Myc誘導(dǎo)的核抗原53在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與病理特征的關(guān)系

司 華 閆 燦 曾憲煥

結(jié)直腸癌發(fā)病率和死亡率的都比較高，也是影響居民健康的重大常見疾病[1-2]。要改善結(jié)直腸癌患者的預(yù)后，對(duì)結(jié)直腸癌的病理特征影響因素進(jìn)行分析具有重要價(jià)值[3]。現(xiàn)代研究表明結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展是多基因參與的多步驟多階段的復(fù)雜過程，涉及到DNA損傷修復(fù)、基因突變、原癌基因激活、抑癌基因失活、表觀遺傳學(xué)改變等多種因素，但沒有明確任何1種單一因素是結(jié)直腸癌的直接病因[4]。原癌基因myc家族廣泛參與介導(dǎo)細(xì)胞周期與細(xì)胞增殖，從而調(diào)控下游多種基因的表達(dá)[5]。Myc誘導(dǎo)的核抗原53(mina53)位于3號(hào)染色體(3q12.1)，包含有12個(gè)外顯子，翻譯起始點(diǎn)位于外顯子2，終止密碼子位于外顯子[6]。mina53可編碼1種分子量為53 kD的蛋白質(zhì)，定位于細(xì)胞核，可能是c-myc下游的1個(gè)直接靶基因[7]。mina53的異常表達(dá)與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及其預(yù)后密切相關(guān)[8-9]，但是在結(jié)直腸癌中的報(bào)道還比較少見。本文具體探討了mina53在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與病理特征的關(guān)系，希望能夠明確mina53在結(jié)直腸癌中的作用價(jià)值?，F(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

2017年9月至2020年5月選擇在本院初治的結(jié)直腸癌患者341例作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：具有完整的臨床資料；均經(jīng)手術(shù)后病理診斷證實(shí)為結(jié)直腸癌，且保存有完整的病理標(biāo)本；患者年齡20～75歲；本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了此次研究；術(shù)前均未行放化療及免疫治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床與病理資料缺乏者；標(biāo)本資料無法進(jìn)行免疫組化分析者；合并其他部位惡性腫瘤者。

在341例患者中，其中男性189例，女性152例；年齡33～74歲，其中年齡≤60歲99例，>60歲242例；腫瘤直徑≤5 cm 141例，>5 cm 200例；分化程度：高分化143例，中分化67例，低分化131例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期211例，Ⅲ～Ⅳ期130例；漿膜浸潤112例；腫瘤部位：結(jié)腸167例，直腸174例。

1.2 mina53表達(dá)檢測

取所有患者的病灶組織標(biāo)本(病灶組)與癌旁正常結(jié)直腸黏膜組織(距腫瘤邊緣≥5 cm，HE染色鏡下證實(shí)為正常結(jié)直腸黏膜腺體組織，癌旁組)。所有患者經(jīng)4%甲醛固定，于濃度梯度酒精中脫水，二甲苯中浸潤觀察組織塊至透明為止。用石蠟Ⅰ(<60 ℃，1 h)浸潤、石蠟Ⅱ(60 ℃，2 h)包埋后制成石蠟組織塊，用石蠟切片機(jī)5 μm厚度進(jìn)行連續(xù)切片。采用免疫組化法檢測mina53表達(dá)水平，mina53兔抗人多克隆抗體購自美國Epitomics公司。細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和(或)胞核在鏡下出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為陽性細(xì)胞，在高倍鏡下(×400倍)觀察，陽性染色強(qiáng)度：0級(jí)(0分)：無細(xì)胞染色；1級(jí)：淡黃色顆粒或團(tuán)塊；2級(jí)棕黃色顆粒或團(tuán)塊；3級(jí)棕褐色顆粒或團(tuán)塊。陽性細(xì)胞數(shù)比例：0級(jí)：陽性細(xì)胞數(shù)≤10%；1級(jí)：陽性細(xì)胞數(shù)11%～50%；2級(jí)：陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%；3級(jí)：陽性細(xì)胞數(shù)>75%。陽性標(biāo)記分?jǐn)?shù)=陽性染色強(qiáng)度評(píng)分×陽性細(xì)胞數(shù)評(píng)分，≥2分表示為表達(dá)陽性。

1.3 病理特征與預(yù)后調(diào)查

調(diào)查所有患者的病理特征，包括性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、臨床分期、漿膜浸潤、腫瘤部位等。隨訪到2020年7月1日，統(tǒng)計(jì)患者的死亡與生存情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 mina53表達(dá)陽性情況對(duì)比

病灶組mina53表達(dá)陽性率為55.1%(188/341)，顯著高于癌旁組的19.6%(67/341)(χ2=91.704，P<0.05)。

2.2 mina53表達(dá)與結(jié)直腸癌病理特征的關(guān)系

mina53表達(dá)陽性與結(jié)直腸癌患者年齡、性別、部位、直徑無相關(guān)性(P>0.05)，與分化程度、臨床分期、漿膜浸潤有相關(guān)性(P<0.05)，見表1。

表1 mina53表達(dá)與結(jié)直腸癌病理特征的關(guān)系/例

2.3 預(yù)后情況

在341例患者中，所有患者都得到了隨訪，隨訪到2020年7月1日，隨訪死亡48例，死亡率14.1%。

2.4 影響因素分析

在341例患者中，以隨訪死亡作為因變量，以分化程度、臨床分期、漿膜浸潤、mina53表達(dá)陽性作為自變量，多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析顯示：分化程度、臨床分期、漿膜浸潤、mina53表達(dá)陽性為導(dǎo)致患者預(yù)后死亡的主要因素(P<0.05)，見表2。

表2 影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的多因素分析

3 討論

結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，隨著外科手術(shù)及輔助治療手段的不斷更新改進(jìn)，該病患者的預(yù)后已經(jīng)有了很大的改善，但是5年生存率很難超過20%[10]，為此尋找臨床上更好的生物標(biāo)志物來早期發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌以及評(píng)估患者預(yù)后具有重要意義。

結(jié)直腸癌的發(fā)生與發(fā)展是包括腫瘤細(xì)胞與宿主間質(zhì)和宿主細(xì)胞間的一系列復(fù)雜步驟組成的結(jié)果，涉及到新生血管形成、腫瘤細(xì)胞的黏附改變、細(xì)胞增殖改變、腫瘤細(xì)胞的遷移、細(xì)胞外基質(zhì)降解增加等[11]。mina53主要定位于細(xì)胞核，部分蛋白集中于核仁區(qū)。Mina53蛋白第128-271位的氨基酸殘基表現(xiàn)為JmjC結(jié)構(gòu)域形態(tài)，常和DNA或者染色體結(jié)合區(qū)伴行，呈B折疊結(jié)構(gòu)，能參與調(diào)節(jié)染色體重構(gòu)[12-13]。當(dāng)前也有研究顯示包含JmjC結(jié)構(gòu)域的蛋白是多種去甲基化酶的催化結(jié)構(gòu)域，可能參與介導(dǎo)組蛋白脫甲基化的過程，從而可參加機(jī)體組蛋白表觀遺傳學(xué)調(diào)節(jié)過程[14-15]。本研究顯示病灶組的mina53表達(dá)陽性率為55.1%，顯著高于癌旁組的19.6%(P<0.05)，表明結(jié)直腸癌患者伴隨有mina53的高表達(dá)。最新研究顯示mina53可作為結(jié)腸癌一種相對(duì)特異性的腫瘤標(biāo)記物，定位于結(jié)腸癌細(xì)胞胞核內(nèi)，可激活下游靶基因的表達(dá)，靶基因的激活又可上調(diào)mina53的表達(dá)，從而形成惡性循環(huán)[16-17]。不過mina53在人類不同類型組織細(xì)胞中的表達(dá)具有選擇性，而這種差異性表達(dá)決定了其發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、凋亡以及衰老的不同的生理特性和功能，同樣在不同類型腫瘤組織中的表達(dá)情況也是存在差異的，這種差異也決定了mina53在腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展過程中發(fā)揮著迥然不同的作用[18-19]。

目前要降低結(jié)直腸癌患者的死亡率，關(guān)鍵在于提高早期結(jié)直腸癌的診斷率，同時(shí)要尋找到影響患者預(yù)后的影響，從而尋找更加有效的治療方法[20]?，F(xiàn)代研究表明，結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展是1個(gè)復(fù)雜過程，慢性炎癥可導(dǎo)致結(jié)直腸癌微環(huán)境改變，促使細(xì)胞異常分泌某些細(xì)胞因子，進(jìn)而促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生進(jìn)展[21]。本研究顯示mina53表達(dá)陽性與結(jié)直腸癌患者的年齡、性別、部位、直徑無相關(guān)性(P>0.05)，與分化程度、臨床分期、漿膜浸潤有相關(guān)性(P<0.05)；多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析顯示分化程度、臨床分期、漿膜浸潤、mina53表達(dá)陽性為導(dǎo)致患者預(yù)后死亡的主要因素(P<0.05)。當(dāng)前研究顯示mina53大量表達(dá)于結(jié)腸癌細(xì)胞胞核，分化程度不同的結(jié)腸癌均高表達(dá)mina53，而且侵襲性強(qiáng)的組織中mina53的表達(dá)率顯著增高[22]。mina53也可激活Rac的表達(dá)，從而參與對(duì)ERK通路的調(diào)節(jié)，也可參與細(xì)胞與基質(zhì)間的黏附和細(xì)胞偽足的形成，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)，促進(jìn)細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移[23]。本研究也存在一定的不足，免疫組化檢測中也存在一定的污染，假陽性率較高；病例選擇可能存在偏差，調(diào)查內(nèi)容相對(duì)比較少，將在后續(xù)研究中深入探討。

總之，mina53在結(jié)直腸癌中呈現(xiàn)高表達(dá)表達(dá)狀況，與患者的分化程度、臨床分期、漿膜浸潤等病理特征顯著相關(guān)，也是影響患者預(yù)后的重要因素。