酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法檢測丙型肝炎病毒抗體的對比性研究及對特異度的影響

孫健

【摘要】 目的：探討酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法檢測丙型肝炎病毒抗體的對比性研究及對特異度的影響。方法：選取2018年1-12月于本院進(jìn)行丙型肝炎病毒抗體檢查的患者568例，所有患者均進(jìn)行酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法檢測。分析重組免疫印跡法（RIBA）確證酶聯(lián)免疫法結(jié)果，RIBA法確證化學(xué)發(fā)光法結(jié)果，比較酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法檢測的準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度。結(jié)果：RIBA法確診的陽性標(biāo)本為11例（1.9%），酶聯(lián)免疫法檢查結(jié)果，陽性標(biāo)本為65例（11.4%），化學(xué)發(fā)光法檢查結(jié)果，陽性標(biāo)本為34例（6.0%）。化學(xué)發(fā)光法準(zhǔn)確度、特異度均高于酶聯(lián)免疫法，兩種方法差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;兩種方法靈敏度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：丙型肝炎病毒抗體檢測中，化學(xué)發(fā)光法的準(zhǔn)確度、特異度高于酶聯(lián)免疫法，通過化學(xué)發(fā)光法可以有效提高臨床監(jiān)測準(zhǔn)確度，但是對酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法檢測均存在可疑現(xiàn)象時，需使用RIBA再次進(jìn)行確定。

【關(guān)鍵詞】 酶聯(lián)免疫法 化學(xué)發(fā)光法 丙型肝炎病毒抗體 特異度

[Abstract] Objective： To explore the comparative study on enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and chemiluminescence （CL） in the detection of hepatitis C virus （HCV） antibody and its effect on specificity. Method： A total of 568 patients tested for hepatitis C virus antibody were selected from our hospital from January to December 2018. All patients were tested by ELISA and CL. Recombinant western blotting （RIBA） was used to confirm the results of ELISA， RIBA was used to confirm the results of CL. The accuracy， sensitivity and specificity of ELISA and CL were compared. Result： There were 11 cases （1.9%） positive specimens confirmed by RIBA， 65 cases （11.4%） positive specimens confirmed by ELISA， the chemiluminescence were positive in 34 cases （6.0%）. The accuracy and specificity of CL method were higher than that of ELISA， the differences between the two methods were statistically significant （P<0.05）. There was no significant difference in the sensitivity between the two methods （P>0.05）. Conclusion： In the detection of hepatitis C virus antibody， the accuracy and specificity of CL are higher than that of ELISA. CL can effectively improve the accuracy of clinical monitoring and reduce the missed diagnosis. However， if there are suspicious phenomena in the detection of ELISA and CL， RIBA should be used to determine again.

[Key words] Enzyme-linked immunosorbent assay Chemiluminescence Hepatitis C virus antibody Specificity

丙型肝炎主要是由丙肝病毒（HCV）引發(fā)的慢性嚴(yán)重疾病，該疾病的傳播方式主要為腸道外傳播;當(dāng)患者感染該病毒后肝臟組織也會受到損傷[1]。且患者感染初期并沒有明顯的癥狀，這就不容易及時發(fā)現(xiàn)病情，當(dāng)發(fā)生明顯的癥狀時已經(jīng)處于病情較為嚴(yán)重階段，有的患者還會演變?yōu)楦斡不?、慢性肝炎、肝癌等。故對患者及時進(jìn)行丙肝病毒抗體檢測十分重要。但是在檢測患者的時候選擇更加經(jīng)濟(jì)、快速、準(zhǔn)確的檢測方法非常關(guān)鍵。當(dāng)前很多醫(yī)院都是使用酶聯(lián)免疫法檢測，隨著方法的不斷增多，化學(xué)發(fā)光法逐漸使用，該方法的特點是線狀范圍寬、靈敏度高[2]，但是兩種方法究竟誰更好還需要進(jìn)一步研究。本院在丙型肝炎病毒抗體檢測中，使用酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行治療，目的是兩種方法進(jìn)行對比分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1-12月于本院進(jìn)行丙型肝炎病毒抗體檢查的568例患者，所有患者均進(jìn)行酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法檢測。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）無其他傳染性疾病;（2）未合并甲型、乙型肝炎。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）部分臨床資料缺失;（2）血清檢測標(biāo)本損壞或者變質(zhì)。男331例，女237例，年齡26～70歲，平均年齡（55.6±3.5）歲?；颊呔椴⑼獗狙芯?，研究獲得醫(yī)院倫理委員會準(zhǔn)許。

1.2 方法 （1）樣本采集：所有患者均抽取靜脈血10 mL，后在4 h之內(nèi)分離血清后保存在4 ℃條件下，第2天使用酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法對其進(jìn)行檢測。收集酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法檢測陽性和可疑的標(biāo)本，0.9

1.3 觀察指標(biāo) （1）分析RIBA法確證酶聯(lián)免疫法結(jié)果。（2）分析RIBA法確證化學(xué)發(fā)光法結(jié)果。（3）分析酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法檢測的準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以（x±s）表示;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RIBA法確證酶聯(lián)免疫法結(jié)果分析 酶聯(lián)免疫法檢查結(jié)果，陽性標(biāo)本為65例（11.4%），RIBA法確診的陽性標(biāo)本為11例（1.9%），見表1。

2.2 RIBA法確證化學(xué)發(fā)光法結(jié)果分析 化學(xué)發(fā)光法檢查結(jié)果，陽性標(biāo)本為34例（6.0%），RIBA法確診的陽性標(biāo)本為11例（1.9%），見表2。

2.3 酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法檢測的準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度分析 化學(xué)發(fā)光法準(zhǔn)確度、特異度均高于酶聯(lián)免疫法，兩種方法差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;兩種方法靈敏度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

3 討論

丙型肝炎是臨床上致死率較高的疾病，可以通過性傳播、母嬰、血液等方式傳播。大部分丙型肝炎感染后的初期不會出現(xiàn)明顯的癥狀，這就容易使得患者病情惡化，延誤治療，最終可能會演變?yōu)楦斡不?、肝癌等[7]。因此尋找有效地檢測方法及時對感染患者檢出及時讓其接受治療對改善患者預(yù)后有非常重要的作用。丙型肝炎感染的患者血液中會有丙型肝炎病毒抗體，臨床上常使用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行檢測患者病毒感染情況，隨著檢測技術(shù)的發(fā)展與進(jìn)步，臨床上逐漸使用化學(xué)發(fā)光法對患者進(jìn)行檢測，但是兩者之間到底哪個最好還是不確定的[8]。因此，本次研究對兩者的檢測情況進(jìn)行了對比，希望可以為臨床提供一定的依據(jù)。

丙型肝炎主要由患者感染了HCV引發(fā)的疾病，當(dāng)前臨床上將HCV分為了6個不同的基因型，同一個基因型又會分為不同的亞型，且不同基因型的分布存在顯著地區(qū)差異，我國主要是1b型[9]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計顯示，全世界感染丙型肝炎的感染率大約為3%，每年新發(fā)生的丙型肝炎患者在不斷地增多。我國的丙型肝炎感染率、人數(shù)都在不斷在上升，且丙型肝炎對人身的傷害是比較大的，會導(dǎo)致肝臟纖維化、慢性炎癥壞死發(fā)生，有的患者還會發(fā)展為肝硬化甚至是肝癌[10]。因此，盡早檢出丙型肝炎患者對抑制病情發(fā)展有重要的作用。

當(dāng)前臨床上檢測HCV感染的方法較多，主要使用分子生物學(xué)技術(shù)與血清學(xué)方法。分子生物學(xué)技術(shù)操作比較復(fù)雜，試劑檢測費(fèi)用也較高;而血清學(xué)方法操作比較簡單，試劑檢測費(fèi)用也較低，臨床上大部分使用血清學(xué)方法檢測[11]。初篩試驗中臨床上多使用酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法。使用酶聯(lián)免疫法對血清中的抗HCV進(jìn)行檢測的期間，容易受到各方面的影響，導(dǎo)致假陽性，同時可能還會因為靈敏度較低導(dǎo)致假陰性出現(xiàn)[12]。

化學(xué)發(fā)光法檢測中主要是使用苯并熒蔥（發(fā)光底物），該配方可以有效防止其他因素的影響，可以將HCV抗體快速、準(zhǔn)確、高靈敏度的檢出[13]。此次研究中血清標(biāo)本沒有發(fā)生溶血、脂血，且是第二天進(jìn)行檢測，防止了血球沉降不充分的影響因素。國外相關(guān)報道顯示，S/CO≥3.8的患者可能是真正的HCV抗體陽性，而S/CO<3.8的患者可能是假陽性，國內(nèi)相關(guān)報道顯示，不管是酶聯(lián)免疫法還是化學(xué)發(fā)光法檢測S/CO較低的標(biāo)本時應(yīng)該慎重，必要時可以輔助RIBA法確證，以便排除假陽性[14]。

此次研究顯示，酶聯(lián)免疫法檢查結(jié)果，陽性的標(biāo)本為65例（11.4%），化學(xué)發(fā)光法檢查結(jié)果，陽性的標(biāo)本為34例（6.0%），RIBA法確診的陽性標(biāo)本為11例（1.9%），化學(xué)發(fā)光法檢查結(jié)果與RIBA法復(fù)查結(jié)果更相近，這就說明，在丙型肝炎病毒抗體檢測中，使用化學(xué)發(fā)光法檢測結(jié)果更為可靠?；瘜W(xué)發(fā)光法的優(yōu)點為檢測方便、靈敏度高、有效期長、多樣化標(biāo)記物、抗體純度高，與酶聯(lián)免疫法檢測相比較，化學(xué)發(fā)光法的靈敏度更高[15]。因此，化學(xué)發(fā)光法檢測丙型肝炎病毒抗體結(jié)果更準(zhǔn)確。

肝炎病毒在臨床上是一種威脅人類生命安全的重要問題，丙型肝炎是比較常見的病毒性肝炎，與急慢性患者相比，更危險[16]。我國丙型肝炎的感染率大約為3.2%，且感染HCV病毒后存在慢性化，大約有75%的患者會最終演變成慢性感染，并導(dǎo)致肝硬化、肝癌等終末期肝病發(fā)生[17]。該疾病在臨床上沒有比較有效地預(yù)防疫苗或者是特效治療藥物，尤其全球經(jīng)濟(jì)一體化的情況下，人口流動速度加快、范圍增大、人數(shù)增多等，使得傳染性肝炎的傳播范圍更廣泛，對人群傳染性指標(biāo)感染情況掌握更有利于臨床采取有效措施對患者進(jìn)行處理，更有利于為臨床進(jìn)一步治療提供科學(xué)的依據(jù)[18]。因此，對健康人群進(jìn)行早期篩查是控制丙型肝炎病毒傳播的有效途徑。HCV病毒主要是要通過器官移植（供給人員感染HCV）、性傳播、母嬰傳播、醫(yī)務(wù)人員不小心被手術(shù)刀剪或者是注射針頭刺破傳播、手術(shù)操作（外科手術(shù)、牙科治療、內(nèi)窺鏡檢查、美容、紋身等）、肌肉注射或者是靜脈注射毒品、血液透析、臨床輸血、使用公共用品等[19]。因此，為了盡早防止丙型肝炎病毒的傳播，早期讓人們接受丙型肝炎病毒抗體檢測非常重要，這樣才能有效、及時發(fā)現(xiàn)病毒攜帶人員，將傳染源進(jìn)行控制。

使用酶聯(lián)免疫法對人群進(jìn)行丙型肝炎病毒抗體檢測，雖然臨床特異度較高，但是該方法操作復(fù)雜，因此需要特定的儀器與多種試劑，檢測時間也更長。因此，酶聯(lián)免疫法檢測丙型肝炎病毒抗體存在較大的局限性。而化學(xué)發(fā)光法是近幾年興起的一種新型的檢測方法，該方法操作更簡單、所需時間更短、檢測更快速。最重要的是化學(xué)發(fā)光法的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度更高，最終的檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，還不容易受到其他因素的影響[20]。此次研究顯示，化學(xué)發(fā)光法準(zhǔn)確度、特異度均高于酶聯(lián)免疫法，兩種方法差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;兩種方法靈敏度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。這說明在丙型肝炎病毒抗體檢測中，使用化學(xué)發(fā)光法檢測特異度、準(zhǔn)確度更高。臨床在進(jìn)行初篩實驗時一般會選擇酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法。這是因為在對HCV感染檢測的期間，機(jī)體容易受到其他因素的影響，血清標(biāo)本同時還會受到影響，檢測結(jié)果也由于人為原因不準(zhǔn)確，酶聯(lián)免疫法受到的影響比較多，最終假陽性率更高。同時，因為試劑本身靈敏度更低，還會出現(xiàn)假陰性。這是酶聯(lián)免疫法最大的缺點，而化學(xué)發(fā)光法可以有效彌補(bǔ)酶聯(lián)免疫法的缺點，故在臨床上逐漸越來越受歡迎?；瘜W(xué)發(fā)光法由于各種優(yōu)點在臨床上有更高的使用價值，且在丙型肝炎病毒抗體檢測中發(fā)揮著重要的作用，在盡早發(fā)現(xiàn)并預(yù)防、控制丙型肝炎病毒傳播方面發(fā)揮著重要的意義。雖然化學(xué)發(fā)光法的效果值得肯定，但是必要時還是要有RIBA法的輔助，以便提高臨床檢測準(zhǔn)確性。

綜上所述，丙型肝炎病毒抗體檢測中，化學(xué)發(fā)光法的準(zhǔn)確度、特異度高于酶聯(lián)免疫法，通過化學(xué)發(fā)光法可以有效提高臨床監(jiān)測，降低漏診，但是對酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法檢測均存在可疑現(xiàn)象時，需使用RIBA再次進(jìn)行確定。

參考文獻(xiàn)

[1]張海萍，閆惠平，陳小三，等.不同免疫方法檢測原發(fā)性膽汁性膽管炎特異性自身抗體的對比研究[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2018，41（3）：203-207.

[2]彭及良，陳亮，李丹紅，等.速凍低溫倒置離心法去除血漿乳糜微粒的效果及其對傳染性指標(biāo)檢測的影響[J].中國輸血雜志，2018，31（11）：1250-1252.

[3]楊浩，程龍球，黃建芳，等.重金屬銅化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫快速檢測方法的建立[J].中國免疫學(xué)雜志，2019，35（5）：584-590.

[4] Lapa D，Agrati C，Scognamiglio P，et al.GB virus type C cross-reactivity in clinical samples with a low hepatitis C virus antibody positive response[J].APMIS，2019，127（2）：109-111.

[5]繆禮鋒，沈月蘭，蘇斌，等.安徽省艾滋病監(jiān)測哨點HCV篩查抗體陽性樣本補(bǔ)充試驗與病毒載量檢測結(jié)果分析[J].中國艾滋病性病，2019，25（5）：496-498.

[6]洪陽寧，孫芳，張和軒，等.化學(xué)發(fā)光法和放射免疫法對原發(fā)性醛固酮增多癥的診斷效果比較[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2019，41（21）：2080-2086.

[7]王歡，陸惠慧，尚琴，等.PIVKA-Ⅱ在乙型肝炎病毒感染者中篩查HCC的應(yīng)用價值分析[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2018，15（12）：62-65.

[8] Navarta L M，Espul C A，Acosta-Rivero N.High prevalence of a variety of autoantibodies in a population of hepatitis C virus-infected individuals[J].Apmis，2018，126（6）：515-522.

[9]杜玄，趙燕英，劉驥，等.金黃色葡萄球菌腸毒素P雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測方法的建立[J].現(xiàn)代食品科技，2018，34（4）：264-269.

[10]陳永忠，何磊良，王納納，等.嘔吐毒素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析方法的建立及應(yīng)用[J].河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2018，39（4）：79-84.

[11]孟繁君，王利新，王琦，等.HCV核心抗原的化學(xué)發(fā)光法檢測在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用研究[J].現(xiàn)代免疫學(xué)，2018，38（6）：479-482.

[12] Hübschen J M，Charpentier E，Weicherding P，et al.IgG antibody prevalence suggests high immunization needs in newcomers to Luxembourg， 2012[J].Vaccine，2018，36（6）：899-905.

[13]郭永燦，姚娟，趙容，等.化學(xué)發(fā)光法檢測乙型肝炎病毒核心抗體臨界值及可疑區(qū)間的探討[J].中國輸血雜志，2018，31（4）：380-383.

[14]葉燕，胡志剛，李梅，等.丙型肝炎抗體Eu3+、Sm3+雙標(biāo)記分析法的建立及應(yīng)用[J].中華核醫(yī)學(xué)與分子影像雜志，2018，38（10）：677-680.

[15]繆希莉，高貴民，徐瑞，等.輸血前感染性指標(biāo)檢測對患者輸血感染的影響分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2018，28（9）：1371-1373.

[16] Pierre A M M A，F(xiàn)eldner A C D C A，Carvalho-Filho R J，et al.

Prevalence of hepatitis delta virus among hemodialysis and renal transplant patients[J].The International Journal of Artificial Organs，2018，41（3）：171-174.

[17]高曉紅，郝曉芳，景鵬，等.索非布韋與聚乙二醇干擾素α-2b和利巴韋林聯(lián)合治療乙型/丙型肝炎病毒重疊感染1例[J].中華肝臟病雜志，2018，26（5）：395-396.

[18]劉義慶，楊帆，李麗，等.山東地區(qū)人群乙型肝炎和丙型肝炎重疊感染情況研究[J].重慶醫(yī)學(xué)，2018，47（10）：1389-1391.

[19]任珊，徐鵬，張瑩，等.血清AFP水平和組織GPC3、VEGF蛋白表達(dá)在丙肝相關(guān)肝癌中的意義[J].廣東醫(yī)學(xué)，2018，39（19）：2890-2894.

[20] Cheah B C，Jane D，Singh G R，et al.Sub-optimal protection against past hepatitis B virus infection where subtype mismatch exists between vaccine and circulating viral genotype in northern Australia[J].Vaccine，2018，36（24）：3533-3540.

（收稿日期：2020-05-25） （本文編輯：劉蓉艷）