler–Toledo XP205 型，十萬(wàn)分之一，瑞士梅特勒公司。

超純水儀：Cascada I 型，頗爾（中國(guó)）有限公司。

離心機(jī)：Centrifuge5430R 型，德國(guó)艾本德公司。

草酸：分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

阿侖膦酸鈉對(duì)照品：含量為83.0%，編號(hào)為100901–201302，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

阿侖膦酸鈉片：批號(hào)為20190401，萬(wàn)特制藥(海南)有限公司。

實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 對(duì)照品溶液的配制

精密稱取2 份阿侖膦酸鈉對(duì)照品適量，分別置于2 只25 mL 容量瓶中，加水溶解并稀釋至標(biāo)線，搖勻，過(guò)濾，分別為對(duì)照品溶液1、對(duì)照品溶液2。

1.3 供試品溶液的制備

取20 片阿侖膦酸鈉樣品，精密稱定，研細(xì)，過(guò)孔徑為1.8 mm 的篩，精密稱取10 份阿侖膦酸鈉細(xì)粉各20 mg 于10 只50 mL 容量瓶中，加水適量，超聲溶解，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻，以3 000 r／min 轉(zhuǎn)速離心3 min，取上清液，過(guò)濾，作為供試品溶液。

1.4 色譜條件

保護(hù)柱：Dionex Ion-PacTMAG23 陰離子交換色譜柱(250 mm×4 mm，美國(guó)賽默飛世爾科技公司)；檢測(cè)器：電導(dǎo)檢測(cè)器；檢測(cè)方式：非抑制電導(dǎo)檢測(cè)；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：6 mmol／L 的草酸溶液，流量為1.0 mL／min。

1.5 測(cè)量值與輸入量的數(shù)學(xué)模型

樣品中阿侖膦酸鈉含量按式(1)、式(2)計(jì)算：

式中：X——樣品中阿侖膦酸鈉的標(biāo)示值，%；

ft——供試品溶液制備時(shí)的稀釋倍數(shù)；

249.08——阿侖膦酸的相對(duì)分子質(zhì)量；

271.06——阿侖膦酸鈉的相對(duì)分子質(zhì)量；

mt——樣品質(zhì)量，g；

B——標(biāo)示量，mg；

F——對(duì)照品溶液響應(yīng)因子；

As——對(duì)照品色譜峰面積；

fs——對(duì)照品溶液制備時(shí)的稀釋倍數(shù)；

ms——對(duì)照品質(zhì)量，g；

P——對(duì)照品純度，%。

2 不確定度來(lái)源

參考《中國(guó)藥典》［1–2］和JJF 1059.1–012 《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》［3］，根據(jù)1.5 數(shù)學(xué)模型，確定阿侖膦酸鈉含量的不確定度來(lái)源：

（1）A 類不確定度。重復(fù)性測(cè)定引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

（2）B 類不確定度。a.天平稱量，包括樣品的稱量和對(duì)照品的稱量；b.稀釋定容，包括樣品的稀釋定容和對(duì)照品的稀釋定容；c.離子色譜儀引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

3 不確定度評(píng)定

3.1 重復(fù)性測(cè)定引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

對(duì)10 份供試品進(jìn)行測(cè)定，數(shù)據(jù)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 10 份供試品測(cè)定結(jié)果 %

重復(fù)性測(cè)定引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

重復(fù)性測(cè)定引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.2 天平稱量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

天平稱量引入的不確定度主要包括重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差引入的不確定度u1和示值最大誤差引入的不確定度u2。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境相對(duì)獨(dú)立，稱量迅速且及時(shí)，環(huán)境溫度、濕度在短時(shí)間內(nèi)變化甚微，對(duì)稱量結(jié)果的影響可忽略不計(jì)。

3.2.1 供試品稱樣量（mt）引入的不確定度分量

20 片阿侖膦酸鈉的質(zhì)量為4.379 2 g。計(jì)算得每片平均質(zhì)量為0.219 0 g，標(biāo)示量為70 mg／片，平行稱取10 份樣品，稱量結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 平行10 份樣品稱量結(jié)果 mg

天平稱量允許的最大誤差為±0.03 mg，樣品需稱取10 次，按均勻分布考慮，K= 3，天平稱量示值最大誤差引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定：

稱取64.35 mg 供試品的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

64.35 mg 供試品稱樣量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：urel(mt) = u(mt)／64.35=9.408×10–4。

3.2.2 對(duì)照品稱樣量（ms）引入的不確定度分量

平行稱取對(duì)照品2 份，測(cè)得量分別為10.97、11.52 mg，平均值為11.24 mg。由天平檢定證書提供，天平稱量重復(fù)性的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01 mg ，按均勻分布考慮，K= 3，天平稱量的重復(fù)性引入的不確定度：u1(ms) = 0.005 77 mg。

天平稱量允許的最大誤差為±0.03 mg，對(duì)照品稱取2 次，按均勻分布考慮，K= 3，天平稱量的準(zhǔn)確性引入的不確定度：u2(ms)=0.072 08 mg。稱取11.24 mg 對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

稱取11.24 mg 對(duì)照品引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：urel(ms) = u(ms)／11.24 = 6.433×10–4。

3.3 定容體積引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

定容至50 mL 容量瓶引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：urel(Vs50) = 8.166×10–4。

3.4 離子色譜儀測(cè)量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

取對(duì)照品溶液1 連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)得色譜峰面積分別為8.789、8.803、8.823、8.823、8.862、8.862，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.025 7，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.92×10–3，則離子色譜儀測(cè)量引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：u(X2) = 0.025 7／ 6 =10.49×10–3。離子色譜儀測(cè)量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.5 合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

各分量的不確定度來(lái)源彼此獨(dú)立不相關(guān)，合成各相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量，采用離子色譜法測(cè)定阿侖膦酸鈉片含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.6 擴(kuò)展不確定度

在95%置信概率下，k=2，相對(duì)擴(kuò)展不確定度：

4 結(jié)語(yǔ)

阿侖膦酸鈉片含量測(cè)定的不確定度主要來(lái)源于樣品制備的定容體積和天平稱量引入的不確定度。因此，分析人員要熟練掌握測(cè)定的各個(gè)操作技術(shù)，嚴(yán)格按照規(guī)定進(jìn)行測(cè)定。