醫(yī)療污水中糞大腸菌群測定方法及研究進展

◇保山市疾病預防控制中心 楊秀紅

醫(yī)療機構污水在排放前要妥善處理，通過做好管控工作，有利于切斷傳染病傳播途徑，為人體健康與生態(tài)環(huán)境安全提供有力保護。抽取轄區(qū)內醫(yī)療機構污水41份，用多管發(fā)酵法（多步驟）、多管發(fā)酵法（單步驟）對其進行糞大腸菌測定。醫(yī)療機構在污水消毒后1小時，排放前進行采樣。本文在分析糞大腸菌群時主要用多管發(fā)酵法（多步驟）、多管發(fā)酵法（單步驟）等方法，并通過綜合比較與研究，提出在現階段糞大腸菌群測定中能夠省略其他步驟，并在嚴謹的驗證與完善后，亦可成為較好的選擇。

糞大腸菌群有著極強的耐熱特征，在44.5℃±0.5℃溫度條件下能夠正常生長，在總大腸菌群中屬于非常關鍵的構成部分。糞便內細菌為糞大腸菌群主要來源，并與水中很多病毒的關系非常密切，在缺少活的宿主情況下，腸道病毒一般無法繁殖，進入水環(huán)境后期存活能力明確提升，且時間在數天到數月之間。在出現糞便污染現象后，將引起腸道病原菌污染的問題，由此帶來腸道傳染病以及流行病等情況?；诖藢S大腸菌群的測定具有重要意義，能夠對水源被糞便污染的程度作出有力監(jiān)控與準確反映，相關部門獲得檢測數據后，能夠為制定流行疾病發(fā)生與傳播的防控方案創(chuàng)造有利條件。近年來污水中糞大腸菌群測定時通常采用多管發(fā)酵法。針對這種情況，本文僅對多管發(fā)酵法檢測進行了研究，并提出了改進措施，旨在為監(jiān)測人員找到更加有效與簡單的測定方式提供可靠依據。

1 技術背景

在污水糞大腸菌群測定過程中，主要根據糞大腸菌群檢出結果判斷醫(yī)療污水是否存在污染。糞大腸菌群含量水平，可以將糞便污染情況反映出來，由此作為其對人體健康危害程度的依據。糞便作為人類腸道排泄物，在醫(yī)療污水中不僅包括健康人糞便，也包括腸道患者、帶菌者等糞便，因此分辨內既有正常細菌，也含有大量的腸道致病菌，比如志賀氏菌、沙門氏菌等[1]。若是醫(yī)療污水內存在糞便污染的現象，將引起腸道致病菌污染的問題，并因此帶來流行病，我們必須充分了解其對人體健康造成的潛在危險。在病原微生物傳播的防控工作中，需要采取有效、準確的測定手段，在醫(yī)療污水糞大腸菌群測定中常用多管發(fā)酵法，但是傳統(tǒng)方式存在實驗步驟多、檢測周期長、操作較為繁瑣等不足，需要進行研究與分析，找到可行的改進措施。

2 材料與方法

2.1 實驗材料

為了準確獲取醫(yī)療污水中糞大腸菌群的含量，本文在測定中主要材料來源于轄區(qū)內41份消毒后的出水。在培養(yǎng)液濃度與量方面，當接種體積為10 mL時，試管中需要裝有3倍濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)液5 mL。當接種量不超過1 mL時，需要接種普通濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10 mL。

2.2 實驗方法

取轄區(qū)內41份醫(yī)療機構消毒后的出水，按多管發(fā)酵法《醫(yī)療機構水污染物排放標準》附錄A進行。具體來說，在測定糞大腸菌群含量的過程中，主要包括以下步驟：首先，在乳糖膽鹽培養(yǎng)液中接種樣品，在44 ℃條件下培養(yǎng)24 h；其次，采取平板分離的措施，在EMB中接種產酸發(fā)酵管，在37 ℃條件下培養(yǎng)24 h；最后，采取染色鏡檢的方法，通過革蘭氏陰性無芽孢桿菌對第一步的培養(yǎng)液進行接種，并于44 ℃條件下培養(yǎng)24 h。

2.3 數據統(tǒng)計

選擇excel和SPSS1 7.0軟件對獲得的數據進行整理與統(tǒng)計。

3 結果

3.1 水樣檢測

用多管發(fā)酵法（多步驟）和多管發(fā)酵法（單步驟）為醫(yī)療機構污水處理消毒前后的出水進行比對實驗。在檢測中應該先對水樣進行混合，結合水樣污染情況將接種量確定下來，通常來說各樣品需要有至少3個水樣量接種，相同接種水樣量至少為5管[2]。在加入水樣的前后，要把培養(yǎng)管關口通過酒精燈進行消毒，再進行封口。

3.2 檢測方法－多管發(fā)酵法（多步驟）

（1）取污水樣品10 ml、1 ml、0.1 ml樣品在含有乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內進行接種，試管中設置有小倒管，每個稀釋度5管，在44 ℃的條件下培養(yǎng)24 h。

（2）乳糖膽鹽培養(yǎng)液變色、產氣時小倒管內出現氣泡。24 h培養(yǎng)后，在EMB培養(yǎng)基中分別劃線接種產酸的試管內培養(yǎng)液。置于37 ℃條件下培養(yǎng)箱中，持續(xù)18 h～24 h。

（3）挑取可疑大腸菌群菌落，采取革蘭氏染色和鏡檢等方式?？梢删溆校孩偕钭虾谏?，帶有金屬光澤；②紫黑色，這類菌落略有金屬光澤；③淡紫紅色，菌落的中心色比較深。涂片是革蘭氏陰性無芽胞桿菌，選擇上述1～3個在5 ml乳糖蛋白胨培養(yǎng)液倒管與倒管的試管中接種，在44 ℃條件下的培養(yǎng)箱內保持24 h。取出試管后進行觀察，若是其既產酸又產氣，則可以判定為糞大腸菌群陽性管。

3.3 檢測方法－多管發(fā)酵法（單步驟）

取污水樣品10 ml、1 ml、0.1 ml樣品在含有乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內進行接種，其中同樣設置有小倒管，每個稀釋度5管，在44 ℃條件下培養(yǎng)24 h。在培養(yǎng)結束后，將試管取出認真、細致觀看，若是顏色從紫色變?yōu)辄S色，且產生了氣泡[3]。簡單來說就是試管既產酸又產氣，則判定為糞大腸菌群陽性管。

3.4 檢驗結果

在對醫(yī)療污水中糞大腸菌群測定過程中，結合不同接種量的發(fā)酵管呈現的陽性結果數目，得出具體檢驗結果如表1所示。

表1 檢驗結果對比

3.5 討論

糞大腸菌群作為人體腸道中的一種細菌，當脫落、死亡后將隨著糞便由人體排向外界，在微生物分解作用下將形成二氧化碳。若是糞大腸菌群含量超出一定水平，則無法通過微生物對其進行分解，細菌長時間存在外界，將帶來污染的問題，影響人們正常生活與社會和諧穩(wěn)定[4]。對此我國在污水排放標準中明確了糞大腸菌群的含量，若是其含量較高，則表明醫(yī)院在污水處理上不到位，需要接受相應的處罰與制裁。

在本文中所用的兩種方法檢測的糞大腸菌群結果，結果完全一致。都可以對水樣內微生物污染程度作出準確、全面的判斷，這在未來醫(yī)療污水廠對水質微生物污染進行評價過程中，將成為一種常用的標準檢測方法。

4 結語

總之，糞大腸菌群作為在人和溫血動物腸道內生存的腸道細菌，在排泄中會進入外界，在糞便干重中超過了1/3。本文選擇多管發(fā)酵法的兩種方法測定轄區(qū)內醫(yī)療機構排放污水中的糞大腸菌群含量，并通過對比與分析后獲得最終結果。在今后醫(yī)療污水糞大腸菌群測定中運用文中提出的方法，可以省略后面幾個步驟，能更快捷的得到較準確的數據。