北京南海子麋鹿苑春季麋鹿糞樣皮質(zhì)醇激素變化及其指示作用

張樹苗 李夷平 陳 頎 孟慶輝 程志斌 陳 星 白加德

(北京麋鹿生態(tài)實(shí)驗(yàn)中心，北京，100076)

麋鹿(Elaphurusdavidianus)俗稱“四不像”，是世界自然保護(hù)聯(lián)盟IUCN紅皮書野外滅絕(EW)物種。1920年在我國本土滅絕[1-2]。1985年，我國開啟了麋鹿重引進(jìn)項(xiàng)目，項(xiàng)目首選了北京南海子皇家獵苑作為重引進(jìn)放歸地，并在1985—1987年共重引進(jìn)77只麋鹿作為北京南海子麋鹿苑和江蘇大豐麋鹿國家級自然保護(hù)區(qū)的基礎(chǔ)種群，以恢復(fù)園囿種群，為恢復(fù)野生種群儲備動物。經(jīng)過30年的圈養(yǎng)繁殖和種群擴(kuò)大、輸出及野外放歸，截至2020年，我國的麋鹿分布于全國81個遷地保護(hù)場所，種群數(shù)量達(dá)到8 000余只。其中，野生種群1 000余只，圈養(yǎng)和半散放種群7 000余只，這些圈養(yǎng)或半散放場所多對公眾開放。

在對外開放的場所中，開展游客對動物的干擾程度的研究是當(dāng)前動物保護(hù)、動物福利關(guān)注的熱點(diǎn)之一。動物受到干擾會產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，此時(shí)體內(nèi)皮質(zhì)醇激素會產(chǎn)生顯著變化，因此，皮質(zhì)醇激素成為公認(rèn)的反應(yīng)動物應(yīng)激狀態(tài)的指標(biāo)[3-5]。麋鹿應(yīng)激狀態(tài)的高低在一定程度上能夠反映其適應(yīng)環(huán)境條件的能力[6]，通常情況下，過低的應(yīng)激水平表明動物不能對環(huán)境變化及時(shí)做出有效的反應(yīng)，過高的應(yīng)激狀態(tài)則會損害動物的正常生理活動。近幾年來，研究者已逐漸采用非損傷性取樣法研究動物糞樣內(nèi)的皮質(zhì)醇激素值，并評價(jià)目標(biāo)動物的生存狀態(tài)[7-10]。迄今，崔媛媛等[11]通過監(jiān)測糞樣中皮質(zhì)醇激素濃度考察游客密集程度對圈養(yǎng)大熊貓(Ailuropodamelanoleuca)的影響程度。Der等[12]通過監(jiān)測糞樣中皮質(zhì)醇激素含量高低研究游客密度對3種狐蝠(Acerodonjubatus、Pteropusvampyrus、Pteropushypomelanus)的影響，Barja等[13]研究發(fā)現(xiàn)位于核心保護(hù)區(qū)(無干擾區(qū))的松貂(Martesmartes)糞樣中皮質(zhì)醇激素明顯低于有游客干擾的限制區(qū)及自由進(jìn)入?yún)^(qū)。

2）十二指腸支架：該種支架放置后由于腸蠕動的影響本身就存在移位的可能。鎳鈦合金類支架與MRI兼容，對移位的附加力影響不大，不銹鋼支架對于移位的參與度多少不清楚，通常要禁行MRI檢查。

本文采用非損傷性方法，研究春季(客流量)北京南海子麋鹿苑半散放麋鹿種群的生理應(yīng)激狀態(tài)，并與游客干擾程度相比較，旨在闡明生態(tài)旅游中游客量的變化對麋鹿生存狀態(tài)造成的影響，以期為麋鹿遷地保護(hù)場所的科學(xué)管理提供參考數(shù)據(jù)。

動遷辦很快進(jìn)了南菜村，拆遷的傳言得到證實(shí)?；疖囌灸弦?，和高鐵并站。日子確實(shí)要變了，南菜馬上就要被格式化了?？吹缴w著大紅印章的政府通告，侯大同很驚訝，好像是誰告訴他無花果開花了。政府這叫專制，沒有征得我們的同意就要拆遷，沒門！

1 材料與方法

1.1 糞樣采集和保存

參照郎冬梅等[14]的提取方法并略做改動：將冷凍保存的糞樣置于室溫解凍，取5 g左右糞便顆粒放入研缽中研磨。而后稱取約1 g濕糞于15 mL離心管中，加入5 mL 90%乙醇溶液；用恒溫水育振蕩器20℃下振蕩混合液20 min；經(jīng)2 500 rpm離心15 min后收集上清液和沉淀，向離心管沉淀物中再加入同濃度提取液5 mL，重復(fù)上述步驟，將2次得到上清液混合均勻后取1 mL于新離心管，做完標(biāo)記后置于-20℃下保存待測。同時(shí)設(shè)置對照組，測定糞便含水量，依次將測得的數(shù)據(jù)換算為每克干糞所含各激素的量(ng/g)。

1.2 糞便皮質(zhì)醇激素提取和測定

2017年3—5月，對北京南海子麋鹿苑的健康麋鹿采集糞樣，3月采集樣品240份(8 d，30份/d)，5月采集樣品150份(5 d，30份/d)，共獲得樣品390份。采樣時(shí)間為每天8：00—10：00，每頭麋鹿采取新鮮糞便5 g左右，選取時(shí)挑選糞便中無污染的中心部分顆粒，并抓勻放入自封袋內(nèi)，記錄好個體編號、采集日期，排除空氣封口后立刻放入-20℃冰箱保存。

2017年3—5月，我們對北京南海子麋鹿苑麋鹿糞樣皮質(zhì)醇含量及游客量進(jìn)行了測定與統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見圖1、圖2、圖3所示。

1.3 數(shù)據(jù)分析

在高職院校的發(fā)展過程中，為了可以更好的培養(yǎng)學(xué)生的工匠精神，院校還應(yīng)該對結(jié)合自身發(fā)展現(xiàn)狀，對課程內(nèi)容、課程設(shè)計(jì)等進(jìn)行合理革新。

2 結(jié)果

2.1 春季麋鹿糞樣中皮質(zhì)醇水平變化

采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對上述樣品中皮質(zhì)醇激素含量進(jìn)行檢測。酶免試劑盒：試劑盒為北京北方生物技術(shù)研究所生產(chǎn)。主要技術(shù)參數(shù)：(1)測定范圍：5—100 ng/mL；(2)靈敏度：<1 ng/m；(3)變異系數(shù)：批內(nèi)<9%，批間<11%；(4)特異性：無交叉反應(yīng)。

通過對北京南海子麋鹿苑麋鹿糞樣皮質(zhì)醇含量與前一日游客量及當(dāng)日游客量進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果見表1、表2所示。

從圖1、圖2，我們可以看出麋鹿糞樣中皮質(zhì)醇水平的變化趨勢與當(dāng)日客流量不存在相關(guān)性，而與前一日游客的數(shù)量變化趨勢基本一致。2017年北京南海子麋鹿苑1月的平均游客量為282人，2月的平均游客量為1 334人，3月9日游客量上升到1 500人，次日麋鹿糞樣中的皮質(zhì)醇含量為140 ng/g。在3月12日植樹節(jié)，當(dāng)日隨著游客量的顯著增多，次日麋鹿糞樣中的皮質(zhì)醇含量明顯上升至204 ng/g；3月14日隨著游客量的下降，次日的麋鹿糞樣中的皮質(zhì)醇含量也下降。而后隨著游客量的上升第2日的糞樣中的皮質(zhì)醇含量再度上升。

廣東粵墾農(nóng)業(yè)小額貸款股份有限公司于2015年12月辦理工商注冊登記，注冊資金人民幣30,000萬元，注冊地在珠海橫琴自貿(mào)區(qū)，運(yùn)營總部在廣州。公司的股權(quán)結(jié)構(gòu)為：廣東農(nóng)墾及成員企業(yè)占65%，中國人保資產(chǎn)占30%，橫琴金投占5%。公司2016年3月29日經(jīng)省金融辦批準(zhǔn)開業(yè)，系廣東省農(nóng)墾集團(tuán)公司控股的省級國有小額貸款公司。

2017年北京南海子麋鹿苑第一季度的平均游客量為1 210人，第二季度的平均游客量為1 799人。通過比較北京南海子麋鹿苑麋鹿第一季度和第二季度皮質(zhì)醇水平(圖3)，我們發(fā)現(xiàn)：第二季度整體皮質(zhì)醇水平高于第一季度，與第二季度游客量增高趨勢相同，但第一季度存在較多高應(yīng)激水平離群值，綜合每日激素水平折線圖分析，我們發(fā)現(xiàn)3月13日和17日糞樣皮質(zhì)醇含量較高，這2 d正好是植樹節(jié)期間麋鹿苑游客量較多。

2.2 春季麋鹿糞樣中皮質(zhì)醇含量與游客量的相關(guān)性

例如，在《燕子》一課教學(xué)中，小學(xué)語文教師首先可以引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行文章閱讀，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行文章結(jié)構(gòu)的分析，鼓勵學(xué)生自主將文章中生動的詞句以及成語等勾畫出來，并鼓勵學(xué)生根據(jù)所閱讀的內(nèi)容展開仿寫，描寫其他的小動物，如小老虎、小狗以及企鵝等，整個仿寫練習(xí)中，可以加深學(xué)生對語文知識的理解，同時(shí)還能夠引導(dǎo)學(xué)生掌握更多的寫作技巧，因此通過閱讀篇章引導(dǎo)學(xué)生展開仿寫與續(xù)寫對于提升小學(xué)生的寫作能力具有重要意義。

所有數(shù)據(jù)經(jīng)過糞便干物質(zhì)校正。采用 Moreira 等的迭代方法計(jì)算每只個體的糞便皮質(zhì)醇基值水平。具體方法為：去除每個個體糞便皮質(zhì)醇高于 2 SD 的值，所得均值即為該個體的基值。糞便皮質(zhì)醇濃度表示為 mean±SE。所有數(shù)據(jù)在做統(tǒng)計(jì)分析前進(jìn)行正態(tài)檢驗(yàn)。使用Excel 2010對數(shù)據(jù)進(jìn)行整理及作圖，并通過SPSS 18.0分別對麋鹿糞樣中的皮質(zhì)醇激素含量與當(dāng)日客流量，以及麋鹿糞樣中的皮質(zhì)醇激素含量與前一日客流量進(jìn)行相關(guān)性分析(personal correlation analysis)，檢驗(yàn)設(shè)為雙尾檢驗(yàn)，顯著性水平設(shè)置為α=0.05。

表1 麋鹿糞樣皮質(zhì)醇含量與前一日游客量的相關(guān)性

表2 麋鹿糞樣皮質(zhì)醇含量與當(dāng)天游客量的相關(guān)性

我們發(fā)現(xiàn)，前一日客流量與皮質(zhì)醇水平正相關(guān)，即客流量越大皮質(zhì)醇水平越高，當(dāng)日客流量與皮質(zhì)醇水平不具有相關(guān)性。

3 討論

野生動物的應(yīng)激生理狀態(tài)是機(jī)體應(yīng)對各種生存脅迫因子而產(chǎn)生的一種生理適應(yīng)，應(yīng)激反應(yīng)可對機(jī)體健康產(chǎn)生廣泛的影響，過高或過低的應(yīng)激狀態(tài)都不利于動物的生存適應(yīng)，過低的應(yīng)激水平表明動物不能對各種應(yīng)激源做出及時(shí)有效的反應(yīng)，而過高的應(yīng)激狀態(tài)又會損害動物正常的生理活動，甚至引發(fā)疾病。

動物的性類固醇激素能反映其繁殖生理狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體繁殖生理機(jī)能異常時(shí)，動物體內(nèi)的性類固醇激素分泌水平會呈現(xiàn)波動并表達(dá)于糞便。任何過高或過低的糞樣性類固醇激素值，表明該麋鹿個體的繁殖生理狀態(tài)可能偏離了正常值范疇，其偏離程度是其繁殖生理狀態(tài)的直接反應(yīng)，以此作為診斷該個體繁殖生理狀況的依據(jù)之一。

人為干擾主要包括動物棲息地的破壞[15-16]、城市化[17-18]以及游客干擾[13，19-20]等。其中游客對動物體造成的影響是當(dāng)前動物保護(hù)、動物福利關(guān)注的熱點(diǎn)問題。與血樣相比，糞樣內(nèi)的皮質(zhì)醇激素水平可以更準(zhǔn)確地反映動物的實(shí)際應(yīng)激性，但是由于胃腸的蠕動時(shí)間較長，食物在消化道中停留一段時(shí)間，使得糞樣中的激素從分泌至排出往往有一定時(shí)間的延遲性[21-22]。對于麋鹿而言，從吃下食物到排糞約需1 d左右時(shí)間，其分泌的皮質(zhì)醇激素在糞樣中排出需要1 d左右的延遲。

本研究結(jié)果顯示：糞樣中的皮質(zhì)醇變化均與前一日的游客量顯著性相關(guān)，而與當(dāng)日客流量的相關(guān)性則不明顯，即表示糞樣中的皮質(zhì)醇存在1 d左右的延遲性。這一點(diǎn)與李駿[23]、劉娟等[24]、于小杰等[25]、崔媛媛等[11]對于大熊貓的研究結(jié)果相一致。