薯蕷粥對2型糖尿病大鼠肝臟糖異生的影響

羅宗婷　龐書勤　周建　陳芳　洪雪珮　陳錦秀　葛莉　戴燕鈴　李霞　王雅立

〔摘要〕 目的 觀察薯蕷粥對2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus， T2DM）大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase， PEPCK）、葡萄糖-6-磷酸酶（glucose-6-phosphatase， G6Pase）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein， CRP）和脂聯(lián)素（adiponectin， APN）等與肝臟糖異生相關(guān)指標(biāo)的變化，從肝臟糖異生角度探討薯蕷粥的降糖機制，為薯蕷粥的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。方法 60只Wistar大鼠隨機分為空白組10只和造模組50只。造模組采用高糖高脂飼料聯(lián)合腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素（streptozotocin， STZ）制備T2DM大鼠模型，將造模成功的40只大鼠隨機分為模型組、薯蕷粥組、二甲雙胍組和聯(lián)合治療組，各組10只。每組給予相應(yīng)藥物連續(xù)灌胃給藥6周后，全自動生化分析儀檢測空腹血糖（fasting blood glucose， FBG）;ELISA檢測血清TNF-α、IL-6、CRP和APN含量;RT-qPCR檢測PEPCK和G6Pase基因（mRNA）表達(dá);免疫組化檢測PEPCK和G6Pase蛋白表達(dá)。結(jié)果 與空白組比較，模型組大鼠FBG顯著升高（P<0.01）;血清TNF-α、IL-6、CRP 水平上升，APN 水平下降（P<0.01）;肝組織PEPCK、G6Pase mRNA及蛋白表達(dá)均增加（P<0.01）。與模型組比較，薯蕷粥組、二甲雙胍組和聯(lián)合治療組FBG顯著降低（P<0.01）;血清TNF-α、IL-6、CRP水平下降，APN水平上升（P<0.05）;肝組織PEPCK、G6Pase mRNA及蛋白表達(dá)均減少（P<0.01）;且聯(lián)合治療組較薯蕷粥組應(yīng)用效果更優(yōu)（P<0.05）。結(jié)論 薯蕷粥能夠降低T2DM大鼠FBG水平，其作用機制可能與下調(diào)T2DM大鼠血清TNF-α、IL-6、CRP水平和上調(diào)APN水平，進而減少肝組織PEPCK、G6Pase mRNA及蛋白的表達(dá)，減弱肝臟糖異生有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 2型糖尿病;肝臟糖異生;薯蕷粥;空腹血糖

〔中圖分類號〕R285.5? ? ? ?〔文獻標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.01.009

〔Abstract〕 Objective To observe the effects of yam gruel on phosphoenolpyruvate carboxykinase （PEPCK）， glucose-6-phosphatase （G6Pase）， tumor necrosis factor-α （TNF-α）， interleukin-6 （IL-6）， C-reactive protein （CRP）， adiponectin （APN） and other indicators related to hepatic gluconeogenesis in rats with type 2 diabetes（T2DM）， and to explore the hypoglycemic mechanism of yam gruel from the perspective of hepatic gluconeogenesis， so as to provide a scientific basis for the clinical application of yam gruel. Methods 60 Wistar rats were randomly divided into the control group （n=10） and model groups （n=50）. Rats in model groups were fed with high-sugar/high-fat diet， and combined with an intraperitoneal injection of low-dose streptozotocin （STZ） to induce T2DM rats model. T2DM rats were selected and randomly divided into the model group， the yam gruel group， the metformin group， and the combined treatment group. Ten rats in each group. After 6 weeks of continuous gavage of the corresponding drug in each group， an automatic biochemical analyzer was used to detect fasting blood glucose （FBG） levels. ELISA kits were used to detect the concentrations of serum TNF-α， IL-6， CRP and APN. The mRNA expressions of PEPCK and G6Pase were detected by RT-qPCR. The protein expressions of PEPCK and G6Pase were detected by immunohistochemical. Results Compared with the control group， the FBG levels in the model group were significantly increased （P<0.01）， the serum levels of TNF-α， IL-6 and CRP were increased while the serum levels of APN were decreased in the model group （P<0.01）， both mRNA and protein levels of PEPCK and G6Pase in the liver tissues were significantly elevated in the model group （P<0.01）. Compared with the model group， the FBG levels were significantly decreased in the yam gruel group， the metformin group and the combined treatment group （P<0.01）， the serum levels of TNF-α， IL-6 and CRP were decreased， while the serum levels of APN were increased in the yam gruel group， the metformin group and the combined treatment group （P<0.05）， both mRNA and protein levels of PEPCK and G6Pase in the liver tissues were significantly decreased in the yam gruel group， the metformin group and the combined treatment group （P<0.01）. And the combined treatment group showed better efficacy than the yam gruel group （P<0.01）. Conclusion Yam gruel has an effect on lowering FBG in T2DM rats， and its mechanism may be related to the down-regulation of serum TNF-α， IL-6， CRP， and the up-regulation of APN levels in T2DM rats， and then reducing the expressions of mRNA and protein levels of PEPCK and G6pase to inhibit excessive hepatic gluconeogenesis.

〔Keywords〕 type 2 diabetes; hepatic gluconeogenesis; yam gruel; fasting blood glucose

糖尿病是當(dāng)前威脅人類健康最主要的慢性非傳染性疾病之一。據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟統(tǒng)計，2019年全球糖尿病患者達(dá)4.63億，中國糖尿病患病人數(shù)約1.16億，其中2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus， T2DM）所占比例超過90%[1-2]。T2DM發(fā)病率高，并發(fā)癥多而重，給患者、家庭及社會帶來沉重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)和照護負(fù)擔(dān)[3-5]。糖代謝紊亂是T2DM重要的病理基礎(chǔ)，其中肝臟糖異生增強是其最明顯的特點[6]。已有文獻報道，T2DM患者及模型動物體內(nèi)普遍存在肝臟過度糖異生[7-8]。肝臟糖異生異常活躍時，肝糖輸出量急劇增加，導(dǎo)致FBG升高。最新研究發(fā)現(xiàn)，腸道菌群的變化與肝臟糖異生密切相關(guān)[9]。在T2DM患者及模型動物中，腸道益生菌相對豐度下降，血清炎性因子腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein， CRP）等釋放增加，通過PI3K/Akt/FoxO1或AMPK途徑直接促進糖異生關(guān)鍵酶PEPCK和G6Pase的表達(dá)，使肝臟糖異生增強[10-11]?？梢?，從腸道菌群的角度干預(yù)肝臟糖異生將成為T2DM防治的新靶點。

飲食是腸道菌群結(jié)構(gòu)的主要影響因素之一[12]，同時也是糖尿病管理最為重要的基礎(chǔ)措施。中醫(yī)藥膳是特殊的飲食干預(yù)，具有藥食同源的雙重療效。薯蕷粥是張錫純所著《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》中的經(jīng)典藥膳方[13]，課題組前期研究顯示，薯蕷粥能夠促進T2DM患者及大鼠模型腸道內(nèi)雙歧桿菌的生長、增加短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids， SCFAs）的含量，降低血糖水平[14-16]，但其具體降糖機制尚不清楚。本研究在前期研究基礎(chǔ)上，觀察薯蕷粥對T2DM大鼠肝臟糖異生關(guān)鍵酶（PEPCK、G6Pase）mRNA、蛋白及TNF-α、IL-6、CRP、脂聯(lián)素（adiponectin， APN）和空腹血糖（fasting blood glucose， FBG）的影響，進一步分析其降糖機制，為薯蕷粥的臨床應(yīng)用及推廣提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1? 實驗動物

健康雄性Wistar大鼠60只，SPF級，體質(zhì)量（150±10） g，購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心[許可證號：SYXK（閩）2014-0005]，每籠5只，每日交替照明12 h，室溫為（25±2） ℃，濕度保持55%±5%。普通飼料由福建中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供;高脂高糖飼料（配方如下：10.0%豬油、15.0%蔗糖、4%膽固醇、10%蛋黃粉、0.3%膽酸鹽、60.7%基礎(chǔ)飼料）由閩侯吳氏實驗動物貿(mào)易有限公司提供，輻照后使用。

1.2? 藥材及主要試劑

生懷山藥由課題組人員從河南焦作訂購，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院專家鑒定，整個實驗過程中使用的生懷山藥的量一次性購買后放置冰箱冷藏保存。STZ（美國Sigma公司）;檸檬酸、檸檬酸鈉（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）;鹽酸二甲雙胍（中美上海施貴寶制藥有限公司）;PEPCK抗體（Immunoway公司）;G6Pase抗體（Sabbiotech公司）;DNA提取試劑盒，TNF-α、IL-6、CRP、APN酶聯(lián)免疫試劑盒（杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司）。

1.3? 主要儀器

九陽多功能料理機（九陽股份有限公司）;AU5811全自動生化分析儀（美國貝克曼公司）;脫水機（深圳達(dá)科為醫(yī)療科技有限公司）;病理切片機（深圳達(dá)科為醫(yī)療科技有限公司）;DNA擴增儀（美國ABI公司）;熒光定量PCR儀（澳大利亞Corbett公司）;ELX808型酶聯(lián)免疫檢測儀（美國BIO-TEK公司）。

1.4? 造模及干預(yù)

1.4.1? 動物造模及分組? 60只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機選取10只作為空白組，給予普通飼料喂養(yǎng);其余50只作為造模組，給予高脂高糖飼料喂養(yǎng)。6周后禁食過夜，次日清晨用電子天平稱量大鼠體質(zhì)量，造模組以25 mg/kg的劑量，腹腔注射2次1%STZ溶液（間隔2 d）;空白組同步腹腔注射相同劑量的檸檬酸緩沖液。注射72 h后，經(jīng)尾靜脈采血，以非同日2次FBG≥11.1 mmol/L為T2DM大鼠成模標(biāo)準(zhǔn)[17]。

本次研究造模成功40只，成模率為80%。造模成功的大鼠再根據(jù)最后一次FBG值的高低進行編號，采用隨機數(shù)字表法隨機分為模型組、薯蕷粥組、二甲雙胍組和聯(lián)合治療組，每組10只。

1.4.2? 薯蕷粥的制備? 參照《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》中薯蕷粥的制作方法，并結(jié)合前期研究用量制備薯蕷粥[13-14]。每日取上述生懷山藥150 g，去皮后剩下125 g，切片、入料理機，加水50 mL打成糊，250 mL涼水調(diào)入，中火煮沸，30 s后再文火煮沸，后再間隔30 s，連煮3次，過程中不間斷地輕輕攪拌，最后成粥250 mL，薯蕷濃度為0.5 g/mL，冷卻至37 ℃使用。

1.4.3? 干預(yù)方法? 干預(yù)期間，各組大鼠均以普通飼料飼養(yǎng)，自由進食、飲水，每日早上9時灌胃1次，持續(xù)給藥6周?？瞻捉M和模型組給予生理鹽水灌胃，薯蕷粥組給予薯蕷粥灌胃，二甲雙胍組給予二甲雙胍藥液灌胃，聯(lián)合治療組給予薯蕷粥與二甲雙胍混合物灌胃，灌胃劑量為15 mL/（kg·d）。其中，大鼠二甲雙胍給藥量按照100 mg/（kg·d）計算[18]。

1.5? 標(biāo)本采集

灌胃6周結(jié)束后，大鼠禁食不禁水12 h，2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，用真空采血管抽取各組大鼠腹主動脈血10 mL，一份保留全血用于FBG檢測，一份離心后取血清于-80 ℃保存，用于TNF-α、IL-6、CRP、APN檢測。取血后，迅速用無菌手術(shù)刀解剖大鼠，取肝臟組織100～200 mg，用4 ℃磷酸鹽緩沖液冰上漂洗3遍，無菌濾紙吸干后，一份放入做好標(biāo)記的1.5 mL EP管，投入液氮中速凍，再轉(zhuǎn)移至

-80 ℃冰箱保存，用于PEPCK、G6Pase mRNA檢測;一份固定于4%多聚甲醛溶液，用于PEPCK、G6Pase蛋白檢測。

1.6? 指標(biāo)檢測

1.6.1? PEPCK、G6Pase mRNA檢測? RT-qPCR檢測肝臟組織中PEPCK、G6Pase mRNA的相對表達(dá)量。從-80 ℃冰箱取出凍存的肝臟組織，研磨溶解后根據(jù)RNA提取試劑盒說明，提取樣本總RNA，并對其進行濃度和純度的檢測。在NCBI數(shù)據(jù)庫內(nèi)查找大鼠PEPCK mRNA序列和G6Pase mRNA序列，運用Primer Premier 5.0設(shè)計目標(biāo)基因和內(nèi)參基因的特異性引物，Oligo 6.0檢驗其特異性，引物序列見表1。根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明，合成cDNA第一鏈;采用7500實時熒光定量PCR系統(tǒng)進行定量PCR的擴增和檢測，RT-qPCR反應(yīng)條件如下：94 ℃預(yù)變性30 s，94 ℃變性5 s，60 ℃退火延伸34 s，共40個循環(huán)。記錄各樣本及GAPDH CT值，采用 2-△△Ct方法計算基因相對表達(dá)量。

1.6.2? PEPCK、G6Pase蛋白檢測? 免疫組化檢測肝臟組織中PEPCK、G6Pase蛋白的相對表達(dá)量。操作步驟具體如下：肝臟組織經(jīng)4%多聚甲醛固定后→包埋、切片→石蠟切片脫蠟至水→抗原修復(fù)（檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液pH 6.0，高壓沸騰2 min）→阻斷內(nèi)源性過氧化物酶（3%過氧化氫溶液，室溫避光孵育25 min）→血清封閉（3% BSA，室溫封閉30 min）→加一抗（PEPCK和G6Pase的稀釋比例均為1∶100，4 ℃孵育過夜）→加二抗（HRP標(biāo)記，室溫孵育50 min）→DAB顯色（陽性為棕黃色）→復(fù)染細(xì)胞核（蘇木素復(fù)染3 min）→脫水封片→采集圖像并用Image-Pro Plus 6.0軟件進行分析，計算陽性細(xì)胞表達(dá)率。

1.6.3? TNF-α、IL-6、CRP、APN檢測? 參照ELISA試劑盒說明書，采用全自動酶標(biāo)儀檢測各組大鼠血清中TNF-α、IL-6、CRP、APN含量。

1.6.4? FBG檢測? 采用全自動生化分析儀測各組大鼠FBG水平。

1.7? 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 25.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析。以“x±s”表示計量資料結(jié)果。多組間比較，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布采用單因素方差分析，進一步兩兩比較時，方差齊采用LSD檢測，方差不齊采用Dunnett's T3檢測，不符合正態(tài)分布采用秩和檢驗。檢驗設(shè)定為P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 大鼠一般情況比較

在繼續(xù)飼養(yǎng)及給藥過程中，空白組大鼠毛發(fā)白凈有光澤，自主活動正常;其他各組大鼠體形消瘦，精神萎靡、自主活動減少，毛發(fā)臟亂、發(fā)黃，攝食量、飲水量及尿液/糞便排出量均顯著增加。

2.2? 各組大鼠FBG比較

灌胃6周后，與空白組比較，模型組大鼠FBG顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，薯蕷粥組、二甲雙胍組和聯(lián)合治療組大鼠FBG顯著降低（P<0.01）;且聯(lián)合治療組大鼠FBG較薯蕷粥組降低更加明顯（P<0.01）。見表2。

2.3? 各組大鼠血清TNF-α、IL-6、CRP、APN比較

灌胃6周后，與空白組比較，模型組大鼠血清TNF-α、IL-6、CRP水平顯著上升（P<0.01），APN水平明顯下降（P<0.01）;與模型組比較，薯蕷粥組、二甲雙胍組和聯(lián)合治療組大鼠血清TNF-α、IL-6、CRP水平有效降低，同時APN水平被升高（P<0.05）;且聯(lián)合治療組較薯蕷粥組應(yīng)用效果更優(yōu)（P<0.05）。見表3。

2.4? 各組大鼠肝組織PEPCK、G6Pase mRNA比較

灌胃6周后，與空白組比較，模型組大鼠肝組織PEPCK、G6Pase mRNA表達(dá)水平顯著上升（P<0.01）;與模型組比較，薯蕷粥組、二甲雙胍組和聯(lián)合治療組大鼠肝組織PEPCK、G6Pase mRNA表達(dá)水平均降低（P<0.01）;且聯(lián)合治療組、二甲雙胍組大鼠PEPCK、G6Pase mRNA表達(dá)水平較薯蕷粥組更低（P<0.01）。見表4。

2.5? 各組大鼠肝組織PEPCK、G6Pase蛋白比較

灌胃6周后，與空白組比較，模型組大鼠肝組織PEPCK、G6Pase蛋白表達(dá)水平顯著上升（P<0.01）;與模型組比較，薯蕷粥組、二甲雙胍組和聯(lián)合治療組大鼠肝組織PEPCK、G6Pase蛋白表達(dá)水平顯著下降（P<0.01）;且聯(lián)合治療組大鼠PEPCK、G6Pase蛋白表達(dá)水平較薯蕷粥組更低（P<0.05）。見表5，圖1。

3 討論

炎癥反應(yīng)參與了T2DM及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展過程[19]。2016年的一項系統(tǒng)評價顯示[20]，TNF-α、IL-6、CRP水平的異常升高及APN水平的異常減少可增加T2DM發(fā)生的風(fēng)險。本實驗結(jié)果顯示，薯蕷粥的干預(yù)能夠降低T2DM大鼠血清TNF-α、IL-6、CRP水平，升高APN水平，并且與二甲雙胍藥物聯(lián)合應(yīng)用時效果更優(yōu)。薯蕷粥是經(jīng)典藥膳方，組成為一味生懷山藥。課題組前期實驗及多項研究證明[14-16，21-22]，山藥干預(yù)具有調(diào)節(jié)腸道菌群的作用。益生菌及其代謝產(chǎn)物SCFAs已被證實能夠減少TNF-α、IL-6、CRP等炎性因子的釋放[23-24]。另外，蔣嵐等[25]臨床試驗發(fā)現(xiàn)，在應(yīng)用二甲雙胍和阿卡波糖的基礎(chǔ)上，補充益生菌治療6周顯著提高了T2DM患者血清APN濃度?？梢?，薯蕷粥可能通過調(diào)節(jié)腸道益生菌參與炎癥反應(yīng)的緩解過程。同時有研究表明，二甲雙胍能減少炎性因子TNF-α、IL-6的表達(dá)，在一定程度上發(fā)揮抗炎作用[26]。因此，薯蕷粥與二甲雙胍結(jié)合應(yīng)用時，抗炎作用將進一步加強;而且更加符合臨床T2DM患者在服藥的基礎(chǔ)上輔助食用薯蕷粥這一實際情況。

肝臟糖異生是機體葡萄糖利用及重大器官供能的主要來源。但是在T2DM等病理情況下，肝臟糖異生增強，血糖濃度升高。而PEPCK和G6Pase是肝臟糖異生的2個關(guān)鍵性限速酶[27]，PEPCK和G6Pase過度表達(dá)會使肝臟糖異生的速度加快，促進肝葡萄糖的輸出量提高。本實驗結(jié)果顯示，薯蕷粥的干預(yù)能顯著降低肝組織PEPCK、G6Pase的基因和蛋白表達(dá)水平，且配合二甲雙胍藥物干預(yù)時降低更明顯。分析原因可能與下調(diào)了T2DM大鼠血清TNF-α、IL-6、CRP水平和上調(diào)APN水平有關(guān)。可能機制[10-11]：（1）TNF-α、IL-6、CRP等炎性因子的增加會干擾IRS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，抑制PI3K和Akt的磷酸化，進一步降低FoxO1蛋白磷酸化水平，從而上調(diào)PEPCK和G6Pase的表達(dá)，導(dǎo)致肝臟過度糖異生。（2）TNF-α、IL-6、CRP水平上升和APN水平下降均可降低AMPK活性，進而增加PEPCK和G6Pase的表達(dá)量，使肝臟糖異生增強。2018年的一項動物研究發(fā)現(xiàn)[28]，藥用植物可能通過緩解炎癥反應(yīng)對肝臟糖異生起到抑制作用。T2DM的常用藥物二甲雙胍亦以抑制肝臟糖異生為其主要降糖機制[29]。薯蕷粥由藥食兩用的生懷山藥熬制而成，當(dāng)與二甲雙胍聯(lián)合治療時，將協(xié)同增強其抑制肝臟過度糖異生的能力。

降低FBG是T2DM的主要治療目標(biāo)之一。本實驗結(jié)果顯示，薯蕷粥干預(yù)6周能夠有效降低FBG，這與周建[30]、陳芳[14]研究結(jié)果相一致。薯蕷粥僅由一味山藥熬制而成，山藥及其各藥理成分在調(diào)節(jié)糖代謝異常中被廣泛應(yīng)用與研究。實驗發(fā)現(xiàn)[31]，山藥提取物薯蕷皂苷以60 mg/kg的劑量連續(xù)干預(yù)8周能夠明顯降低T2DM出現(xiàn)的高血糖，進一步探討，其分子機制與下調(diào)PEPCK、G6Pase的基因表達(dá)水平有關(guān)。該結(jié)論為山藥以肝臟糖異生為作用靶點發(fā)揮降糖作用提供了可能。上述實驗也反應(yīng)出薯蕷粥的潛在優(yōu)勢，本研究薯蕷粥組每只大鼠每日灌胃薯蕷粥5 mL（含生懷山藥2.5 g）即可下調(diào)PEPCK、G6Pase蛋白的表達(dá)，降低FBG水平?？赡芤驗槭硎氈嗵峁┑氖巧剿幹械亩喾N成分，多種成分之間存在相輔相成的疊加效果，有待于今后分析薯蕷粥的有效成分、做進一步研究。二甲雙胍作為治療T2DM的一線藥物，也被發(fā)現(xiàn)能夠通過下調(diào)PEPCK和G6Pase的表達(dá)，降低血糖水平[29]。以上研究均提示，抑制肝臟過度糖異生有助于降低FBG。薯蕷粥與二甲雙胍均對肝臟過度糖異生具有抑制作用，聯(lián)合使用將使FBG下降程度更加明顯。

綜上所述，本實驗研究表明，小劑量薯蕷粥連續(xù)干預(yù)6周即可有效降低T2DM大鼠FBG水平，并且推斷其機制可能與下調(diào)T2DM大鼠血清TNF-α、IL-6、CRP水平和上調(diào)APN水平，進而減少肝組織PEPCK、G6Pase的基因和蛋白表達(dá)，抑制肝臟糖異生有關(guān)。同時發(fā)現(xiàn)，薯蕷粥聯(lián)合二甲雙胍藥物可協(xié)同增強其降糖作用，符合臨床T2DM患者在服用二甲雙胍等降糖藥的基礎(chǔ)上輔助食用薯蕷粥的實際情況，為薯蕷粥更好的臨床應(yīng)用與推廣提供了實驗依據(jù)。

參考文獻

[1] International Diabetes Federation. IDF diabetes atlas 9th edition（2019）[EB/OL].（2019-12-01）[2020-02-18]https：//diabetesatlas.org/en/.

[2] CHO N H， SHAW J E， KARURANGA S， et al. IDF diabetes atlas： global estimates of diabetes prevalence for 2017 and projections for 2045[J]. Diabetes Research and Clinical Practice， 2018， 138： 271-281.

[3] HARDING J L， PAVKOV M E， MAGLIANO D J， et al. Global trends in diabetes complications： A review of current evidence[J]. Diabetologia， 2019， 62（1）： 3-16.

[4] CHAPMAN D， FOXCROFT R， DALE-HARRIS L， et al. Insights for care： The healthcare utilisation and cost impact of managing type 2 diabetes-associated microvascular complications[J]. Diabetes Therapy， 2019， 10（2）： 575-585.

[5] MENG J， CASCIANO R， LEE Y C， et al. Effect of diabetes treatment-related attributes on costs to type 2 diabetes patients in a real-world population[J]. Journal of Managed Care & Specialty Pharmacy， 2017， 23（4）： 446-452.

[6] 鄭鐵生，鄢盛愷.臨床生物化學(xué)檢驗[M].3版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：111-132.

[7] 王春怡，高? 穎，李? 艷，等.黃芪散有效部位群對Ⅱ型糖尿病大鼠肝糖原及糖異生酶的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2018，29（1）：1-7.

[8] 陳亞瓊，王鵬飛，劉? 浥.基于肝糖異生的降血糖藥物研發(fā)進展[J]. 藥學(xué)進展，2017，41（10）：733-741.

[9] HU T G， WEN P， SHEN W Z， et al. Effect of 1-deoxynojirimycin isolated from mulberry leaves on glucose metabolism and gut microbiota in a streptozotocin-induced diabetic mouse model[J]. Journal of Natural Products， 2019， 82（8）： 2189-2200.

[10] 宗久榆，孫蕊心，于? 敏.脂肪組織對糖異生的調(diào)控作用[J].生命的化學(xué)，2017，37（5）：842-848.

[11] 羅? 旋，譚? 偉，劉? 軍，等.慢性炎癥加重肥胖小鼠肝糖代謝紊亂機制初探[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2017，42（7）：855-859.

[12] 聶啟興，胡婕倫，鐘亞東，等.幾類不同食物對腸道菌群調(diào)節(jié)作用的研究進展[J].食品科學(xué)，2019，40（11）：321-330.

[13] 張錫純.醫(yī)學(xué)衷中參西錄合訂本[M].石家莊：河北人民出版社， 1977：73-74.

[14] 陳? 芳.從腸道益生菌-IL-10/START3通路探討薯蕷粥對T2DM大鼠的降糖機制[D].福州：福建中醫(yī)藥大學(xué)，2019.

[15] 盧楨妤.薯蕷粥對T2DM大鼠腸道內(nèi)短鏈脂肪酸、脂多糖的影響[D].福州：福建中醫(yī)藥大學(xué)，2018.

[16] 龐書勤，辛惠明，劉玲玉，等.薯蕷粥對2型糖尿病腸道內(nèi)雙歧桿菌及血糖影響研究[J].中國實用內(nèi)科雜志，2017，37（3）：247-250.

[17] 李? 才.人類疾病動物模型的復(fù)制[M].北京：人民衛(wèi)生出版社， 2008：350-354.

[18] 徐淑云，卞如鐮，陳? 修.藥理實驗方法學(xué)第四版[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：1861.

[19] VERMA S， MATHEW V， FARKOUH M E. Targeting inflammation in the prevention and treatment of type 2 diabetes： Insights from CANTOS[J]. Journal of the American College of Cardiology， 2018， 71（21）： 2402-2404.

[20] LIU C X， FENG X， LI Q， et al. Adiponectin， TNF-α and inflammatory cytokines and risk of type 2 diabetes： A systematic review and meta-analysis[J]. Cytokine， 2016， 86： 100-109.

[21] SUN Y P， LIU T， SI Y P， et al. Integrated metabolomics and 16S rRNA sequencing to investigate the regulation of Chinese yam on antibiotic-induced intestinal dysbiosis in rats[J]. Artificial Cells， Nanomedicine， and Biotechnology， 2019， 47（1）： 3382-3390.

[22] ZHANG N， LIANG T S， JIN Q， et al. Chinese yam （Dioscorea opposita Thunb.） alleviates antibiotic-associated diarrhea， modifies intestinal microbiota， and increases the level of short-chain fatty acids in mice[J]. Food Research International， 2019， 122： 191-198.

[23] KIM Y A， KEOGH J B， CLIFTON P M. Probiotics， prebiotics， synbiotics and insulin sensitivity[J]. Nutrition Research Reviews， 2018， 31（1）： 35-51.

[24] LI M， VAN ESCH B C A M， HENRICKS P A J， et al. The anti-inflammatory effects of short chain fatty acids on lipopolysaccharide-or tumor necrosis factor α-stimulated endothelial cells via activation of GPR41/43 and inhibition of HDACs[J]. Frontiers in Pharmacology， 2018， 9： 533.

[25] 蔣? 嵐，陳? 果，高陳林，等.益生菌對T2DM患者腸道菌群和脂聯(lián)素的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2018，28（11）：84-87.

[26] 劉? 超，高慧婕，楊強強，等.二甲雙胍對脂多糖致炎性反應(yīng)小鼠的抗炎作用[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2019，39（9）：1248-1251.

[27] 陳金成，張? 吟.AMPK與肝臟糖異生研究進展[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2017，34（7）：1062-1067.

[28] LIU Q L， ZHANG L Y， ZHANG W， et al. Inhibition of NF-κB reduces renal inflammation and expression of PEPCK in type 2 diabetic mice[J]. Inflammation， 2018， 41（6）： 2018-2029.

[29] 蘇? 青.二甲雙胍降糖作用的分子機制[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志， 2016，32（9）：716-722.

[30] 周? 建.基于AMPK通路探討薯蕷粥對T2DM大鼠胰腺自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ、p62的影響[D].福州：福建中醫(yī)藥大學(xué)，2019.

[31] XU L N， YIN L H， JIN Y， et al. Effect and possible mechanisms of dioscin on ameliorating metabolic glycolipid metabolic disorder in type-2-diabetes[J]. Phytomedicine， 2020， 67： 153139.