FGA、HSP90α、SPP1聯(lián)合對HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的早期診斷價值

朱東東 孫孟甜

肝癌是第六大常見癌癥，也是癌癥相關(guān)死亡的第三大原因[1]。肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占原發(fā)性肝癌的90%以上，其發(fā)病率正在全球范圍內(nèi)上升[2]。慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是肝硬化和肝細(xì)胞癌的主要原因[3]。纖維蛋白原α鏈(fibrinogen alpha chain,FGA)作為血栓的主要成分之一，具有止血的主要功能[4]。Gustavo Ferrín等[5]發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌的患者血清中FGA含量顯著增高。熱休克蛋白90-Alpha(heat shock protein 90-Alpha,HSP90α)作為分子伴侶調(diào)節(jié)特定的靶蛋白[6]，在多種癌癥中，HSP90α過表達(dá)(包括在HCC中)并且可以在腫瘤細(xì)胞外分泌[7]。分泌磷蛋白1(secreted phosphoprotein 1,SPP1)在導(dǎo)致Ⅰ型免疫的途徑中是必需的[8]。Li S等[9]發(fā)現(xiàn)評估了SPP1表達(dá)水平與臨床特征之間的關(guān)系，并表明SPP1是一種潛在的生物標(biāo)志物。本研究旨在探討FGA、HSP90α、SPP1聯(lián)合對HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的早期診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2016年5月至2018年5月我院收治的早期HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者70例為腫瘤組，其中男性32例，女性38例，年齡41～76歲；平均年齡(55.68±14.79)歲；腫瘤直徑1.3～6.2 cm，平均直徑為(4.11±2.31)cm；TNM分期：Ⅱ期35例，Ⅲ期35例。肝硬化患者70例為肝硬化組，其中男性41例，女性29例，年齡45～68歲；平均年齡(54.28±7.47)歲；其中原發(fā)性膽汁性肝硬化37例、病毒肝炎性肝硬化33例。70例早期HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者和70例肝硬化患者均經(jīng)我院AFP、影像學(xué)等檢查診斷，術(shù)后經(jīng)病理檢查證實。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重心、肝、腎功能損害者；②長期使用皮質(zhì)類固醇激素及免疫抑制劑者；③患有精神疾病者；④患有其他癌癥者；⑤HCV-DNA陽性者。同時，納入2016年5月至2018年5月至我院體檢的健康體檢者70例為對照組，其中男性35例，女性35例，年齡37～71歲；平均年齡(52.54±13.84)歲。各組一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，可納入此次分析。受試者均簽署知情同意書。

1.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗

采取早期HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者70例、肝硬化患者70例和健康體檢者70例的肘前靜脈血6 ml，進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗。FGA ELISA試劑盒購自上海振譽生物科技有限公司(貨號：SEB154Mu-1)。HSP90α ELISA試劑盒購自上海恒斐生物科技有限公司(貨號：CSB-E13462h-1)。SPP1 ELISA試劑盒購自孟成科技有限公司(貨號：P100371)。根據(jù)相應(yīng)說明書檢測3組人員血清FGA、HSP90α、SPP1的表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

PRISM 7.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，組間比較采用t檢驗。應(yīng)用受試者工作特征(ROC)曲線下面積(AUC)分析FGA、HSP90α、SPP1檢測早期HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的臨床診斷價值。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者、肝硬化患者和健康體檢者血清中FGA、HSP90α、SPP1的表達(dá)量

HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者血清中FGA、HSP90α、SPP1的表達(dá)量均顯著高于肝硬化患者(P<0.05)和健康體檢者(P<0.05)。肝硬化患者血清中FGA的表達(dá)量高于健康體檢者(P<0.05)。血清中HSP90α,SPP1的表達(dá)量在肝硬化患者和健康體檢者中無顯著差異(P>0.05)。見表1。

表1 HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者和健康體檢者血清中FGA、HSP90α、SPP1的表達(dá)量

2.2 HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者和健康體檢者血清中FGA、HSP90α、SPP1的鑒別診斷效能

FGA的ROC曲線下面積為0.82±0.06(95%CI 0.708～0.9387)，以FGA的陽性臨界值62.52 ng/ml，其診斷靈敏度為87%，特異度為83%；HSP90α的ROC曲線下面積為0.84±0.06(95%CI 0.7369～0.9543)，以HSP90α的陽性臨界值12.72 ng/ml，其診斷靈敏度為80%，特異度為87%；SPP1的ROC曲線下面積為0.80±0.06(95%CI 0.6807～0.9304)，以SPP1的陽性臨界值71.11 ng/ml，其診斷靈敏度為83%，特異度為83%。見圖1和表2。

圖1 HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者和健康體檢者血清中FGA、HSP90α、SPP1的ROC曲線

2.3 血清中FGA、HSP90α、SPP1聯(lián)合診斷HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌

患有HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的為真陽性，未患有HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的為真陰性，血清中FGA、HSP90α、SPP1聯(lián)合對HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的診斷的的靈敏度為88%(44/50)，特異度為90%(45/50)，準(zhǔn)確度為89%(89/100)。見表3。

3 討論

肝癌包括多種原發(fā)性肝癌(從肝臟起源的癌癥)以及繼發(fā)性肝癌(從其他器官起源的癌癥)[10]。肝細(xì)胞癌是最常見的原發(fā)性肝癌類型，也是世界上最致命的癌癥之一[11]。原發(fā)性HCC通常在早期沒有任何癥狀，到臨床表現(xiàn)出現(xiàn)時，大多數(shù)患者已進(jìn)入終末期，腫瘤進(jìn)展迅速且具有侵襲性[12]。因此，HCC篩查和診斷至關(guān)重要。目前使用HCC生物標(biāo)志物甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)進(jìn)行肝細(xì)胞癌的診斷已經(jīng)將近40年。然而，對于早期HCC患者，單獨使用血清AFP的診斷價值約為40%；對于15～30%的HCC患者，AFP水平可能仍為陰性(<25 ng/ml)[13]。因此，非常需要開發(fā)用于診斷和治療的敏感生物標(biāo)志物。

最近蛋白質(zhì)組學(xué)方法的顯著進(jìn)步，包括檢測限和靈敏度的提高，對于從癌癥蛋白質(zhì)組中鑒定HCC臨床應(yīng)用的新型生物標(biāo)志物模式具有很大的潛力[14]。Zhou Y等[15]整合組學(xué)策略追蹤蛋白質(zhì)表達(dá)并發(fā)現(xiàn)HCC患者血清中HSP90α表達(dá)異常。本研究發(fā)現(xiàn)HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者血清中HSP90α的表達(dá)量顯著高于健康體檢者(P<0.05)。HSP90α是HSP90的細(xì)胞溶質(zhì)同種型之一[16]。靜息正常細(xì)胞不分泌HSP90α，除非被環(huán)境壓力引發(fā)[17]。已知的環(huán)境脅迫涉及許多實體瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移[18]。本研究中，早期HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者與健康體檢者的HSP90α的靈敏度和特異度分別為80%和 87%。在這種情況下，HSP90的分泌在癌癥治療中具有重要意義，提示它在預(yù)測癌癥中起著天然的作用。

慢性HBV感染是HCC發(fā)展的獨立危險因素，并且還能夠調(diào)節(jié)肝臟中的基因表達(dá)和蛋白質(zhì)合成，從而產(chǎn)生特定的表達(dá)模式。FGA的增加與肝臟疾病有關(guān)[19]。本研究發(fā)現(xiàn)HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者血清中FGA的表達(dá)量顯著高于健康體檢者(P<0.05)。作為細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，F(xiàn)GA的沉積可以用于隔離腫瘤區(qū)域的補體成分[20]，或作為支持生長因子結(jié)合并促進(jìn)血管生成和腫瘤細(xì)胞生長過程中細(xì)胞粘附，增殖和遷移的支架[21]。本研究中，早期HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者與健康體檢者的FGA的靈敏度和特異度分別為87%和 83%。因此，F(xiàn)GA在診斷HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌中具有較高的靈敏度和特異度。

SPP1，也稱為骨橋蛋白，是1種分泌的非膠原蛋白，具有調(diào)節(jié)幾種細(xì)胞行為和調(diào)節(jié)白細(xì)胞遷移的能力[22]。本研究發(fā)現(xiàn)HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者血清中SPP1的表達(dá)量顯著高于健康體檢者(P<0.05)。有證據(jù)表明[23]，SPP1的沉默實際上可以抑制PI3K-AKT信號通路，從而預(yù)防小鼠卵巢癌的生長，而PI3K屬于脂質(zhì)激酶家族，其具有整合信號并將信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至控制細(xì)胞增殖、遷移和代謝的多種信號傳導(dǎo)途徑的能力，提示SPP1具1個潛在的促癌因子。早期HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者與健康體檢者的SPP1的靈敏度和特異度分別為83%和83%。顯示了其較好的診斷效能。

在本研究中，發(fā)現(xiàn)血清中FGA、HSP90α、SPP1聯(lián)合對HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的診斷的的靈敏度為88%，特異度為90%，準(zhǔn)確度為89%。相比于單一血清分子對HBV相關(guān)早期肝細(xì)胞癌的診斷，多分子的聯(lián)合診斷在靈敏度和特異度上均有較高的提升。至于聯(lián)合診斷，相比于黎曉武等[24]通過血清GP73、HSP27聯(lián)合AFP診斷HBV相關(guān)早期肝細(xì)胞癌的靈敏度的86%，本研究靈敏度達(dá)到了88%。翟璐通過GP73聯(lián)合SCCA-IgMIC診斷HBV相關(guān)早期肝細(xì)胞癌的靈敏度和特異度分別為61.40%和91.46%[25]。盡管其具有極高的特異度，但是較低的靈敏度暗示了GP73與SCCA-IgMIC的聯(lián)合目前還不適應(yīng)于臨床對HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的診斷。此外，F(xiàn)GA、HSP90α、SPP1聯(lián)合的ELISA方法成本低，患者血漿易于獲得，重復(fù)性強，普及性高，所需的儀器也僅為酶標(biāo)儀。

然而，本研究仍然存在不足：①盡管血清HSP90α在檢測肝癌的能力方面比AFP的敏感性和特異性更高，但是血清中FGA、HSP90α、SPP1聯(lián)合對HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的診斷效能未能與AFP比較。②FGA與乙醇攝入密切相關(guān)，但是本研究因樣本有限未將HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌患者按乙醇攝入量進(jìn)行分組。

綜上所述，血清中FGA、HSP90α、SPP1的表達(dá)量可作為診斷早期HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的潛在標(biāo)志。